一种金果榄种苗的扦插繁殖方法与流程

1.本发明属于种苗繁育技术领域，具体涉及一种金果榄种苗的扦插繁殖方法。


背景技术：

2.金果榄，中药名，为防己科植物青牛胆或金果榄的干燥块根，秋、冬二季采挖，除去须根，洗净，晒干，在我国华中、华东、华南及西南各地均有分布。现阶段药材来源主要为野生，野生药材采挖对资源破坏严重，供应量逐年下降，资源性问题突出。
3.人工栽培因为繁育种苗数量少、周期长、方式单一，导致种苗单价高，种植积极性低，严重制约产业发展。因此，为满足市场需求，需建立有效的金果榄种苗的快速繁殖方法，从而稳定生产优质金果榄种苗，弥补市场空缺，推动产业发展。
4.目前，金果榄种苗繁育以种子繁殖和块根繁殖为主，组培繁殖和扦插繁殖鲜见。种子繁殖所得种子苗抗病性强、生长势旺，但繁殖所需的金果榄种子获取困难，野外金果榄植株雌雄比为1：50，雌株藤龄4年以上方可开花，导致雌花数量少、结果量低，并且1kg鲜果洗净可得种子约为100g，出种率低，近年1kg鲜果价格为1000～1200元，种子未见售卖。块根繁殖所得块根苗出苗不整齐、生产成本高，所用块根经产地加工后即为金果榄药材，药材折干率约为2：1，近年金果榄药材市场价为250～300元/kg，块根价格为125～150元/kg，而1株块根苗所需块根约为20g，种植密度为8000株/亩，亩种植所需块根约为160kg，费用为20000～24000元。组培繁殖所得组培苗抗病性弱、生长势差、繁育周期长，繁育周期以从取材开始到成苗为止计算，需要9～11个月。扦插繁殖所得扦插苗可继承母株优良性状，但是，现有专利文献公开的金果榄扦插繁殖方法，所用材料为木质化或半木质化藤条或茎段，植株正常生长情况下需要1年以上才能达到标准，繁育周期长，繁殖系数低，另外，有的还需要制作特定结构的沙床，不利于推广使用。


技术实现要素：

5.因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的金果榄扦插繁殖方法需要以木质化或半木质化藤条为材料，繁育周期长，取材受限、繁殖系数低，有的还需要采用特定结构的沙床、不利于推广应用等缺陷，从而提供一种金果榄种苗的扦插繁殖方法。
6.为此，本发明提供如下技术方案：
7.本发明提供一种金果榄种苗的扦插繁殖方法，包括如下步骤：
8.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄茎段，修剪叶片，备用；
9.扦插处理：将外植体置于生根剂中浸泡，扦插于插床中，使茎段与插床接触；
10.繁育管理：扦插后维持见干见湿状态，防止日光直射。
11.可选的，所述生根剂中包括浓度为125-300mg/l的萘乙酸，包括浓度为125-300mg/l的吲哚丁酸；
12.优选的，所述生根剂中包括浓度为200-250mg/l的萘乙酸，包括浓度为200-250mg/l的吲哚丁酸；
13.和/或，所述生根剂中还包括浓度为1.0ml/l-1.2ml/l的乙醇。
14.可选的，所述外植体在生根剂中浸泡时间为15-20min，生根剂没过外植体茎段2/3以上。
15.可选的，所述外植体的茎段长度留取1.5～2.0cm。
16.可选的，所述外植体的茎段上包含至少一个腋芽；
17.和/或，将所述外植体茎段上的每片叶片剪去1/3-1/2。
18.可选的，所述扦插深度为1.0-1.5cm。
19.可选的，所述插床包括体积比为(8-10)：(1-1.2)：(1-1.2)的基质，珍珠岩和蛭石。
20.可选的，所述基质为泥炭土。
21.典型非限定性的，所述泥炭土为品氏泥炭土，有机质成分高达98％，含少量微量元素，纤维粗细度为10～30mm，ph为5.5～6.5，湿度为35％～55％。
22.可选的，所述插床为穴盘插床。
23.可选的，所述扦插时间为全年。
24.本发明技术方案，具有如下优点：
25.现有技术金果榄种苗的繁育方法一般是借鉴果树等领域的传统技术经验，选用半木质化或木质化藤蔓制备外植体，存在取材时间受限，繁育系数低，繁育周期长等缺陷，本发明打破传统思维，提供的金果榄种苗的扦插繁殖方法，创造性的选择一年生非木质化藤条进行修剪制备外植体，成功繁育出金果榄种苗。与半木质化的茎段和半木质化的藤条相比，该种材料具有取材时间早、繁育周期短，取材时间不受限、全年可取材，繁殖系数高等优点。具体表现在：
①
6月份建设的插穗圃，当年9月份藤条生长情况便可满足取材要求，而半木质化茎段和半木质化藤条则需于次年6月份方可进行取材；
②
在保持取材时间一致前提下，60cm的藤条可取得非木质化的茎段数量约为28～32个，半木质化的茎段数量约为7～8个，半木质化的藤条数量约为3～4个；
③
采穗圃建成3个月后，往后开始非木质化的茎段则全年均可取材，而半木质化的茎段或半木质化的藤条则因藤龄限制需采取间歇性轮采的形式。本发明提供的金果榄种苗的扦插繁殖方法，通过对生根剂的限定，能够诱导金果榄非木质化的外植体茎段生根，60天后的生根率达到88.89％、平均根数达到9.29条、平均根长可达3.40cm，生根情况良好。
26.此外，现有专利文献公开的金果榄扦插繁殖方法，未详细跟踪记录插条生根移栽后的种苗长势，不利于种苗质量的综合评估，可能会出现以下问题：藤条会因地上部过长，新芽萌发点距地面较远导致种苗倒伏；半木质化茎段或藤条因生长年限长，内源毒素积累，后期生长易发生病害；半木质化茎段或藤条因藤龄大于3年，插条生根成苗后跳过营养生长阶段，直接处于生殖生长阶段，种苗抗性较低，移栽后成活率较低。本发明提供的金果榄种苗的扦插繁殖方法，所提供的金果榄种苗的快速繁殖方法，该方法所繁育的金果榄种苗在适宜的生长环境条件下，6个月后新出藤条的平均高度为17.14cm，3cm处平均茎粗为1.42mm，具成熟叶片2～3片，幼嫩叶片4～6片，芽点5～8个，无明显病害或虫害发生，长势良好。现有技术中未对生根后金果榄插条的地上部分生长情况作跟踪调查，不利于对金果榄种苗移栽后在田间生长趋势的预估和种苗质量的综合评价，种苗质量优劣与地上生长情况和地下生根情况指标相关，生根率仅部分说明地下生根情况，地上生长情况包含株高、冠幅、茎粗、叶片数等，地下生根情况包含生根率、根长、根粗、根数等，详实跟踪记录以上所提
指标可精准评判种苗质量，提高后续植株生长预估期望。
27.本发明提供的金果榄种苗的扦插繁殖方法，所述插床可以为穴盘插床，无需定制特定结构的插床，便于推广使用。
附图说明
28.为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
29.图1是本发明实施例和对比例的根系生长情况对比图；
30.图2是本发明实施例1提供的种苗移栽后6个月长势图。
具体实施方式
31.提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
32.实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
33.实施例1
34.本实施例提供了一种金果榄种苗的快速扦插繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
35.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
36.生根剂母液配制：分别取25g的萘乙酸和25g的吲哚丁酸，用100ml乙醇溶解后置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
37.生根剂配制：分别取生根剂母液10ml置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
38.插床装配：按照体积比例为基质(品牌为丹麦品氏)：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
39.外植体处理：将外植体置于配制的生根剂(250mg/l naa+250mg/l iba)中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
40.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
41.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机取五棵种苗拍照观察其生根情况，参见图1，统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
42.实施例2
43.本实施例提供了一种金果榄种苗的快速扦插繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
44.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
45.生根剂母液配制：分别取30g的萘乙酸和30g的吲哚丁酸，用100ml乙醇溶解后置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
46.生根剂配制：分别取生根剂母液10ml置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
47.插床装配：按照体积比例为基质(品牌为丹麦品氏)：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
48.外植体处理：将外植体置于配制的生根剂(300mg/l naa+300mg/l iba)中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
49.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
50.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
51.实施例3
52.本实施例提供了一种金果榄种苗的快速扦插繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
53.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
54.生根剂母液配制：分别取20g的萘乙酸和20g的吲哚丁酸，用100ml乙醇溶解后置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
55.生根剂配制：分别取生根剂母液10ml置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
56.插床装配：按照体积比例为基质(品牌为丹麦品氏)：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
57.外植体处理：将外植体置于配制的生根剂(200mg/l naa+200mg/l iba)中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
58.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
59.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
60.实施例4
61.本实施例提供了一种金果榄种苗的快速扦插繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
62.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
63.生根剂母液配制：分别取24g的萘乙酸和26g的吲哚丁酸，用100ml乙醇溶解后置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
64.生根剂配制：分别取生根剂母液10ml置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
65.插床装配：按照体积比例为基质(品牌为丹麦品氏)：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
66.外植体处理：将外植体置于配制的生根剂(240mg/l naa+260mg/l iba)中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
67.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
68.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
69.实施例5
70.本实施例提供了一种金果榄种苗的快速扦插繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
71.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
72.生根剂母液配制：分别取27g的萘乙酸和25g的吲哚丁酸，用100ml乙醇溶解后置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
73.生根剂配制：分别取生根剂母液10ml置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
74.插床装配：按照体积比例为基质(品牌为丹麦品氏)：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
75.外植体处理：将外植体置于配制的生根剂(270mg/l naa+250mg/l iba)中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
76.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
77.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
78.实施例6
79.本实施例提供了一种金果榄种苗的快速扦插繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石
市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
80.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
81.生根剂母液配制：分别取12.5g的萘乙酸和12.5g的吲哚丁酸，用100ml乙醇溶解后置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
82.生根剂配制：分别取生根剂母液10ml置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
83.插床装配：按照体积比例为基质(品牌为丹麦品氏)：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
84.外植体处理：将外植体置于配制的生根剂(125mg/l naa+125mg/l iba)中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
85.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
86.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机取五棵种苗拍照观察其生根情况，参见图1，统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
87.实施例7
88.本实施例提供了一种金果榄种苗的快速扦插繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
89.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
90.生根剂母液配制：分别取25g的萘乙酸和10g的吲哚丁酸，用100ml乙醇溶解后置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
91.生根剂配制：分别取生根剂母液10ml置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
92.插床装配：按照体积比例为基质(品牌为丹麦品氏)：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
93.外植体处理：将外植体置于配制的生根剂(250mg/l naa+100mg/l iba)中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
94.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
95.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
96.对比例1
97.本对比例提供了一种金果榄种苗的快速繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
98.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
99.插床装配：按照体积比例为基质：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质(品牌为丹麦品氏)、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
100.外植体处理：将外植体置于清水中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
101.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
102.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机取五棵种苗拍照观察其生根情况，参见图1，统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
103.对比例2
104.本对比例提供了一种金果榄种苗的快速扦插繁殖方法，2021年9月，在湖北省黄石市阳新县白沙镇平原村开展相关实验，具体步骤包括：
105.外植体制备：选取一年生非木质化的金果榄藤条，用枝剪将腋芽与形态学上端相连的茎段剪离，同时将叶片剪去一半，形态学下端的茎段长度留取1.5～2.0cm，切口斜切，备用；
106.生根剂母液配制：取2.5g的萘乙酸和2.5g的吲哚丁酸，用100ml乙醇溶解后置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
107.生根剂配制：分别取生根剂母液10ml置于1l容量瓶中，用纯净水定容至刻度线，摇匀，即得；
108.插床装配：按照体积比例为基质(品牌为丹麦品氏)：珍珠岩：蛭石＝8：1：1的要求，分别取对应用量的基质、珍珠岩和蛭石，充分混匀后装入到72孔pe穴盘中，均匀喷施直至湿透，备用；
109.外植体处理：将外植体置于配制的生根剂(25mg/l naa+25mg/liba)中浸泡15min，液面需没过外植体茎段的2/3；
110.繁育管理：扦插后立即用喷雾器均匀喷施穴盘直至湿透，清理叶面脏物，管理期间保持水分，维持见干见湿状态，搭建遮阳网，防止日光直射；
111.扦插60天后，将金果榄杯苗冲洗干净，随机统计10棵种苗的生根率、平均根数和平均根长。
112.表1实施例与对比例生根指标比较
113.名称生根剂浓度生根率/％平均根数/条平均根长/cm对比例1053.851.712.67对比例225mg/l naa+25mg/l iba33.332.890.95实施例1250mg/l naa+250mg/l iba88.899.293.40实施例2300mg/l naa+300mg/l iba82.058.063.25实施例3200mg/l naa+200mg/l iba75.227.153.10实施例4240mg/l naa+260mg/l iba83.469.173.32实施例5270mg/l naa+250mg/l iba86.528.352.98
实施例6125mg/l naa+125mg/l iba63.644.002.87实施例7250mg/l naa+100mg/l iba58.959.053.20
114.从上表中数据可知，将外植体置于一定激素浓度的生根剂中浸泡处理，可有效提高外植体的生根率、平均根数和平均根长，通过梯度浓度筛选试验得出现阶段最优生根剂浓度为250mg/l naa+250mg/l iba，该激素浓度下所处理外植体60天后生根率为88.89％，平均根数为9.29条，平均根长为3.40cm，随机取实施例1提供的种苗进行移栽，移栽生长6个月后跟踪调查可知，新出藤条的平均高度为17.14cm，3cm处平均茎粗为1.42cm，具成熟叶片2～3片，幼嫩叶片4～6片，芽点5～8个，无明显病害或虫害，移栽后6个月长势图见图2。另外，从对比例1和2的对比结果可知，如果生根剂的浓度选择不合适的话，还会抑制生根。
115.显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。