一种常温猪精液稀释剂

1.本发明涉及人工授精领域，具体涉及一种常温猪精液稀释剂。


背景技术：

2.随着人工授精技术的广泛应用，对种公猪精液品质的要求也越来越高，那么对猪精保存的技要求也越来越高，猪精液保存的效果好坏一直是限制优秀种公猪发挥优势的重要因素。
3.目前稀释剂价格较贵，增加了养殖成本，如何改善精液稀释剂的配方，从而让猪精液品质在常温状态下保存时间更久，并且降低人工授精的成本，是当今养猪事业发展待攻克的难题。现有的常用的猪精液稀释液基础配方主要成分包括葡萄糖、柠檬酸钠、氯化钾、edta-2na、三羟甲基甲烷、柠檬酸、碳酸氢钠、青霉素、链霉素等。
4.海藻寡糖（dso）有多种生物学功能，降低血糖、血脂，调整肠道健康，解毒抗凝血、抗炎、免疫调节等作用，已经在医药、食品添加剂、饲料添加剂等领域得到广泛应用。深海鱼油（dsfo）含有丰富的epa（二十碳五烯酸）、dha（二十二碳六烯酸），可以调节血脂，清理血栓，防止血液凝固，营养大脑、改善记忆，改善视力维护视网膜等功能，已经在婴儿奶粉、医药等领域得到广泛应用。牛奶多肽（mp）具有高生理活性，可有效美白肌肤，令肌肤紧致嫩滑，同时富含l色氨酸、安神助眠的功效，已经在美容、改善睡眠领域得到了应用。
5.现有技术并未报道海藻寡糖（dso）、深海鱼油（dsfo）和牛奶多肽（mp）可以应用于到猪精液稀释液，提高猪精保存的保存质量。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种常温猪精液稀释剂。
7.根据本发明的常温猪精液稀释剂包括基础成分以及活性成分，其中，所述活性成分包括海藻寡糖、深海鱼油和牛奶多肽。
8.根据本发明的常温猪精液稀释剂，包括基础成分以及活性成分，其中，所述基础成分包括葡萄糖、柠檬酸钠、氯化钾、edta-2na、三羟甲基甲烷、柠檬酸、碳酸氢钠、青霉素和链霉素。
9.根据本发明的常温猪精液稀释剂，其中，基于1l所述常温猪精液稀释剂，所述基础成分包括葡萄糖27.5g、柠檬酸钠6.9g、 edta-2na 2.35g、碳酸氢钠1.0g、氯化钾0.75g、 柠檬酸2.9g、tris5.65g、青霉素0.6g、链霉素1.0g。
10.根据本发明的常温猪精液稀释剂，其中，基于1l所述常温猪精液稀释剂，所述海藻寡糖的浓度为0.01~10克/升，所述深海鱼油的浓度为 0.001~1毫克/升，所述牛奶多肽的浓度为 0.1~5克/升。
11.根据本发明的常温猪精液稀释剂，其中，基于1l所述常温猪精液稀释剂，海藻寡糖的浓度为0.1g/l，所述深海鱼油的浓度为0.01mg/l，所述牛奶多肽的浓度为0.05g/l。
12.根据本技术的技术方案，首次将海藻寡糖（dso）、深海鱼油（dsfo）和牛奶多肽（mp）
应用于到猪精液稀释液，现有技术并未报道相关应用。
13.根据本发明的常温猪精液稀释剂，活性组分包括dso、dsfo和mp，能够保护猪精子膜完整性，维持猪精子活力、顶体功能，最终提高猪精子的受精能力。利用本发明的常温猪精液稀释剂，猪精液常温（17-20
°
c）保存时间10天以上，精子活力80%以上，畸形率低于10%，精子顶体完整性高于85.8%。此猪精液稀释保存剂在低温保藏（4-8
°
c）中效果更佳。同时，该稀释剂使用方便，适于广泛推广，对促进生猪产业健康持续发展具有重要意义。
附图说明
14.图1显示常温下dso和dsfo对保存过程中猪精子活力的影响；图2显示常温下dso和dsfo对保存过程中猪精子畸形率的影响；图3显示常温下dso和dsfo对保存过程中猪精子顶体完整性的影响；图4显示常温下dso、dsfo、mp对保存过程中猪精子活力的影响；图5显示常温下dso、dsfo、mp对保存过程中猪精子畸形率的影响；图6常温下dso、dsfo、mp对保存过程中猪精子畸形率的影响。
具体实施方式
15.本发明的常温猪精液稀释剂包括基础成分以及活性成分，其中，所述活性成分包括海藻寡糖（dso，deep sea seaweed oligosaccharides）、深海鱼油（dsfo，deep sea fish oil）和牛奶多肽（mp，milk peptides）；所述基础成分包括葡萄糖、柠檬酸钠、氯化钾、edta-2na、三羟甲基甲烷、柠檬酸、碳酸氢钠、青霉素和链霉素。
16.根据猪精液稀释保存液的配方，基础成分在1升（1l）稀释保存液里的含量：葡萄糖27.5g，柠檬酸钠6.9g， edta-2na 2.35g，碳酸氢钠1.0g，氯化钾0.75g， 柠檬酸2.9g，tris5.65g， 青霉素0.6g，链霉素1.0g。在基础成分的基础上添加了活性成分海藻寡糖（dso，deep seaweed oligosaccharides）、深海鱼油（dsfo，deep sea fish oil）和牛奶多肽（mp，milk peptides）。海藻寡糖（dso）浓度为0.01~10克/升（g/l），深海鱼油（dsfo） 0.001~1毫克/升（mg/l），牛奶多肽（mp） 0.1~5克/升（g/l）。其中dso浓度0.1g/l最优，dsfo浓度0.01mg/l最优，mp浓度0.05g/l最优。
17.实施例1基础成分在1升（1l）稀释保存液里的含量：葡萄糖27.5g，柠檬酸钠6.9g， edta-2na 2.35g，碳酸氢钠1.0g，氯化钾0.75g， 柠檬酸2.9g，tris5.65g， 青霉素0.6g，链霉素1.0g。
18.在保持常用猪精液稀释保存剂中基础成分固定不变的条件下，优化dso、dsfo和mp：1、优化海藻寡糖（dso）和深海鱼油（dsfo）的含量对精子性状的影响优化海藻寡糖（dso）和深海鱼油（dsfo）的含量（1l稀释保存液）。在基础成分的基础上添加了dso和dsfo，dso设置4个剂量：0.01、 0.1、 1、10克/升（g/l）；dsfo设置4个剂量：0.001、 0.01、 0.1、1毫克/升（mg/l）。同时用市场上常用的猪精液稀释剂作为对照。
19.1.1猪精子活力
如图1所示，常温（17-20
°
c）保存1天（第1天），在基础成分添加了dso和dsfo（试验组）的猪精液稀释液和对照稀释液保存猪精子活力上没有明显差异，猪精子活力都可以达到90%以上；保存第5天，对照稀释液的保存猪精子活力的能力下降显著至83.5%，而试验组猪精液稀释液保存的猪精子活力大于86.2% ；保存到第10天，对照组猪精液稀释液精子活力为77.7%，而试验组猪精液稀释液的精子活力仍保存在81.8%以上。其中，dso浓度0.1g/l最优，dsfo浓度0.01mg/l最优，而且dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）在它们的组合中最优。重复上述试验5次，图中结果显示是5次平均值
±
标准误。dso和 dsfo一起添加[dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）]可以更好的保存猪精子活力，具有协同增效的作用。
[0020]
1.2精子畸形率如图2所示，常温（17-20
°
c）保存1天（第1天），基础成分添加了dso和dsfo的猪精液稀释液（试验组）和对照稀释液保存猪精子畸形率上没有明显差异，猪精子畸形率小于等于8.2%；保存到第10天，对照组猪精液稀释液中精子畸形率为12.4%，而试验组猪精液稀释液中精子畸形率小于9.8%。重复上述试验5次，图中结果显示是5次平均值
±
标准误。dso和 dsfo一起添加[dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）]可以更好的保存猪精子，降低猪精子畸形率，具有协同增效的作用。
[0021]
1.3顶体完整性如图3所示，常温（17-20
°
c）保存1天（第1天），基础成分添加了dso和dsfo的猪精液稀释液（试验组）和对照稀释液保存猪精子顶体完整性上没有明显差异，猪精子顶体完整性都大于90.2%；保存到第10天，对照组猪精液稀释液中精子顶体完整性为81.8%，而试验组猪精液稀释液中顶体完整性大于86.7%。重复上述试验5次，图中结果显示是5次平均值
±
标准误。dso和 dsfo一起添加[dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）]可以更好的保存猪精子，提高猪精子顶体完整性，具有协同增效的作用。
[0022]
2、第二步在第一步的基础上，优化了牛奶多肽的含量（1l稀释保存液）。
[0023]
第一步研究发现了dso最优浓度是0.1g/l，dsfo的最优浓度是0.01mg/l。在基础成分+dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）的基础上添加牛奶多肽（mp），mp设置4个剂量：0.01、 0.05、 0.1、1克/升（g/l）。同时用市场上常用的猪精液稀释剂作为对照。
[0024]
2.1精子活力如图4所示，常温（17-20
°
c）保存1天（第1天），基础成分+dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）+mp的猪精液稀释液（试验组）和对照稀释液保存猪精子活力上没有明显差异，猪精子活力都可以达到89.8%以上；保存第5天，对照稀释液的保存猪精子活力的能力显著下降至82.9%，而试验组的猪精液稀释液保存的猪精子活力》88.3% ；保存到第10天，对照组猪精液稀释液中精子活力为77.5%，而试验组猪精液稀释液中精子活力仍保存在82.4%以上。其中mp浓度0.05g/l最优，而且dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）+ mp（0.05g/l）在它们的组合中最优。重复上述试验5次，图中结果显示是5次平均值
±
标准误。mp、dso和 dsfo一起添加[dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）+ mp（0.05g/l）]可以更好的保存猪精子活力，三者具有协同增效的作用。
[0025]
2.2精子畸形率如图5所示，常温（17-20
°
c）保存1天（第1天），基础成分+dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）+mp的猪精液稀释液（试验组）和对照稀释液保存猪精子畸形率没有明显差异，
猪精子畸形率大约8%；保存到第10天，对照组猪精液稀释液中精子畸形率为12.3%，而试验组猪精液稀释液中精子畸形率低于9.0%。重复上述试验5次，图中结果显示是5次平均值
±
标准误。mp、dso和 dsfo一起添加[dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）+ mp（0.05g/l）]可以更好的保存猪精子，降低猪精子畸形率，三者具有协同增效的作用。
[0026]
2.3猪精顶体完整性如图6所示，常温（17-20
°
c）保存1天（第1天），基础成分+dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）+mp的猪精液稀释液（试验组）和对照稀释液保存猪精顶体完整性没有明显差异，猪精子顶体完整性大于89.8%；保存到第10天，对照组猪精液稀释液中精子顶体完整性为82.1%，而试验组中精子顶体完整性大于87.5%。重复上述试验5次，图中结果显示是5次平均值
±
标准误。mp、dso和 dsfo一起添加[dso（0.1g/l）+ dsfo（0.01mg/l）+ mp（0.05g/l）]可以更好的保存猪精子，提高猪精子顶体完整性，三者具有协同增效的作用。
[0027]
以上实施例仅用于解释本技术的技术方案，不限定本技术的保护范围。