一种铁皮石斛种子无菌播种方法与流程

1.本发明涉及铁皮石斛种子的播种技术领域，具体为铁皮石斛种子无菌播种方法。


背景技术：

2.现有的研究表明，铁皮石斛具有提高机体免疫力、抗肿瘤活性及降血糖作用，铁皮石斛的提取液可减轻脂质过氧化造成的肝损伤，铁皮石斛中8种黄酮碳苷类成分具有抗氧化的功能，铁皮石斛多糖可以增强nk细胞和巨噬细胞的活性，促进脾细胞的增殖，从而由于铁皮石斛独特的药用价值，市场对于铁皮石斛的需求量也逐年增加；
3.野生状态下，铁皮石斛生长缓慢，从开花授粉至果实成熟约需6个月，且由于其花型结构特殊，导致授粉困难，自然条件下所结蒴果极少，铁皮石斛每粒蒴果内有数以万计的种子，但种子细小、没有胚乳，因而无法靠自身储存的养分生长，在野外，蒴果成熟时容易裂开，种子随风飘散，自然繁殖率极低，而目前，运用组织培养技术已实现铁皮石斛的工厂化生产，由于铁皮石斛种子数量庞大，可直接获得大量种苗，而无菌播种是实现种苗高效萌发的基础，现用方法为将成熟的蒴果收集保存于冷藏室中，需要播种时取出，用手术刀片把花蒂一端削平，依次使用酒精和升汞溶液进行浸泡消毒，随后使用无菌水冲洗后，将蒴果剖开取出种子，均匀地散布于萌发培养基上，但是，由于蒴果在冷存、取用、操作过程中难免发生破损，上述消毒方法并不适用于细小且数量庞大的铁皮石斛种子消毒，鉴于铁皮石斛野生资源濒危现状，应采取有效措施最大程度地利用现有资源，才能保证铁皮石斛拥有足够丰富的资源用于植株复壮，且避免长期工厂化育苗导致的种苗性状衰退及药效和生长质量的降低，为此，提出一种铁皮石斛种子无菌播种方法。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种铁皮石斛种子无菌播种方法，以解决上述背景技术中提出的消毒方法不适用，最大程度地利用现有资源，保证铁皮石斛拥有足够丰富的资源用于植株复壮，且避免长期工厂化育苗导致的种苗性状衰退及药效和生长质量的降低问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种铁皮石斛种子无菌播种方法，包括以下步骤：
6.s1、备料采种：先采摘成熟的石斛蒴果，并用清水进行清洗，去除石斛蒴果表面残留的农药和灰尘；
7.s2、破壳取籽：将清洗后的石斛蒴果先放入去皮机内部，通过去皮机运行，破坏石斛蒴果表面使其开裂及破碎，再将开裂的石斛蒴果输入到振筛机内部，通过振筛机振动，实现种子与石斛蒴果的分离；
8.s3、过滤：经s2脱离出来的种子放入温水中浸泡，浸泡过程中加入搅拌器进行充分搅拌，浸泡完成后的种子放入离心机，按照1:1.5的比例添加氯化钠溶液，通过离心机运行对种子进行二次固液分离，并利用过滤器滤除含有细微杂质的氯化钠溶液；
9.s4、第一次溶液杀菌：经s3过滤后的种子放入到搅拌器中，并向搅拌器内部添加多
菌灵溶液，启动搅拌器内部的温感器，在一定温度下，进行充分的搅拌浸泡；
10.s5、第二次溶液杀菌：经s4浸泡后的种子放入到搅拌器中，并向搅拌器内部添加石硫合剂，启动搅拌器内部的温感器，在一定温度下，进行充分的搅拌浸泡；
11.s6、干热处理及培养：经s5浸泡过后的种子，放入热干燥机内部，待干热处理完成后，将种子接种到诱导培养基，并放入人工气候箱中培养。
12.作为本技术方案的进一步优选的：在s1中，石斛蒴果清洗次数不少于三次，在s2中，石斛蒴果经去皮机运行不少于一次，从而有效将石斛蒴果进行破壳处理，振筛机对开裂的石斛蒴果进行30min振动处理，有效进行种子与石斛蒴果的分离作业。
13.作为本技术方案的进一步优选的：在s3中，温水水温为50℃-60℃，搅拌器对种子的搅拌时间为20min-30min，水温搅拌到与室内温度一致时停止搅拌，并将种子再浸泡1-2h。
14.作为本技术方案的进一步优选的：在s3中，氯化钠溶液采用4％的氯化钠溶液配比10-30倍的水，离心机在种子和氯化钠溶液混合后，进行30min的离心处理，且过滤器中的滤网采用200目-300目。
15.作为本技术方案的进一步优选的：在s4中，多菌灵溶液采用50％的多菌灵溶液配比500倍的水，搅拌器在种子和多菌灵溶液混合后，进行1h-2h的恒温搅拌，搅拌形式为定时搅拌，20min一次，一次运行10min。
16.作为本技术方案的进一步优选的：在s5中，石硫合剂将生石灰、硫磺、水按照1:2:10的比例进行配比使用，搅拌器在种子和石硫合剂混合后，进行20min-30min的恒温搅拌，搅拌形式为定时搅拌，20min一次，一次运行10min。
17.作为本技术方案的进一步优选的：在s6中，热干燥机内部温度先预热控制在70℃，放入浸泡后的种子，并静置2-3天，使热干燥机内部温度逐步降至室内恒温，再将种子进行后续接种工作，人工气候箱中温度控制在26-28℃，并在弱光下培养8周。
18.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
19.1、本发明有效防治铁皮石斛种子在生长发育过程中的病虫害，且保护环境无污染，采用温水浸泡和干热处理的消毒方式，提高杀菌效率，在保持稳定性的同时不添加任何激素的使用，从而避免了接种后种子内部激素含量超标的情况，以此降低了优质种子的变异率，提高种子的安全性和生产质量，且通过本发明可以大量处理铁皮石斛的种子，显著增强种质资源的利用率，且本发明的播种方法多为机械设备运行，从而极大的节省人力资源，降低生产成本，提高生产效率；
20.2、本发明相较于已开裂石斛蒴果中的种子，采用未开裂石斛蒴果中的种子，大大提高种子的生长质量，通过温水浸泡后的种子经氯化钠溶液的混合作用下，可以有效防治细菌性的病害，且在多菌灵溶液的浸泡下，可以有效防治铁皮石斛的黄斑病与炭疽病，而在添加的石硫合剂的浸泡下，可以有效防治铁皮石斛的煤污病，从而保障种子的性状及生长质量。
附图说明
21.图1为本发明的铁皮石斛种子无菌播种方法示意图。
具体实施方式
22.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.实施例
24.请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种铁皮石斛种子无菌播种方法，包括以下步骤：
25.s1、备料采种：先采摘成熟的石斛蒴果，并用清水进行清洗，去除石斛蒴果表面残留的农药和灰尘；
26.s2、破壳取籽：将清洗后的石斛蒴果先放入去皮机内部，通过去皮机运行，破坏石斛蒴果表面使其开裂及破碎，再将开裂的石斛蒴果输入到振筛机内部，通过振筛机振动，实现种子与石斛蒴果的分离；
27.s3、过滤：经s2脱离出来的种子放入温水中浸泡，浸泡过程中加入搅拌器进行充分搅拌，浸泡完成后的种子放入离心机，按照1:1.5的比例添加氯化钠溶液，通过离心机运行对种子进行二次固液分离，并利用过滤器滤除含有细微杂质的氯化钠溶液；
28.s4、第一次溶液杀菌：经s3过滤后的种子放入到搅拌器中，并向搅拌器内部添加多菌灵溶液，启动搅拌器内部的温感器，在一定温度下，进行充分的搅拌浸泡；
29.s5、第二次溶液杀菌：经s4浸泡后的种子放入到搅拌器中，并向搅拌器内部添加石硫合剂，启动搅拌器内部的温感器，在一定温度下，进行充分的搅拌浸泡；
30.s6、干热处理及培养：经s5浸泡过后的种子，放入热干燥机内部，待干热处理完成后，将种子接种到诱导培养基，并放入人工气候箱中培养。
31.本实施例中，具体的：在s1中，石斛蒴果清洗次数不少于三次，在s2中，石斛蒴果经去皮机运行不少于一次，从而有效将石斛蒴果进行破壳处理，振筛机对开裂的石斛蒴果进行30min振动处理，有效进行种子与石斛蒴果的分离作业。
32.本实施例中，具体的：在s3中，温水水温为50℃-60℃，搅拌器对种子的搅拌时间为20min-30min，水温搅拌到与室内温度一致时停止搅拌，并将种子再浸泡1-2h。
33.本实施例中，具体的：在s3中，氯化钠溶液采用4％的氯化钠溶液配比10-30倍的水，离心机在种子和氯化钠溶液混合后，进行30min的离心处理，且过滤器中的滤网采用200目-300目。
34.本实施例中，具体的：在s4中，多菌灵溶液采用50％的多菌灵溶液配比500倍的水，搅拌器在种子和多菌灵溶液混合后，进行1h-2h的恒温搅拌，搅拌形式为定时搅拌，20min一次，一次运行10min。
35.本实施例中，具体的：在s5中，石硫合剂将生石灰、硫磺、水按照1:2:10的比例进行配比使用，搅拌器在种子和石硫合剂混合后，进行20min-30min的恒温搅拌，搅拌形式为定时搅拌，20min一次，一次运行10min。
36.本实施例中，具体的：在s6中，热干燥机内部温度先预热控制在70℃，放入浸泡后的种子，并静置2-3天，使热干燥机内部温度逐步降至室内恒温，再将种子进行后续接种工作，人工气候箱中温度控制在26-28℃，并在弱光下培养8周，通过热干燥机对种子一方面起
到除湿干燥的效果，另一方面通过温度的逐步降低，有效保障种子存活的同时细菌的死亡。
37.根据上述技术方案对本方案工作步骤进行总结梳理：本发明有效防治铁皮石斛种子在生长发育过程中的病虫害，且保护环境无污染，通过温水处理有效可以消灭病菌和虫卵，从而减轻病虫害，且温水泡种可以帮助种子快速吸水，激活种子生物活性物质，加快种子发芽，并清除劣质腐变的种子，减轻危害，采用干热处理的方式，通过高温将粘附在种子表面的细菌杀死，并且还可以增加种子的活性，进一步的促进种子萌发，通过上述方式增强种子的抗病毒性，从而确保种子的健康，提高种子的发芽率和存活，以此提高种子的产量；
38.相较于已开裂石斛蒴果中的种子，本发明采用未开裂石斛蒴果中的种子，大大提高种子的生长质量，通过温水浸泡后的种子经氯化钠溶液的混合作用下，可以有效防治细菌性的病害，且在多菌灵溶液的浸泡下，可以有效防治铁皮石斛的黄斑病与炭疽病，而在添加的石硫合剂的浸泡下，可以有效防治铁皮石斛的煤污病，本发明采用温水浸泡和干热处理的消毒方式，提高杀菌效率，在保持稳定性的同时不添加任何激素的使用，从而避免了接种后种子内部激素含量超标的情况，以此降低了优质种子的变异率，提高种子的安全性和生产质量，且通过本发明可以大量处理铁皮石斛的种子，显著增强种质资源的利用率，且本发明的播种方法多为机械设备运行，从而极大的节省人力资源，降低生产成本，提高生产效率。
39.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。