一种促进白木香树产生色酮和/或沉香四醇的方法与流程

1.本发明属于沉香结香技术领域，尤其涉及一种促进白木香树产生色酮和/或沉香四醇的方法。


背景技术：

2.沉香是我国名贵中药，因其具有独特的芳香气味，深得人们喜爱。沉香是瑞香科沉香属植物白木香树受伤后分泌出的树脂沉积而成，健康的白木香不产沉香，自然界的白木香树结香率非常低，因此天然沉香资源稀少。目前的人工促进结香技术大多数采用的是物理干预，包括“砍伤法”、“断枝法”、“凿洞法”等方式，对树体伤害较大，且操作复杂，结香效率低，不利于推广应用。此外，也有一些采用点滴注射结香液的方式促进白木香树结香，需要长期输入结香液，耗时长，结香周期长，并且大部分结香液过分使用植物激素和无机盐伤害刺激白木香结香，严重影响白木香树正常的生长代谢，导致白木香树落叶甚至死亡。因此，目前迫切需要提供一种对白木香树伤害小结香周期短，且结香质量高的方法。


技术实现要素：

3.有鉴于此，本发明的目的在于提供一种促进白木香树产生色酮和/或沉香四醇的方法。本发明提供的方法对白木香树体伤害小，不影响白木香树正常的生长代谢，能够促进白木香产生色酮和/或沉香四醇，缩短白木香树的结香周期。
4.为了实现上述发明目的，本发明提供了一种促进白木香树产生色酮和/或沉香四醇的方法，将碳垫菌ket30的菌液注入白木香树枝干。
5.优选的，所述碳垫菌ket30保存于昆明植物所微生物菌种保藏中心，保藏编号为kumcc 20-0268。
6.优选的，所述菌液od
600
＝0.6-1.2。
7.优选的，所述菌液的注入体积为1-5ml。
8.优选的，所述白木香树龄为3-5年。
9.优选的，所述白木香树枝干直径为6-10cm。
10.优选的，在所述白木香树枝干上钻孔后注入菌液，钻孔间隔为12-15cm。
11.优选的，钻孔数量为3-5孔/枝。
12.优选的，所述菌液注入白木香树枝干后将钻孔封住。
13.优选的，所述碳垫菌ket30接种于马铃薯葡萄糖肉汤培养基中，在27-28℃下发酵12-18天，无菌水稀释后得到菌液。
14.相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：
15.本发明提供了一种促进白木香树产生色酮和/或沉香四醇的方法，将碳垫菌菌液注入白木香树枝干。白木香树在碳垫菌的刺激下，加速产生色酮和/或沉香四醇，白木香树接入碳垫菌菌液3-6个月后，产生了含量丰富的色酮和沉香四醇，有效缩短了白木香结香的周期。并且本发明的方法对树体伤害小，不会影响白木香树的正常生长代谢，适合在实际生
产中推广应用。
附图说明
16.图1白木香树注入碳垫菌菌液；
17.图2注入碳垫菌菌液的白木香树；
18.图3注入碳垫菌菌液后3个月采样。
具体实施方式
19.本发明提供了一种促进白木香树产生色酮和/或沉香四醇的方法，将碳垫菌ket30的菌液注入白木香树枝干。本发明仅采用碳垫菌菌液注入白木香树中，诱导白木香树产生色酮和/或沉香四醇，无需额外添加其他化学试剂，并且未对白木香树采取影响树体正常生长代谢的物理促结香方法，对树体伤害较小，能够缩短结香周期。
20.本发明中，所述碳垫菌为ket30，该菌株为文献《volatile constituents of endophytic fungi isolated from aquilaria sinensis with descriptions of two new species of nemania.》(tibpromma,s.et al.life,2021,11,363.)中公开的菌株，保存于昆明植物所微生物菌种保藏中心，保藏编号为kumcc 20-0268。
21.本发明中，将碳垫菌制备成菌液后直接注入白木香树，所述菌液od
600
＝0.6-1.2，进一步优选为0.8-1.0；所述菌液的注入体积为1-5ml，进一步优选为2.5-4ml。
22.本发明中，所述白木香树龄为3-5年；所述白木香树枝干直径为6-10cm。本发明在研究中发现，该树龄和直径的白木香树枝干使用本发明的方法，产生色酮和/或沉香四醇的效果好。
23.本发明中，在所述白木香树枝干上钻孔后注入菌液，钻孔数量为3-5孔/枝，钻孔间隔为12-15cm。作为一种可实施的方式，本发明钻孔直径为0.8-1.2cm，钻孔深度为白木香树枝干直径的80-90％。
24.本发明中，所述菌液注入上述白木香树枝干上的钻孔，注入后将钻孔封住，作为一种可实施的方式，本发明采用封口膜将钻孔封住，防止下雨进水，影响后续结香。
25.本发明中，所述菌液为将碳垫菌ket30接种于马铃薯葡萄糖肉汤培养基中，于27-28℃下发酵12-18天，优选为于28℃下发酵13-15天，无菌水稀释后得到菌液。
26.其中，所述马铃薯葡萄糖肉汤培养基为本领域常规培养基，其组分为：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15-20克，蒸馏水1000毫升；同时，作为一种可实施的方式，本发明将接种碳垫菌后的培养基置于摇床，120-140rpm振荡培养，优选为130rpm振荡培养。
27.无特殊说明，本发明涉及的试剂、耗材等均可从商业途径获得，如未注明实验具体条件，通常按照常规条件，或按照试剂公司所推荐的条件进行。
28.下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
29.实施例1
30.将碳垫菌ket30置于马铃薯葡萄糖肉汤培养基中培养，培养条件为28℃，130rpm振荡培养14d，将培养的新鲜菌悬液使用无菌水调至od
600
＝0.9备用；
31.于云南省西双版纳自治州勐海县沉香种植基地挑选15棵健康白木香树，树龄3年，
选择白木香树上直径为7
±
0.5cm的枝干，使用直径1cm的电钻每隔12cm钻孔，每枝白木香树枝干上钻4个孔，孔深为枝干直径的80-90％；
32.吸取新鲜碳垫菌菌悬液3ml，注入白木香树枝干上的钻孔，使用封口膜将做空封住，防止下雨进水。
33.实施例2
34.将碳垫菌ket30置于马铃薯葡萄糖肉汤培养基中培养，培养条件为28℃，120rpm振荡培养16d，将培养的新鲜菌悬液使用无菌水调至od
600
＝1.0备用；
35.于云南省西双版纳自治州勐海县沉香种植基地挑选15棵健康白木香树，树龄5年，选择白木香树上直径为8
±
0.5cm的枝干，使用直径0.8cm的电钻每隔14cm钻孔，每枝白木香树枝干上钻5个孔，孔深为枝干直径的80-90％；
36.吸取新鲜碳垫菌菌悬液2.5ml，注入白木香树枝干上的钻孔，使用封口膜将做空封住，防止下雨进水。
37.实施例3
38.将碳垫菌ket30置于马铃薯葡萄糖肉汤培养基中培养，培养条件为27℃，130rpm振荡培养15d，将培养的新鲜菌悬液使用无菌水调至od
600
＝0.6备用；
39.于云南省西双版纳自治州勐海县沉香种植基地挑选15棵健康白木香树，树龄4年，选择白木香树上直径为8
±
0.5cm的枝干，使用直径1.1cm的电钻每隔14cm钻孔，每枝白木香树枝干上钻4个孔，孔深为枝干直径的80-90％；
40.吸取新鲜碳垫菌菌悬液5ml，注入白木香树枝干上的钻孔，使用封口膜将做空封住，防止下雨进水。
41.对比例1
42.与实施例1的区别在于，在白木香树枝干钻孔中注入3ml无菌水。
43.对比例2
44.与实施例1的区别在于，在白木香树枝干钻孔中未注入液体。
45.实施例4
46.本发明在将碳垫菌ket30注入白木香树后的3、6个月进行采样分析；
47.采样时，以钻孔为中心，于钻孔的上下各3cm处锯断，形成一个高度6-7cm的木桩，将木桩沿着钻孔分成两半，用刻刀将被真菌侵染的部分取出；
48.将上述取出部分打碎后准确称取0.5g，用10ml甲醇浸泡一小时后超声一小时；采用hplc对提取物进行检测，测定沉香中色酮和沉香四醇含量，检测方法为《中国药典》2020年版中记载的方法。
49.数据采用excel软件进行处理，结果如图3和表1所示。
50.根据图3可知，本发明中钻孔周围形成黑色或棕褐色油脂状木质部。
51.经检测，真菌侵染部分色酮和沉香四醇含量如表1所示，
52.表1真菌侵染部分色酮和沉香四醇含量
[0053][0054]
根据表1中结果可知，本发明提供的方法可以有效的刺激白木香树结香，提高了沉香四醇和色酮的含量，与对比例相比，本发明3个月后沉香四醇含量即达到0.95μg/ml及以上，色酮含量达到26.35μg/ml及以上，本发明3-6个月后即可结香，有效的缩短了结香时间。可见，本发明有效的提高了白木香树的结香效率和品质，具有巨大的市场潜力。
[0055]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。