一种柘树的微体组织培养快繁方法与流程

本申请涉及一种柘树的微体组织培养快繁方法，属于生物。

背景技术：

1、柘树(cudrania tricuspidata(caar.)bur)是桑科柘属落叶灌木或者小乔木，喜光、喜湿、抗冻、耐干旱瘠薄，萌蘖力强，为良好的水土保持树种，分布广泛，国内外均有优良的栽培品种。柘树比较有价值的应用有，第一，柘树的材质黄色坚硬致密，是制作工艺品的上等材料，有可能成为即黄花梨之后的优良用材，也可做黄色染料；第二，柘树皮可造纸，也可入药，药理研究证明，其提取物具有清热凉血，清肝明目，止咳化痰，祛风利湿，化瘀止血、舒筋活络等作用，临床多用于治疗风湿痛、跌打损伤、脾虚泄泻及黄疽等症，现代临床试验证明：柘树黄酮与化疗药物中的环磷酰胺、顺铂及5-氟尿嘧啶等化疗药物具有协同效应，用于治疗胃癌等消化系统肿瘤疾病，其活性成分对于肺癌、肺结核也有奇特的疗效。

2、通常，柘树通过嫁接和扦插来繁殖：嫁接繁殖需培育大量砧木且嫁接苗抗风性差、基部砧木易形成萌芽，增加管理成本；扦插繁殖对环境要求较高且扦插成活率低，繁殖速度较慢，短期内难以获得大量的优质种苗来满足市场需要；从国外直接购买种苗价格昂贵。

3、因此如果能使用柘树的微体组织进行快速繁殖，将能够有效解决上述技术问题。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，提供了一种柘树的微体组织培养快繁方法。与扦插或者嫁接繁殖方法相比，该柘树的微体组织培养快繁方法需要的母本材料少，仅使用几个优良的柘树茎段即可大量繁殖，增殖系数高达5，瓶苗生根率可达96％，练苗成活率94％，从瓶苗到练苗成活率90.24％；该方法能更好地保持母本的优良性状，具有繁殖速度快、出苗率高、苗木根系发达、苗木质量好的优点。

2、所述柘树的微体组织培养快繁方法，包括以下步骤：

3、(1)外植体的选取

4、柘树的萌生芽长至20cm以上时，剪取幼嫩的柘树茎段，去掉叶柄，得柘树外植体；

5、(2)外植体的消毒

6、将外植体置于浓度为1％-3％的洗衣粉溶液中，用软毛刷轻轻擦洗，自来水冲洗干净；

7、把冲洗干净的外植体置于超净工作台中的无菌瓶中，将0.1％氯化汞消毒液注入无菌瓶中，不断摇动，消毒完成后，倒掉消毒液，用无菌水将消毒后的外植体冲洗干净；

8、(3)无菌体系的建立

9、将消毒后冲洗干净的外植体接入到启动培养基，并置于培养室中，培养一段时间后，保留无污染的外植体，即初步建立起无菌体系；

10、启动培养基为ms+6-ba 0.5～0.8mg/l+iba 0.01～0.2mg/l+sugar 30～45mg/l+活性炭c 3mg/l+琼脂粉3～6mg/l；

11、(4)丛生芽的诱导

12、当无菌体系的外植体腋芽生长到4～8cm时，从外植体基部切下幼嫩的茎段，接种到分化培养基中，诱导丛生芽；

13、分化培养基为ms+6-ba 2.0～2.5mg/l+iba 0.3～0.4mg/l+sugar 30～45mg/l+活性炭c 3mg/l+琼脂粉3～6mg/l；

14、(5)生根诱导

15、当诱导的丛生芽长到2～4cm时，将诱导的丛生芽茎段从基部切下，并接种到生根培养基中，进行生根培养；

16、生根培养基为1/2ms+6-ba 0.5mg/l+iba 0.5～1.0mg/l+sugar 30～45mg/l+活性炭c 6mg/l+琼脂粉3～6mg/l；

17、(6)练苗与移栽

18、当诱导的新生根长到1～3cm时，将幼苗置于室外室外透光率为30％的遮阳网下练苗一周，开启装载幼苗的瓶盖，放置一周，然后进行移栽。

19、优选的，步骤(1)中的柘树小苗在深秋或者早春栽植于花盆中，在早春二月将栽有柘树小苗的花盆移入温室大棚或者室内，进行催芽处理。

20、可选的，柘树的萌生芽的生长温度为25～35℃。

21、可选的，步骤(2)中将外植体置于1％洗衣粉溶液中。

22、可选的，步骤(2)中的外植体用自来水冲洗干净后，置于紫外灯消毒30分钟后的无菌操作接种台上。

23、可选的，步骤(2)中外植体在0.1％氯化汞消毒液中消毒的时间为5分钟。

24、可选的，步骤(2)中用无菌水将消毒后的外植体冲洗3～5遍后进行步骤(3)。

25、可选的，步骤(3)中培养室的培养条件为：温度25℃，光照强度2500～3500lx，每天光照时间10-12h。

26、优选的，步骤(3)中培养室的培养条件为：光照强度2500～3000lx，每天光照时间12h。

27、优选的，步骤(3)中培养时间为30天。

28、优选的，步骤(4)中在分化培养基中培养的时间为30天。

29、可选地，步骤(6)中：

30、将幼苗置于遮阳网下练苗一周，开启装载幼苗的瓶盖，放置一周，然后进行移栽。

31、优选的，步骤(3)中遮阳网的透过率为30％。

32、优选的，步骤(6)的移栽包括：

33、将生根柘树小苗从培养瓶中取出，放入38-42℃的清水中，洗掉培养基，然后植入蛭石与珍珠岩的混合基质中，于拱棚中培养至长出新叶，进行大田移栽。

34、可选的，步骤(6)中的蛭石与珍珠岩的重量比为1:1。

35、可选的，拱棚的条件为：

36、湿度在90％以上，温度25℃，且每天早晨、中午和傍晚，打开拱棚的两端，通风30分钟。

37、本申请的有益效果包括但不限于：

38、本申请所提供的柘树的微体组织培养快繁方法，需要的母本材料少，1～2个茎段即可大批量繁殖，增殖系数高达5，生根率可达96％以上，将生根幼苗移栽后的练苗成活率可达94％以上，小苗移栽成活率90.24％以上，且能保持母本的优良性状，具有繁殖速度快、苗木质量好、出苗率高的优点；该方法使用的外植体获得容易，组培操作简单，具有培养周期短、繁殖系数高、种苗无病虫害、品质好、抗性强、生长健壮、生长快等特点，有利于为实现工业化生产奠定基础。

技术特征：

1.一种柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，柘树的萌生芽的生长温度为25～35℃。

3.根据权利要求1所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(2)中的外植体用自来水冲洗干净后，置于紫外灯消毒30分钟后再置于超净工作台中的无菌瓶中。

4.根据权利要求1所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(3)中培养室的培养条件为：温度25℃，光照强度2500～3500lx，每天光照时间10-12h。

5.根据权利要求4所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(3)中培养室的培养条件为：

6.根据权利要求1所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(6)中：

7.根据权利要求1所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(3)中遮阳网的透过率为30％。

8.根据权利要求1所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(6)的移栽包括：

9.根据权利要求8所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，步骤(6)中的蛭石与珍珠岩的重量比为1:1。

10.根据权利要求8所述的柘树的微体组织培养快繁方法，其特征在于，拱棚的条件为：

技术总结
本申请公开了一种柘树的微体组织培养快繁方法，属于生物技术领域。该柘树的微体组织培养快繁方法，包括以下步骤：(1)外植体的选取；(2)外植体的消毒；(3)无菌体系的建立；(4)丛生芽的诱导；(5)生根诱导；(6)练苗与移栽。柘树的微体组织培养快繁方法，需要的母本材料少，1～2个茎段即可大批量繁殖，增殖系数高达5，生根率可达96％，将生根幼苗锻炼移栽后的成活率可达94％，从瓶苗到移栽成活率为90.24％，该方法能够最大限度的保持母本的优良性状，繁殖速度快、苗木质量好、出苗率高。

技术研发人员：牛增强,孙涛,牛观旭,宋萌萌,王杰刚
受保护的技术使用者：山东柘木产业发展研究院有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15