一种美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法

本发明属于植物繁殖，具体而言，涉及猕猴桃微嫁接技术，特别涉及一种美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法。

背景技术：

1、猕猴桃是被子植物门双子叶植物纲猕猴桃科(actinidiaceae)猕猴桃属(actinidia)多年生落叶藤本植物。猕猴桃有55个种，21个变种，共76个分类单元，我国猕猴桃种质资源丰富，有73个分类单元。常见的猕猴桃有中华猕猴桃、美味猕猴桃、软枣猕猴桃、对萼猕猴桃、大籽猕猴桃和毛花猕猴桃等。

2、美味猕猴桃是中华猕猴桃的硬毛变种，其生长势旺、抗病性强、适应性强，我国很多产区都会将美味猕猴桃的实生株系作为嫁接的砧木。‘金魁’系美味猕猴桃，是湖北省农业科学院果树茶叶研究所猕猴桃课题组从野生猕猴桃“竹溪2号”中经实生选育而来(陈庆红.猕猴桃优良品种——金魁[j].果树实用技术与信息,2002,(01):13.)，也是目前生产上广泛应用的美味猕猴桃砧木品种。‘金塘一号’同为美味猕猴桃，发现于湖北省恩施州建始县，抗病性强，生长势旺。目前生产上多是以美味猕猴桃的实生苗作为砧木，由于遗传变异的影响，各实生苗之间不能保证完全一致，即砧木的一致性较差，对种苗的标准化生产有较大影响，且苗木来源不明会可能会导致溃疡病的发生，不利于猕猴桃产业高质量发展。

3、组织培养是利用植物细胞的全能性，将离体的植物组织、器官或细胞培育成完整植株的技术，该技术可以获得大量无菌苗且一致性高，同时也可以用于保存优质母体。目前部分中华猕猴桃、美味猕猴桃、软枣猕猴桃、毛花猕猴桃等的组培体系已经建立。组织培养技术对培育猕猴桃优质健康种苗以及推动猕猴桃种苗标准化生产奠定了基础。猕猴桃几乎所有的组织器官都可作为外植体材料进行研究，不同类型的外植体和培养基被用作诱导愈伤组织，形成器官和生根的效果存在差异。

4、微嫁接是将组培获得的接穗和砧木嫁接的技术，与传统嫁接方法相比，微嫁接的苗木来源和嫁接时间不受季节和环境的限制，占地少，苗木一致性高。目前微嫁接技术在苦瓜、葡萄、柑橘、枣等蔬菜和水果中广泛应用。微嫁接分为试管外微嫁接和试管内微嫁接，试管内微嫁接的接穗和砧木均为组培苗，在无菌环境下进行嫁接处理；试管外微嫁接的接穗是组培苗，砧木则是实生苗，在自然的条件下进行嫁接处理。试管内嫁接根据接穗类型可以分为茎尖嫁接、微枝嫁接、细胞嫁接和愈伤组织嫁接。其中微枝嫁接是把试管苗的茎段在无菌状态下嫁接到其他去顶茎段或试管苗上，适宜培养条件下培育成新植株的技术。目前已经有研究人员以抗性砧木实生苗为砧木、‘红阳’猕猴桃再生苗为接穗进行微嫁接试验的研究，在通过探索蔗糖浓度、温度、砧穗叶片数量等因素对微嫁接成活率的影响，发现在28天后最高成活率为73.3％，并建立了二者高效微嫁接繁殖体系。

5、试管内微嫁接由于必须在无菌环境中进行，对操作要求较为严格，效率更低，无形中增加时间成本。此外，无论是试管内微嫁接还是试管外微嫁接，采用的砧木均为实生苗，遗传变异会导致个体间存在差异，从而影响嫁接后接穗的整体表现。

6、目前，虽然已经有猕猴桃微嫁接的文献报道，但由于操作难度大、对环境要求高、繁殖效率低、嫁接成活率低且嫁接周期长，现有的嫁接方法难以运用到工厂化的繁育中，同时针对两种美味猕猴桃的微嫁接技术尚未有文献报道。

技术实现思路

1、鉴于现有技术的不足，发明人经研究美味猕猴桃‘金魁’和‘金塘一号’的生长势及抗性，创造性地通过组织培养、微嫁接、嫁接后移植及管理等技术创新，提供一种砧穗皆为组培苗的猕猴桃试管外微嫁接方法。

2、为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究，最终获得了如下技术方案：一种美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，该方法包括如下步骤：

3、(1)砧穗的选择：砧木选用‘金魁’猕猴桃组培苗的生根苗，接穗选用‘金塘一号’组培苗；

4、(2)砧木处理：砧木无需炼苗，直接从培养瓶中取出‘金魁’砧木，用灭过菌的水将培养基质洗净，选择茎较粗大的健壮砧木苗，切除砧木的侧根、侧芽、子叶和顶芽，留1～3片叶片、茎长2～3cm，根长3～5cm，用手术刀在砧木截断面中央垂直劈开0.4～0.6cm的接口；

5、(3)接穗处理：接穗无需炼苗，直接从培养瓶中选择健壮的‘金塘一号’组培苗，切除茎下端及根部，茎上部保留4～5cm，留1～2片叶，用手术刀将‘金塘一号’茎尖削出0.4～0.6cm长的正楔形；

6、(4)嫁接：本次嫁接采用劈接法。将处理好的接穗嫁接于砧木的切口处，使二者完全贴合，用嫁接夹将嫁接口固定；

7、(5)移栽及管理：将嫁接好的苗木种植在基质中，温度保持24℃左右，移栽后的前半个月，保持土壤湿润，苗木成活后逐渐降低土壤及空气湿度，并在嫁接30～35天后去掉嫁接夹。

8、进一步优选地，如上所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其中步骤(1)中选择的砧穗茎段粗度应相近且均为木质化或刚开始木质化。

9、进一步优选地，如上所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其中步骤(4)中，采用的嫁接夹应该根据嫁接口的长度进行裁剪，本技术中采用嫁接夹的长度为7～8mm。

10、进一步优选地，如上所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其中步骤(5)采用基质配比为泥炭土：珍珠岩＝4:1，移栽完成后喷洒50％多菌灵可湿性粉剂800～1000溶液。

11、进一步优选地，如上所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其中步骤(5)中将嫁接好的苗木种植在育苗箱中；移栽后的前半个月育苗箱应密闭，保持育苗箱内湿度；移栽后15～21天打开闷养盖上方小孔，22天后陆续增加开盖时间至苗木完全成活。

12、进一步优选地，如上所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其中步骤(5)中打开闷养盖时应注意避免嫁接苗处于风口位置。

13、与现有技术相比，本发明涉及的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法具有如下优点和进步性：

14、(1)传统的嫁接受季节、环境的影响较大，同时在嫁接前还需对砧木、接穗培育至少1年时间，此外传统嫁接还可能造成病毒传播，影响产业健康。本发明采用的材料为组培苗，取材方便、一年四季均可嫁接；组培苗、脱毒苗均可作为本发明的嫁接材料，可从根源上阻断细菌性病害、病毒性病害的来源，保障种苗安全。

15、(2)现有的微芽嫁接分为试管外微嫁接和试管内微嫁接。试管内微嫁接操作难度高、对环境要求高、效率低，试管外微嫁接的砧木来源为实生苗，遗传变异会影响种苗一致性。本发明属于试管外微嫁接范畴，但是砧木为组培苗而非实生苗，与传统微嫁接方法相比，本方法在降低操作难度、提高嫁接效率的同时也能保障种苗一致性，更加适合工厂化生产的需要。

技术特征：

1.一种美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其特征在于，步骤(1)中选择的砧木和接穗的茎段粗度相近，且均已木质化或刚开始木质化。

3.根据权利要求1所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其特征在于，步骤(4)中采用的嫁接夹的长度为7～8mm。

4.根据权利要求1所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其特征在于，步骤(5)采用基质的组成为泥炭土：珍珠岩＝4:1，移栽完成后喷洒50％多菌灵可湿性粉剂800～1000溶液。

5.根据权利要求1所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其特征在于，步骤(5)中将嫁接好的苗木种植在育苗箱中，移栽后的前半个月育苗箱密闭，移栽后16～21天打开育苗箱闷养盖上方小孔，22天后陆续增加开盖时间至苗木完全成活。

6.根据权利要求5所述的美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，其特征在于，步骤(5)中打开闷养盖时避免嫁接苗处于风口位置。

技术总结
本发明提供了一种美味猕猴桃砧穗双向无菌苗快速高效微嫁接方法，属于植物繁殖技术领域。本发明砧木选用‘金魁’猕猴桃组培苗的生根苗，接穗选用‘金塘一号’组培苗，砧木和接穗均不炼苗，砧木保留叶片1～3片，并采用试管外嫁接，与传统微嫁接方法相比，本方法在降低操作难度、提高嫁接效率的同时也能保障种苗一致性，更加适合工厂化生产的需要。

技术研发人员：张鸿,戢小梅,李秀丽,翟敬华,陈志伟,乐有章,赵志远
受保护的技术使用者：武汉市农业科学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12