冰球子萌发培养基及萌发繁育方法与流程

本发明涉及中药材种植，尤其涉及一种冰球子萌发培养基及萌发繁育方法。

背景技术：

1、冰球子oreorchilpatens(lindl)lindl为兰科独蒜兰属植物独蒜兰pleionebulbocodioides(franch.)rolfe、云南独蒜兰pleioneyunnanensis(rolfe)rolfe〕的干燥假鳞茎，别名山慈菇，生于林下和林缘多石地上或苔藓覆盖的岩石上，也见于草坡稍荫蔽的砾石地上，海拔1100-3500米。主要分布于贵州、四川以及云南等地。其花朵瓣形状独特、颜色鲜艳，具有较高的观赏价值。

2、冰球子因其所含的秋水仙碱具有抗癌活性被人熟知，具有清热解毒、化痰散结之效，主要用于治疗臃肿疗毒、瘰疬痰核、蛇虫咬伤、癥瘕痞块等。

3、但由于冰球子种子胚胎发育不完整休眠期长在自然环境下难以萌发以及近年来市场需求不断增大导致的野生资源滥采滥挖致使野生资源临近枯竭，因此寻找其人工繁育方法成为研究热门。

4、如江鸣涛等人以云南独蒜兰(pleioneyunnanensis)×陈氏独蒜兰(p.chunii)授粉120d成熟未开裂蒴果的种子作为试验材料，研究不同浓度6－ba、naa和花宝2号对其种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明:种子萌发的适宜培养基为3g/l花宝2号+0.5mg/l6－ba+1mg/lnaa+20g/l蔗糖+50g/l马铃薯+50g/l香蕉+2g/l蛋白胨+2g/l活性炭+7g/l琼脂，萌发率94.45％。(江鸣涛,张艺祎,李云霞,黄继芬,吴沙沙.云南独蒜兰×陈氏独蒜兰种子萌发与幼苗生长研究[j].江苏农业科学,2018,46(04):110-113.)

5、又如，张燕等人对独蒜兰的离体快速繁殖技术进行了研究。以独蒜兰种子及种子萌发的无茵苗的原球茎、叶片为外植体，诱导产生无菌苗。结果表明：独蒜兰种胚萌发最适培养基为1/2ms+6-ba(0.1mg/l)+naa(1.0mg/l)+活性炭2g/l，6-ba、kt有抑制衰老的作用，能促进独蒜兰原球茎直接分化成苗，其中萌发率达60％。组培苗的原球茎经切割后在诱导培养基上培养，可产生增殖分化，形成丛芽。原球茎诱导的最适培养基为1/2ms+6-ba(5.0mg/l)+naa(0.2mg/l)，增值倍数为2.71。以叶片为外植体，未获得组培苗。(张燕,黎斌,祁桦,李思锋.濒危兰科植物独蒜兰的快繁技术研究[j].陕西农业科学,2013,59(03):57-59.)

6、又如，陈光芬等人为研究雷公山保护区独蒜兰组织培养的生长特性，以雷公山野生独蒜兰种子、假鳞茎为外植体，加入不同量无机盐和不同的激素种类配比，诱导产生无菌苗，结果表明独蒜兰种子萌发的最适培养基为1/2ms+6ba1.0+naa0.3+活性碳2g/l，其中萌发率达65％。kt、6ba有促进原球茎生长分化的作用，能促进独蒜兰种子直接分化成苗。假鳞茎经消毒处理，加入激素能诱导出丛芽并分化出苗，比种子萌发幼苗速度快，但数量较少，苗叶较窄。(陈光芬.雷公山保护区独蒜兰组织快繁技术研究[j].中国林业产业,2021,(12):44-47.)

7、目前关于冰球子的种子萌发及繁育技术中，种子萌发率较低，严重制约了冰球子栽培规模的迅速扩大。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提出一种冰球子萌发培养基及萌发繁育方法，旨在提高冰球子种子萌发率、以及加快冰球子种子的发育速度。

2、为实现上述目的，一方面，本发明提出一种冰球子萌发培养基，该培养基组分包括：ms、0.25～0.35mg/l的6-ba、1.15～1.3mg/l的iba、4.5～5.5g/l的琼脂、以及25～32g/l的蔗糖。

3、优选的，该培养基的组分为：ms、0.3mg/l的6-ba、1.25mg/l的iba、5g/l的琼脂、30g/l的蔗糖。

4、优选的，该培养基的ph值为5.8-6.0。

5、另一方面，本发明还提出一种冰球子萌发繁育方法，采用上述的冰球子萌发培养基，包括以下步骤：

6、步骤s1：培养基、冰球子种子的消毒；

7、步骤s2：冰球子种子接种；

8、步骤s3：冰球子种子萌发生长；

9、步骤s4：冰球子苗炼苗驯化。

10、优选的，在步骤s1中，冰球子种子为冰球子未开裂的果荚，采摘时间为8-9月。

11、优选的，在步骤s1中，培养基的消毒方法为：将培养基加热至透明状后分装到组培瓶中，放入灭菌锅中进行灭菌，灭菌锅中采用的灭菌温度为121℃，灭菌时长为30min。

12、优选的，在步骤s1中，冰球子种子消毒的方法包括以下步骤：

13、步骤s101：将冰球子种子用软毛刷刷去表面杂质，软毛毛刷处理对冰球子种子起到良好的保护作用，不易对冰球子种子产生伤害，同时，能够很好的去除冰球子表面的杂质，避免杂质带来二次污染；

14、步骤s102：将表面杂质清理后的冰球子种子放入稀释后的新洁尔灭溶液摇晃之后，用流水冲洗30min，并捞出晾干；新洁尔灭环节可有效去除种子表面附着物，而且新洁尔灭毒性小易溶于水，消毒后用流水冲洗则可以有效去除毒液残留；30min的冲洗时间可以有效去除毒液残留，同时也不会对种子产生伤害；

15、步骤s103：将步骤s102中晾干的种子拿到无菌超净台内用酒精消毒；

16、步骤s104：将酒精消毒后的种子采用温热无菌水清洗；

17、步骤s105：将步骤s104中清洗后的种子再次使用次氯酸钠溶液进行消毒；

18、步骤s106：将步骤s105中消毒后的冰球子种子再次采用温热无菌水清洗，取出晾干。

19、优选的，在步骤s102中，新洁尔灭溶液的稀释度为30％，冰球子种子放入稀释后的新洁尔灭溶液摇晃时间≥5min。

20、优选的，在步骤s103中，所采用的酒精浓度为75％，酒精消毒时长为3min；在步骤s105中，所采用的次氯酸钠溶液的浓度为5％，次氯酸钠溶液消毒的时长为12min。由于增加了新洁尔灭、酒精消毒的环节，氯酸钠消毒液的浓度相对于传统的消毒方法中的浓度可以更低，从而可以减轻次氯酸钠溶液对种子的毒害。

21、优选的，在步骤s104和步骤s106中，温热无菌水的温度为40℃；步骤s104中清洗次数为2-3次；步骤s106中清洗次数为4-5次。利用温热无菌水进行清洗可以有效的打破种子的休眠，加快种子萌发速度。

22、由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果如下：

23、(1)在本发明中所提供的培养基中，激素采用的是6-ba和iba，这两种激素对冰球子种子萌发的影响相较于其他激素效果更好。并且模拟方程通过二次回归方程分析得出冰球子种子萌发培养基中这两种激素的优选浓度配比是：6-ba为0.25～0.35mg/l、iba为1.15～1.3mg/l。更具体的地，6-ba为0.3mg/l、iba为1.25mg/l。在此激素浓度配比下冰球子种子萌发率高。

24、(2)采用本发明所提供的冰球子萌发培养基及萌发繁育方法，提高了冰球子种子萌发率、降低了外界对冰球子种子的影响、加快了冰球子种子的发育速度。

25、(3)本发明提供冰球子萌发繁育方法中，通过对培养基、冰球子种子的消毒，有效降低了冰球子种子的污染率，提高冰球子种子萌发率高。

26、(4)在本发明中，在对冰球子种子消毒的环节中，通过增加新洁尔灭环节、使用温热无菌水以及降低次氯酸钠溶液浓度和消毒时间有效降低了冰球子种子的污染率；同时，温热无菌水清洗具有促进种子打破休眠的作用，还可以有效去除消毒液的残留，提高种子萌发率，加快种子萌发时间。