一种提高关苍术组培苗成活率的培育方法与流程

本发明涉及关苍术组织培养，尤其涉及一种提高关苍术组培苗成活率的培育方法。

背景技术：

1、关苍术(学名：atractylodesjaponica koidz.ex kitam.)是菊科，苍术属多年生草本植物，高可达80厘米。《中国药典》仅记载苍术为茅苍术或北苍术，未收录关苍术，但根据《中国植物志》的描述，北苍术实为一个混杂的商品名称，不仅包括苍术本种，也包括关苍术。关苍术别名关东苍术、枪头菜，主要分布在我国的吉林省、黑龙江省、辽宁省的东北部；俄罗斯的西伯利亚、朝鲜、日本也有分布。关苍术的药用部位为球状根，含有丰富的有效成分，即球状根部挥发油。随着苍术在市场上需求逐年增大、野生资源大量采挖、生存环境日益恶化，导致其野生资源逐年递减。在此背景下，关苍术因其蕴含的庞大药用价值正逐渐成为苍术药材的潜在替代品。

2、关苍术人工栽培繁殖以根状茎繁殖为主，但传统繁殖方法繁殖系数低、周期长。为了保证关苍术资源的可持续利用和对这种野生药用植物进行保护，进行关苍术的离体快繁研究迫在眉睫。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种提高关苍术组培苗成活率的培育方法，以关苍术种子为外植体，研究了其无菌系建立与丛生芽的诱导和增殖、生根技术以及试管苗炼苗移栽，为关苍术的人工栽培和种质资源保存提供一定的技术支持。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种提高关苍术组培苗成活率的培育方法，包括如下步骤：

4、(1)将关苍术种子消毒后接种到启动培养基中，培育得到关苍术无菌苗；

5、(2)将关苍术无菌苗转接到增殖培养基中，培育得到关苍术丛生芽；

6、(3)将关苍术丛生芽接种到壮苗生根培养基中，培育得到关苍术试管苗；

7、(4)将关苍术试管苗驯化后接种到育苗基质中，培养后移栽到大田中。

8、作为优选，步骤(1)中所述消毒的方法为：用70～80％的酒精消毒30～40s，用水冲洗2～3遍，再用0.08～0.12％的氯化汞消毒8～10min，用水冲洗2～3遍。

9、作为优选，步骤(1)中所述启动培养基为：ms+6-ba3.0～4.0mg/l+naa 0.1～0.3mg/l+琼脂7.0～7.5g/l+蔗糖25～30g/l，所述启动培养基的ph值为5.8～6.0，步骤(1)中所述培育的时间为15～21d。

10、作为优选，步骤(2)中所述增殖培养基为：ms+6-ba 1.8～2.2mg/l+naa 0.18～0.22mg/l+琼脂7.0～7.5g/l+蔗糖25～30g/l，所述增殖培养基的ph值为5.8～6.0，步骤(2)中所述培育时每21～25d转接到新的增殖培养基中，连续转接2～3次。

11、作为优选，步骤(3)中所述壮苗生根培养基为：1/2ms+naa 0.2～0.5mg/l+琼脂7.0～7.5g/l+蔗糖25～30g/l，所述壮苗生根培养基的ph值为5.8～6.0，步骤(3)中所述培育的时间为21～28d。

12、作为优选，步骤(3)中所述壮苗生根培养基中还含有活性炭，所述活性炭的浓度为0.2～0.5g/l。

13、作为优选，步骤(1)～步骤(3)中所述培育的温度独立的为23～25℃，湿度独立的为75～85％，光照时间独立的为14～16h/d，光照强度独立的为2000～2500lx。

14、作为优选，步骤(4)中所述驯化的温度为15～20℃，驯化的湿度为60～75％，所述驯化的时间为3～5d。

15、作为优选，步骤(4)中所述驯化后用300～500mg/l的多菌灵溶液浸泡30～40min，所述育苗基质包括如下体积份的原料：蛭石1.8～2.2份、营养土0.8～1.2份、珍珠岩0.8～1.2份。

16、作为优选，步骤(4)中所述培养温度为21～25℃，光照强度为2000～3000lx，湿度为60～70％，所述培养的时间为28～35d。

17、本发明提供了一种提高关苍术组培苗成活率的培育方法，包括如下步骤：(1)将关苍术种子消毒后接种到启动培养基中，培育得到关苍术无菌苗；(2)将关苍术无菌苗转接到增殖培养基中，培育得到关苍术丛生芽；(3)将关苍术丛生芽接种到壮苗生根培养基中，培育得到关苍术试管苗；(4)将关苍术试管苗驯化后接种到育苗基质中，培养后移栽到大田中。本发明培育的关苍术试管苗品质好，叶片浓绿，褐化和黄化现象明显较对比例低；试管苗移栽成活高；所培育的关苍术丛生芽增殖系数高，达到5.43。本发明所获得的关苍术试管苗能够保持母本的优良特性，发生变异的可能性较低，有利于保存和培育关苍术优良种质资源。此外本发明建立的关苍术离体快繁技术体系不会被天气、季节能难控因素限制。因此它也具有生产效率高的优点，能够有效减少人力、财力的支出。节省土地和繁殖材料，有利于关苍术野生资源的保护，并为今后的人工栽培提供优质种苗。同时，本发明所用的启动培养基，可以直接培养增殖系数在2～3的增殖苗，从种子建立无菌系中就可以让关苍术具有增殖系数，然后再转接到增殖培养基进一步增加增殖系数，便于大规模扩繁关苍术组培苗。

技术特征：

1.一种提高关苍术组培苗成活率的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤(1)中所述消毒的方法为：用70～80％的酒精消毒30～40s，用水冲洗2～3遍，再用0.08～0.12％的氯化汞消毒8～10min，用水冲洗2～3遍。

3.根据权利要求2所述的培育方法，其特征在于，步骤(1)中所述启动培养基为：ms+6-ba3.0～4.0mg/l+naa0.1～0.3mg/l+琼脂7.0～7.5g/l+蔗糖25～30g/l，所述启动培养基的ph值为5.8～6.0，步骤(1)中所述培育的时间为15～21d。

4.根据权利要求3所述的培育方法，其特征在于，步骤(2)中所述增殖培养基为：ms+6-ba1.8～2.2mg/l+naa0.18～0.22mg/l+琼脂7.0～7.5g/l+蔗糖25～30g/l，所述增殖培养基的ph值为5.8～6.0，步骤(2)中所述培育时每21～25d转接到新的增殖培养基中，连续转接2～3次。

5.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，步骤(3)中所述壮苗生根培养基为：1/2ms+naa0.2～0.5mg/l+琼脂7.0～7.5g/l+蔗糖25～30g/l，所述壮苗生根培养基的ph值为5.8～6.0，步骤(3)中所述培育的时间为21～28d。

6.根据权利要求5所述的培育方法，其特征在于，步骤(3)中所述壮苗生根培养基中含有活性炭，所述活性炭的浓度为0.2～0.5g/l。

7.根据权利要求6所述的培育方法，其特征在于，步骤(1)～步骤(3)中所述培育的温度独立的为23～25℃，湿度独立的为75～85％，光照时间独立的为14～16h/d，光照强度独立的为2000～2500lx。

8.根据权利要求7所述的培育方法，其特征在于，步骤(4)中所述驯化的温度为15～20℃，驯化的湿度为60～75％，所述驯化的时间为3～5d。

9.根据权利要求8所述的培育方法，其特征在于，步骤(4)中所述驯化后用300～500mg/l的多菌灵溶液浸泡30～40min，所述育苗基质包括如下体积份的原料：蛭石1.8～2.2份、营养土0.8～1.2份、珍珠岩0.8～1.2份。

10.根据权利要求1～9任意一项所述的培育方法，其特征在于，步骤(4)中所述培养温度为21～25℃，光照强度为2000～3000lx，湿度为60～70％，所述培养的时间为28～35d。

技术总结
本发明涉及关苍术组织培养技术领域。本发明提供了一种提高关苍术组培苗成活率的培育方法，包括如下步骤：(1)将关苍术种子消毒后接种到启动培养基中，培育得到关苍术无菌苗；(2)将关苍术无菌苗转接到增殖培养基中，培育得到关苍术丛生芽；(3)将关苍术丛生芽接种到壮苗生根培养基中，培育得到关苍术试管苗；(4)将关苍术试管苗驯化后接种到育苗基质中，培养后移栽到大田中。本发明的方法培育的关苍术试管苗品质好，叶片浓绿，褐化和黄化现象明显较对比例低；试管苗移栽成活高；所培育的关苍术丛生芽增殖系数高，达到5.43，有利于保存和培育关苍术优良种质资源，有利于关苍术野生资源的保护，并为今后的人工栽培提供优质种苗。

技术研发人员：郭兰萍,张成才,王升,代晓雨,闫滨滨,王红阳
受保护的技术使用者：德兴市中医研究院试验培训基地
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13