一种射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法及应用

本发明属于医学动物模型，具体涉及一种射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法及应用。

背景技术：

1、心力衰竭(heart failure)简称心衰，是指由于心脏的收缩功能和(或)舒张功能发生障碍，不能将静脉回心血量充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌注不足，从而引起心脏循环障碍症候群，此种障碍症候群集中表现为肺淤血、腔静脉淤血。心衰是最重要也是最严重的心血管病之一，随着年龄增加，心衰患病率迅速增加，70岁以上人群患病率可上升至10％以上，4年死亡率达50％，严重者1年死亡率高达50％。心衰可按照射血分数分类为射血分数降低的心衰(hfref)，射血分数中间值的心衰(hfmref)，射血分数保留的心衰(hfpef)。射血分数保留的心衰(hfpef)也称为舒张期心衰，即左心室射血分数正常或接近正常(通常≥50％)的心衰，其诊断标准包括：1)有典型心衰症状和体征；2)保留正常的左心室射血分数值；3)有相关结构性心脏病存在的证据如左心室肥厚和(或)舒张功能障碍。射血分数保留的心衰(hfpef)是一种发病率和死亡率很高的疾病，约占心力衰竭患者入院人数的一半，是心衰最常见的形式。虽然hfref和hfpef的临床表现类似于心衰，但临床证据认为这两个综合征的病理生理机制不同，已证实对hfref有效的神经激素治疗未能改善hfpef的症状，且目前还没有治疗方法可以改善hfpef，因此一个被广泛认可的hfpef模型对于hfpef的发病机制研究和药物开发十分重要。

2、目前已有的hfpef小鼠模型包括血管紧张素ii刺激模型、瘦素受体缺陷小鼠模型、高脂或西方饮食诱导模型、老年鼠模型、加速衰老模型以及组合模型(醋酸脱氧皮质酮及高盐模型、醛固酮单肾切除模型、高脂饮食合并结构性一氧化氮合酶抑制剂(l-name)模型)。其中血管紧张素ii刺激模型存在表型不稳定，症状较轻微的问题；瘦素受体缺陷小鼠模型在生命早期出现严重症状，老年期出现舒张性功能障碍；高脂或西方饮食诱导模型容易诱发肾功能损伤；老年鼠模型造模时间长，通常需要1年以上的造模时间；加速衰老模型通常伴随其它功能障碍混杂因素。因此，急需构建一种射血分数保留的心衰动物模型，进一步探究hfpef的机制，并以此寻找新的治疗靶点。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法及应用。本发明的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法操作简单，可实现标准化，诱导成功率高，所需要的时间较短，为后续的研究提供了基础，为进一步研究射血分数保留的心衰的发生机制和临床治疗和药物筛选奠定了基础。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法，将rbp4过表达小鼠饲喂6个月，得射血分数保留的心衰小鼠模型。现有技术中的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建周期长，大多需要一年左右。本发明的射血分数保留的心衰小鼠模型仅需将rbp4过表达小鼠饲喂6个月，构建周期短。本发明的rbp4过表达小鼠的构建方法包括转基因技术、重组腺相关病毒(adeno-associated virus aav)载体进行rbp4基因过表达或体内注射rbp4重组蛋白等使小鼠体内rbp4水平持续升高的技术方法。

3、作为本发明所述射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述rbp4过表达小鼠为雄性小鼠。

4、作为本发明所述射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述rbp4过表达小鼠的构建方法包括以下步骤：

5、(1)将rbp4过表达载体注射到小鼠受精卵中，然后将受精卵移植到假孕母鼠体内；

6、(2)对步骤(1)的母鼠产出的f0代小鼠的dna进行pcr鉴定，获得f0代rbp4过表达小鼠；

7、(3)将f0代rbp4过表达小鼠与野生型小鼠交配获得子代雄鼠，经鉴定后获得rbp4过表达小鼠。

8、本申请发明人研究发现，采用上述构建方法繁育rbp4过表达小鼠，可以大批量繁殖获得遗传性状稳定的rbp4过表达小鼠，且构建成本较低。

9、作为本发明所述射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤(1)中的小鼠为c57bl/6j小鼠。

10、作为本发明所述射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述pcr鉴定的引物包括：

11、转基因正向引物：cctcctgaacctcgatggca；

12、转基因逆向引物：ccggccatcaccactttgta；

13、内控基因正向引物：actccaaggccacttatcacc；

14、内控基因逆向引物：attgttaccaactgggacgaca。

15、作为本发明所述射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法的优选实施方式，还包括对小鼠进行模型特征检测。

16、作为本发明所述射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述模型特征包括小鼠尾部收缩压与舒张压、小鼠心室结构和收缩功能、小鼠左心室舒张功能、小鼠心衰相关症状体征和小鼠心脏大小及结构变化。

17、本发明还提供一种采用所述的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法构建的射血分数保留的心衰小鼠模型。

18、本发明还提供所述的射血分数保留的心衰小鼠模型在研究射血分数保留的心力衰竭中的应用。

19、本发明还提供所述的射血分数保留的心衰小鼠模型在筛选和/或制备治疗射血分数保留的心力衰竭药物中的应用。

20、本发明的有益效果：本发明提供一种射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法。本发明的射血分数保留的心衰小鼠模型仅需将rbp4过表达小鼠饲喂6个月即可获得所述射血分数保留的心衰小鼠模型，操作简单，可实现标准化，诱导成功率高，所需要的时间较短，节省时间和经济成本。

技术特征：

1.一种射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法，其特征在于，将rbp4过表达小鼠饲喂6个月，得射血分数保留的心衰小鼠模型。

2.根据权利要求1所述的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述rbp4过表达小鼠为雄性小鼠。

3.根据权利要求1所述的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述rbp4过表达小鼠的构建方法包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中的小鼠为c57bl/6j小鼠。

5.根据权利要求3所述的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述pcr鉴定的引物包括：

6.根据权利要求1所述的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法，其特征在于，还包括对小鼠进行模型特征检测。

7.根据权利要求6所述的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述模型特征包括小鼠尾部收缩压与舒张压、小鼠心室结构和收缩功能、小鼠左心室舒张功能、小鼠心衰相关症状体征和小鼠心脏大小及结构变化。

8.一种采用权利要求1～7任一项所述的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法构建的射血分数保留的心衰小鼠模型。

9.权利要求8所述的射血分数保留的心衰小鼠模型在研究射血分数保留的心力衰竭中的应用。

10.权利要求8所述的射血分数保留的心衰小鼠模型在筛选和/或制备治疗射血分数保留的心力衰竭药物中的应用。

技术总结
本发明公开了一种射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法及应用，属于医学动物模型技术领域。本发明的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法为将RBP4过表达小鼠饲喂6个月，得射血分数保留的心衰小鼠模型。本发明的射血分数保留的心衰小鼠模型的构建方法操作简单，可实现标准化，诱导成功率高，所需要的时间较短，为后续的研究提供了基础，为进一步研究射血分数保留的心衰的发生机制和临床治疗和药物筛选奠定了基础。

技术研发人员：柳雁,陈样新,夏敏,赵雅文
受保护的技术使用者：中山大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13