一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法

本发明涉及植物繁殖，尤其涉及一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法。

背景技术：

1、绣球花[hydrangea macrophylla(thunb)ser.]又名八仙花、紫阳花等，为虎耳草科八仙花属(即绣球花属)观赏灌木。绣球原产于日本以及中国四川一带，现世界现各地均有栽培，中国主要分布于长江流域以南各省地区。绣球花不仅观赏效果好而且耐阴，既能作盆花栽培，又可种植于庭院、公园、绿地，是园林中重要的观赏植物，在园林绿化、美化中应用广泛，种苗需求量大。

2、杂交育种是大花绣球新品种选育的重要方法，然而目前存在杂交后代再生率低的问题，影响育种进程；现有技术中还未有对大花绣球杂种胚直接成苗方法的研究，从而影响大花绣球的成苗效率以及成苗成本。

技术实现思路

1、1.要解决的技术问题

2、本发明的目的是为了解决现有技术中还未有对大花绣球杂种胚直接成苗方法的研究，从而影响大花绣球成苗效率以及成苗成本的问题，而提出的一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法。

3、2.技术方案

4、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

5、一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，包括以下步骤：

6、步骤1：花粉生活力测定，采用培养液悬滴法测定花粉的萌发率，以花朵开放1-2天的新鲜花粉为材料，用牙签蘸取花粉并涂抹在培养液中，室温条件下静置8h，然后在200倍显微镜下随机选取3个视野统计花粉萌发率；

7、步骤2：杂交授粉，在母本植株不育花萼片开始展开时，剪除所有的不孕花，同时去除发育状况不良的可育花；当花蕾膨大呈淡紫时，用镊子轻压花蕾，去除花瓣和雄蕊，此时柱头湿润呈“y”型，可以进行授粉，授粉完成后套袋，1周后去除；

8、步骤3：受精胚珠培养，包括外植体处理及培养条件的选择、诱导培养、壮苗与生根培养和炼苗移栽；

9、其中外植体处理及培养条件的选择具体步骤为：以授粉100d的杂种胚珠为试材，首先用吐温20浸泡5min后立即用流水洗净，然后在70％乙醇中浸泡30s，再用次氯酸钠溶液，有效氯含量1％，浸泡10min，最后用无菌水清洗4-5次；在超净工作台上剥开种实，去除果皮，取出胎座和胚珠，然后沿着任意一条腹缝线将着生有数列胚珠的胎座纵切，均分为两部分接种至培养基，接种后培养；

10、诱导培养的具体步骤为：采集授粉后100d的膨大果实，取胚珠接种到ms+1.5mg·l-16-ba+0.2mg·l-1naa+1.5mg·l-1ga3诱导培养基上，将胚珠接种到诱导培养基上进行培养；

11、壮苗与生根培养的具体步骤为：取诱导培养后长势一致的幼苗接种在ms+naa0.1mg·l-1培养基中继续培养，每4周更换一次新鲜培养基；

12、炼苗移栽的具体步骤为：将生长健壮的幼苗在室温25℃左右，自然光照的温室内炼苗，然后移栽到混合基质中，放置在温度为20℃左右的温室栽培养护。

13、优选地，所述步骤1中培养液的配方为5％蔗糖+150mg·l-1硼酸+75mg·l-1氯化钙。

14、优选地，所述步骤1中花粉萌发以花粉管伸长长度大于或等于花粉粒直径为标准。

15、优选地，所述步骤2中授粉具体步骤为用棉签蘸取花粉粒，轻触柱头并使其沾满花粉，每天授粉1-2次，连续授粉3天。

16、优选地，所述步骤3中所有培养基均添加30mg·l-1蔗糖、7g·l-1琼脂，ph值5.8，诱导培养基为ms+1.5mg·l-16-ba+0.2mg·l-1naa+1.5mg·l-1ga3另添加500mg·l-1活性炭；壮苗和生根培养基为ms+naa0.1 mg·l-1。

17、优选地，所述步骤3中接种后的材料置于室温25±1℃，光照时间15h·d-1，光照度2000-3000lx的环境中培养。

18、优选地，所述步骤3中幼苗培养至90d左右时，植株高约3cm，叶片长度达2cm以上，叶色浓绿，根系茂盛，即可进行炼苗与移栽。

19、优选地，所述混合基质中泥炭：蛭石：珍珠岩的体积比为6：3：1。

20、3.有益效果

21、相比于现有技术，本发明的优点在于：

22、本发明中，通过花粉生活力测定、杂交授粉、受精胚珠培养等培养步骤的设置，可以快速有效的使大花绣球杂种胚直接成苗，从而有效提升了大花绣球的成苗效率，同时很好的节约了大花绣球的成苗成本。

技术特征：

1.一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，其特征在于，所述步骤1中培养液的配方为5％蔗糖+150mg·l-1硼酸+75mg·l-1氯化钙。

3.根据权利要求1所述的一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，其特征在于，所述步骤1中花粉萌发以花粉管伸长长度大于或等于花粉粒直径为标准。

4.根据权利要求1所述的一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，其特征在于，所述步骤2中授粉具体步骤为用棉签蘸取花粉粒，轻触柱头并使其沾满花粉，每天授粉1-2次，连续授粉3天。

5.根据权利要求1所述的一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，其特征在于，所述步骤3中所有培养基均添加30mg·l-1蔗糖、7g·l-1琼脂，ph值5.8，诱导培养基为ms+1.5mg·l-16-ba+0.2mg·l-1naa+1.5mg·l-1ga3，另添加500mg·l-1活性炭；壮苗与生根培养基为ms+naa0.1mg·l-1。

6.根据权利要求1所述的一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，其特征在于，所述步骤3中接种后的材料置于室温25±1℃，光照时间15h·d-1，光照度2000-3000lx的环境中培养。

7.根据权利要求1所述的一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，其特征在于，所述步骤3中幼苗培养至90d左右时，植株高约3cm，叶片长度达2cm以上，叶色浓绿，根系茂盛，即可进行炼苗与移栽。

8.根据权利要求1所述的一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，其特征在于，所述混合基质中泥炭：蛭石：珍珠岩的体积比为6：3：1。

技术总结
本发明公开了一种大花绣球杂种胚直接成苗培养方法，包括以下步骤：步骤1：花粉生活力测定；步骤2：杂交授粉，在母本植株不育花萼片开始展开时，剪除所有的不孕花，同时去除发育状况不良的可育花；当花蕾膨大呈淡紫时，用镊子轻压花蕾，去除花瓣和雄蕊，此时柱头湿润呈“Y”型，可以进行授粉，授粉完成后套袋，1周后去除；步骤3：受精胚珠培养，包括外植体处理及培养条件的选择、诱导培养、壮苗与生根培养和炼苗移栽。本发明通过花粉生活力测定、杂交授粉、受精胚珠培养等培养步骤的设置，可以快速有效的使大花绣球杂种胚直接成苗，从而有效提升了大花绣球的成苗效率，同时很好的节约了大花绣球杂种胚的成苗成本。

技术研发人员：陈海霞,蒋辉,吴晓梦,王登辉,李玉帆,陈己任
受保护的技术使用者：湖南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14