一种景天科多肉植物通用的组织培养方法

本发明涉及通过组织培养技术的植物再生，尤其涉及一种景天科多肉植物通用的组织培养方法。

背景技术：

1、多肉植物(succulent plant)又称多浆植物，是根、茎、叶中至少有一种器官呈现肉质的肥厚变态状，且具有发达疏水、贮水组织的植物的统称。其中景天科(crassulaceae)多肉植物因其杂交后代形态、色泽、香气等性状多样性丰富，在多肉植物市场至室内观叶植物市场中占据重要地位。

2、景天科多肉植物的组织培养始于21世纪初，多采用花茎、萼片、幼嫩茎段、嫩芽等为起始材料，经诱导培养获得愈伤组织、不定芽或体细胞胚，然后培养获得完整植株。上述再生技术效率较低。近年来的现有技术中，有人以花托为外植体建立了有效的植株再生体系，但通常植株苗龄达到2年以上才可成花，且花托外植体的获取受到季节、苗龄等因素的限制，难以形成体系。

3、中国专利cn116098064a公开了一种景天科多肉植物通用的开放式组织培养方法，步骤包括外植体消毒、叶片增殖分化出芽和芽生根。中国专利cn114027182a则提供了一种景天科拟石莲属东云系多肉植物组织培养繁殖方法，包括以下步骤：1)外植物体消毒处理、2)诱导培养、3)继代培养、4)生根培养、5)炼苗与移栽，得到完整植株。上述专利虽采用叶片作为外植体，但采用普通工艺培养时植株再生率较低，平均每个外植体产生新植株的数量有限，依旧难以满足规模化培养的需求。

技术实现思路

1、有鉴于现有技术的上述缺陷，在本发明的第一方面，提供了一种外植体获取限制少、繁殖效率高的景天科多肉植物通用的组织培养方法，包括如下步骤：

2、s1、外植体获取：

3、景天科多肉植物的母体在适宜环境下进行培养使其生长新叶；沿新叶生长点收取叶片，叶片消毒后垂直于叶片纵轴进行横切以形成切口平整的叶片片段，得到外植体；

4、s2、体细胞胚诱导：

5、所述外植体垂直放置于诱导培养基表面，使其切口与表面贴合，随后置于黑暗的适宜环境下进行培养，于切口处诱导生长得到体细胞胚；

6、s3、植株再生：

7、将所述体细胞胚转移至再生培养基中，在适宜环境下进行培养，使体细胞胚萌发形成完整植株。

8、本发明在新生叶片形成平整大伤口，利于叶肉细胞与培养基充分接触，在黑暗环境下培养提高愈伤组织诱导速度。叶片培养膨大至表皮炸裂，进而在切口处产生并得到体细胞胚。

9、优选的，所述s1中，所述培养的方式为无土基质栽培；无土基质以泥炭土和珍珠岩以质量比2～5：1配制而成。

10、优选的，所述s1中，所述培养的环境如下：在15～25℃，每日12～16h光照强度1000～2500lx的环境下进行培养，并每周定时浇灌杀菌药液1次。

11、进一步优选的，所述杀菌药液由1wt.％多菌灵水溶液和1wt.％链霉素水溶液以体积比2～1：1配制而成。

12、优选的，所述s1中，所述新叶的长度为0.5～3.0cm；所述叶片片段的长度为0.5～1.0cm。

13、优选的，所述s1中，所述消毒采用酒精和氯化汞水溶液依次对叶片进行处理。

14、进一步优选的，所述消毒采用75％酒精，处理时间为1～5min；采用0.1wt.％氯化汞水溶液，处理时间为5～10min。

15、优选的，所述s2中，所述诱导培养基为添加了1.0～3.0mg/l 6-苄氨基嘌呤、0.1～1.0mg/l萘乙酸、20～30g/l蔗糖、0.5～2g/l活性炭的ms培养基，ph＝5.8～6.2。

16、优选的，所述s2中，所述培养的环境如下：在23～25℃培养2～5周。

17、优选的，所述s3中，所述再生培养基为添加了1.0～2.5mg/l 6-苄氨基嘌呤、0.5～2.0mg/l激动素，0.1～0.5mg/l萘乙酸、20～30g/l蔗糖、0.5～2.0g/l活性炭的ms培养基，ph5.8～6.0。

18、优选的，所述s3中，所述培养的环境如下：在23～25℃，每日12～16h光照强度1000～2500lx的环境下培养4～8周。

19、与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：

20、本发明提供了一种景天科多肉植物通用的组织培养方法，该方法能够不受季节限制源源不断的生成新的叶片组织。叶片外植体的获取非常容易，极大程度缩短时间成本。本发明利用叶片作为外植体进行组培快繁，在切口处诱导生长得到体细胞胚，建立了高效的体细胞胚发生途径植株再生体系，体细胞胚诱导率高，植株的再生效率明显提高，有效解决了现有技术中花茎、花萼等外植体的获取受季节以及苗龄等因素限制的问题，可实现品种稀有的景天科多肉植物大规模的可持续的工厂化种苗生产。

技术特征：

1.一种景天科多肉植物通用的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述s1中，所述培养的方式为无土基质栽培；无土基质以泥炭土和珍珠岩以质量比2～5：1配制而成。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s1中，所述培养的环境如下：在15～25℃，每日12～16h光照强度1000～2500lx的环境下进行培养，并每周定时浇灌杀菌药液1次。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述杀菌药液由1wt.％多菌灵水溶液和1wt.％链霉素水溶液以体积比2～1：1配制而成。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述s1中，所述新叶的长度为0.5～3.0cm；所述叶片片段的长度为0.5～1.0cm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述s1中，所述消毒采用酒精和氯化汞水溶液依次对叶片进行处理。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述s2中，所述诱导培养基为添加了1.0～3.0mg/l 6-苄氨基嘌呤、0.1～1.0mg/l萘乙酸、20～30g/l蔗糖、0.5～2g/l活性炭的ms培养基，ph＝5.8～6.2。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s2中，所述培养的环境如下：在23～25℃培养2～5周。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述s3中，所述再生培养基为添加了1.0～2.5mg/l 6-苄氨基嘌呤、0.5～2.0mg/l激动素，0.1～0.5mg/l萘乙酸、20～30g/l蔗糖、0.5～2.0g/l活性炭的ms培养基，ph5.8～6.0。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述s3中，所述培养的环境如下：在23～25℃，每日12～16h光照强度1000～2500lx的环境下培养4～8周。

技术总结
本发明公开了一种景天科多肉植物通用的组织培养方法，属于通过组织培养技术的植物再生技术领域。本方法利用叶片作为外植体进行组培快繁，在切口处诱导生长得到体细胞胚，建立了高效的体细胞胚发生途径植株再生体系，体细胞胚诱导率高，植株的再生效率明显提高，有效解决了现有技术中花茎、花萼等外植体的获取受季节以及苗龄等因素限制的问题。该方法不受季节限制，可源源不断生成新的叶片组织，外植体的获取非常容易，极大缩短了时间成本，可实现品种稀有的景天科多肉植物大规模的可持续的工厂化种苗生产。

技术研发人员：郑贵一,王海燕,杨媛,叶光杰,张晨,郑曹树,刘奕舟,林炜皓
受保护的技术使用者：武汉生物工程学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16