用于工业用途的细菌孢子组合物的制作方法

本发明一般地涉及用于工业用途的细菌孢子组合物，所述工业用途如农业、环境治理、堆制肥料、甲烷生产、保洁(clean supplies)、采油和直接饲喂微生物。

背景技术：

1、孢子形成细菌物种具有广泛的工业应用，包括在农业、环境治理、堆制肥料、甲烷生产、采油和保洁中的用途。根据使用的特定细菌种，其中包含细菌的组合物可能特别地适用于农业、园艺、环境、益生剂(probiotic)、水生动植物、工业和卫生用途。几种孢子形成细菌物种在许多行业中具有实用性。例如，巨大芽孢杆菌(bacillus megaterium)、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)和短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)用作农业杀真菌剂，并且用于废水处理、清洁产品和直接饲喂微生物中。

2、关于农业应用，使用孢子形成细菌来增强植物的健康是本领域公知的。例如，zhang等(2009，plant j 58:568-577)教导了促进植物生长的细菌枯草芽孢杆菌gb03提高了植物的铁吸收和光合作用能力。xie等(2009，plant signaling and behavior 4(10):948-953)教导了这一相同的枯草芽孢杆菌菌株产生的挥发物提高了植物生长和种子计数。han等(2014，frontiers in plant science 5(525):1-8)报道了在接种了枯草芽孢杆菌gb03的土壤中生长的白三叶草植物在芽高度、根长度、植物生物量、叶面积和叶绿素含量方面显著高于非接种的对照。也可以将此类细菌的孢子涂覆于种子或其他植物繁殖材料上，使得一旦播种或种植，则可以建立支持种子萌发、植物生长的刺激或种子和所得到的植物的生物防护的增强环境。例如，能够在豆类植物中实现固氮的共生细菌，如来自根瘤菌(rhizobium)和慢生根瘤菌(bradyrhizobium)属的那些，可以用于接种豆类植物以有助于根瘤形成。可以通过涂覆种子、对种子或作物的农田喷撒(dusting)或在种植时在犁沟中放置接种物来完成接种。

3、孢子形成细菌还可以用于环境治理方法中，如生物治理(bioremediation)。生物治理涉及使用微生物将化合物转化成无害或不太有害的化合物。生物治理技术通常比竞争的物理技术成本低，并且可以适用于更宽范围的污染问题和现场条件的变化。参见us2002/0090697。

4、可以用细菌处理受污染的介质以促进水、土壤和工业废水中有机污染物的生物降解。例如，lupton等(美国专利no.5,062,956)讨论了一种除去可溶性cr(vi)的方法，其使用厌氧细菌将cr(vi)还原成cr(iii)并作为不溶性氢氧化物(其作为固定沉淀出来)固定。lupton等还描述了在连续生物反应器中处理含有不合需要量的cr(vi)的水性残留物。turick等(美国专利no.5,681,739)描述了一种降低液体水性残留物中的cr(vi)浓度的方法，包括提供cr(vi)-还原细菌、将液体水性残留物与营养介质(例如，糖蜜、醋酸、氨基酸、酪蛋白氨基酸、尿素)混合并将混合物接触厌氧细菌来增强cr(vi)还原成cr(iii)的步骤。这种方法可以用于六价铬污染的土壤和/或地下水的生物治理。

5、一个与使用此类细菌相关的困难是它们必须处于营养体状态以提供这种益处，但难以将芽孢杆菌种和其他孢子形成细菌以营养体形式配制而使得它们具有适当的储存期。此外，营养体形式的芽孢杆菌种可能不能在工业用途需要的苛刻条件下存活，如在适合于种子萌发发生的条件之前种子或其他植物繁殖材料所经历的条件。相反，这些物种的孢子形式的制剂对于商业和实际应用合适得多。例如，如cartman等(2008，applied andenvironmental microbiology，8月，p.5254-5258)提到的，“细菌孢子特别适合用作活微生物产品，因为它们是代谢休眠的且对于环境应激具有高度恢复力。这些固有特性从商业角度来看是高度需要的且意味着基于孢子的产品具有长保存期和在分配和储存期间保持其生存力”。

6、某些化合物(特别是某些l-氨基酸)刺激芽孢杆菌孢子萌发的用途已经在文献中报道。例如，foerster等(1996，journal of bacteriology91(3):1168-1177)公开了l-丙氨酸添加到水性溶液中的孢子混悬液中引起多种芽孢杆菌种的萌发。然而，在工业用途中使用细菌孢子和萌发化合物的组合的一个挑战是在萌发化合物的存在下将孢子保持在无活性形式直至需要孢子萌发。例如，用细菌孢子组合物处理的植物繁殖材料(如种子)可以在种植前经历几个月的储存期。因此，存在着对于可以刺激细菌孢子在有利条件下快速萌发同时还防止孢子太早萌发直至需要孢子萌发的细菌孢子制剂的需求。

7、此外，用于农业或工业用途的细菌可以暴露于不利于细菌孢子萌发的广泛的环境条件，如低土壤ph、高盐浓度(例如，nacl)和高金属浓度(例如，铜和铝)。因此，存在着对研发能够在这些不利条件下萌发的细菌孢子制剂的需求。

技术实现思路

1、在一个方面中，本发明涉及涂覆有包含细菌孢子和萌发化合物的组合物的植物繁殖材料。在某些实施方案中，将孢子和萌发化合物保持在无活性形式，使得萌发化合物不会诱导孢子的萌发直至组合物经历活化环境。组合物可以进一步包含阻止细菌孢子和萌发化合物相互作用直至组合物经历活化环境的物质。在某些实施方案中，所述物质选自表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂。在某些实施方案中，所述组合物包含细菌孢子和萌发化合物的紧密混合物，其中细菌孢子和萌发化合物保持在邻近的位置直至它们到达有利于萌发的环境。

2、在某些实施方案中，植物繁殖材料选自花、种子、根、果实、块茎、球茎、根茎、芽、苗、种子、叶、秧苗和移植物。在特定实施方案中，植物繁殖材料是种子。植物繁殖材料可以在萌发后或从土壤出芽后移栽。

3、在上述植物繁殖材料的某些实施方案中，细菌孢子选自土壤芽孢杆菌(bacillusagri)、bacillus aizawai、白色芽孢杆菌(bacillus albolactis)、高地芽孢杆菌(bacillus altitudinis)、解淀粉芽孢杆菌、食丁酸芽孢杆菌(bacillusbutanolivorans)、蜡状芽孢杆菌(bacillus cereus)、凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)、bacillus endoparasiticus、bacillus endorhythmos、坚强芽孢杆菌(bacillus firmus)、bacillus kurstaki、bacillus lacticola、乳病芽孢杆菌(bacilluslactimorbus)、乳芽孢杆菌(bacillus lactis)、侧孢芽孢杆菌(bacillus laterosporus)、缓病芽孢杆菌(bacillus lentimorbus)、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、水母芽孢杆菌(bacillus medusa)、bacillus metiens、莫海威芽孢杆菌(bacillus mojavensis)、蕈状芽孢杆菌(bacillus mycoides)、纳豆芽孢杆菌(bacillus natto)、bacillus nigrificans、日本甲虫芽孢杆菌(bacillus popillae)、短小芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌(bacillussiamensis)、简单芽孢杆菌(bacillus simplex)、球形芽孢杆菌(bacillus sphaericus)、芽孢杆菌属(bacillus spp.)、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌(bacillusthuringiensis)、bacillus unifagellatus、热纤梭菌(clostridium thermocellum)、扬氏梭菌(clostridium ljungdahlii)、丙酮丁酸梭菌(clostridium acetobutylicum)、拜氏梭菌(clostridium beijerinckii)、丁酸梭菌(clostridium butyricum)、穿刺巴斯德氏芽菌(pasteuria penetrans)、多刺巴斯德氏芽菌(pasteuria thornei)、pasteurianishizawae和链霉菌属(streptomyces)的种。

4、在上述植物繁殖材料的某些实施方案中，萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸、l-脯氨酸、l-亮氨酸、l-半胱氨酸、l-苏氨酸、l-谷氨酰胺、l-天冬酰胺、l-苯丙氨酸及其类似物。在特定实施方案中，细菌孢子选自枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和短小芽孢杆菌；和萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸和l-天冬酰胺。组合物可以进一步包含种子涂层聚合物。在某些实施方案中，组合物进一步包含选自表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂的物质。

5、在另一个方面中，本发明涉及增强植物繁殖材料的生长或产量的方法，包括用包含细菌孢子和萌发化合物的组合物涂覆植物繁殖材料，其中所述植物繁殖材料的生长或产量相对于没有涂覆所述组合物的相应植物繁殖材料的生长或产量得到增强。在某些实施方案中，将孢子和萌发化合物保持在无活性形式，使得萌发化合物不会诱导孢子的萌发直至组合物经历活化环境。在一些实施方案中，组合物进一步包含阻止细菌孢子和萌发化合物相互作用直至组合物经历活化环境的物质。在一些实施方案中，所述物质选自表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂。

6、在上述方法的某些实施方案中，组合物包含细菌孢子和萌发化合物的紧密混合物，其中细菌孢子和萌发化合物保持在邻近的位置直至它们到达有利于萌发的环境。在某些实施方案中，植物繁殖材料选自花、种子、根、果实、块茎、球茎、根茎、芽、苗、种子、叶、秧苗和移植物。在特定实施方案中，植物繁殖材料是种子。在一些实施方案中，所述方法进一步包括在萌发后或从土壤出芽后移栽所述植物繁殖材料。

7、在某些实施方案中，上述方法中使用的细菌孢子选自土壤芽孢杆菌、bacillusaizawai、白色芽孢杆菌、高地芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、食丁酸芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、bacillus endoparasiticus、bacillus endorhythmos、坚强芽孢杆菌、bacillus kurstaki、bacillus lacticola、乳病芽孢杆菌、乳芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、缓病芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、水母芽孢杆菌、bacillus metiens、莫海威芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、bacillus nigrificans、日本甲虫芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌、简单芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、芽孢杆菌属、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、bacillus unifagellatus、热纤梭菌、扬氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、pasteuria nishizawae和链霉菌属的种。

8、在上述方法的某些实施方案中，萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸、l-脯氨酸、l-亮氨酸、l-半胱氨酸、l-苏氨酸、l-谷氨酰胺、l-天冬酰胺、l-苯丙氨酸及其类似物。在一些实施方案中，细菌孢子选自枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)、坚强芽孢杆菌(b.firmus)、地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)、巨大芽孢杆菌(b.megaterium)和短小芽孢杆菌(b.pumilus)；且萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸和l-天冬酰胺。上述方法中使用的组合物可以进一步包含种子涂层聚合物。在特定实施方案中，组合物包含表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂中的一种或多种。

9、在另一个方面中，本发明涉及包含细菌孢子和萌发化合物的组合物，其中细菌孢子和萌发化合物保持在无活性形式，使得萌发化合物不会诱导孢子的萌发直至组合物经历活化环境。在一些实施方案中，组合物进一步包含阻止细菌孢子和萌发化合物相互作用直至组合物经历活化环境的物质。在一些实施方案中，所述物质选自表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂。

10、在上述组合物的特定实施方案中，细菌孢子选自土壤芽孢杆菌、bacillusaizawai、白色芽孢杆菌、高地芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、食丁酸芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、bacillus endoparasiticus、bacillus endorhythmos、坚强芽孢杆菌、bacillus kurstaki、bacillus lacticola、乳病芽孢杆菌、乳芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、缓病芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、水母芽孢杆菌、bacillus metiens、莫海威芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、bacillus nigrificans、日本甲虫芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌、简单芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、芽孢杆菌属、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、bacillus unifagellatus、热纤梭菌、扬氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、pasteuria nishizawae和链霉菌属的种。

11、在上述组合物的一些实施方案中，萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸、l-脯氨酸、l-亮氨酸、l-半胱氨酸、l-苏氨酸、l-谷氨酰胺、l-天冬酰胺、l-苯丙氨酸及其类似物。在特定实施方案中，细菌孢子选自枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和短小芽孢杆菌；和萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸和l-天冬酰胺。在一些实施方案中，组合物是干粉形式。在一些实施方案中，组合物包括阻止细菌孢子和萌发化合物相互作用直至组合物经历活化环境的物质。在某些实施方案中，组合物是乳液形式。

12、在另一个方面中，本发明涉及用组合物涂覆的植物或植物部分，所述组合物包含：a)细菌孢子；和b)萌发化合物。在另一个方面中，本发明涉及制备涂覆有组合物的植物或植物部分的方法，所述组合物包含：a)细菌孢子；和b)萌发化合物，所述方法包括用组合物处理植物或植物部分。在某些实施方案中，孢子和萌发化合物保持在无活性形式，使得萌发化合物不会诱导孢子的萌发直至组合物经历活化环境。在某些实施方案中，组合物进一步包含阻止细菌孢子和萌发化合物相互作用直至组合物经历活化环境的物质。在某些实施方案中，所述物质选自表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂。在某些实施方案中，组合物包含细菌孢子和萌发化合物的紧密混合物，其中细菌孢子和萌发化合物保持在邻近的位置直至它们到达有利于萌发的环境。

13、在某些实施方案中，植物或植物部分选自花、种子、根、果实、块茎、球茎、根茎、芽、苗、种子、叶、秧苗和移植物。在某些实施方案中，植物或植物部分是种子。在某些实施方案中，在萌发后或从土壤出芽后，用组合物涂覆植物或植物部分。在某些实施方案中，在萌发前或从土壤出芽前，用组合物涂覆植物或植物部分。在某些实施方案中，植物或植物部分是植物繁殖材料。

14、在某些实施方案中，细菌孢子选自土壤芽孢杆菌、bacillus aizawai、白色芽孢杆菌、高地芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、食丁酸芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、bacillus endoparasiticus、bacillus endorhythmos、坚强芽孢杆菌、bacilluskurstaki、bacillus lacticola、乳病芽孢杆菌、乳芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、缓病芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、水母芽孢杆菌、bacillus metiens、莫海威芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、bacillus nigrificans、日本甲虫芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌、简单芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、芽孢杆菌属、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、bacillus unifagellatus、热纤梭菌、扬氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、pasteuria nishizawae和链霉菌属的种。

15、在某些实施方案中，萌发化合物选自果糖、葡萄糖、钾、l-丙氨酸、l-缬氨酸、l-脯氨酸、l-亮氨酸、l-半胱氨酸、l-苏氨酸、l-谷氨酰胺、l-天冬酰胺、l-苯丙氨酸及其类似物。在某些实施方案中，细菌孢子选自枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和短小芽孢杆菌；和萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸和l-天冬酰胺。

16、在某些实施方案中，组合物进一步包含种子涂层聚合物。在某些实施方案中，组合物进一步包含选自表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂的物质。

17、在另一个方面中，本发明涉及增强植物或植物部分中的产量相关性状的方法，包括用组合物处理植物或植物部分，所述组合物包含a)细菌孢子；和b)萌发化合物，其中植物或植物部分中的产量相关性状相对于没有用所述组合物涂覆的相应植物或植物部分的产量相关性状得到了增强。在某些实施方案中，将孢子和萌发化合物保持在无活性形式，使得萌发化合物不会诱导孢子的萌发直至组合物经历活化环境。在某些实施方案中，组合物进一步包含阻止细菌孢子和萌发化合物相互作用直至组合物经历活化环境的物质。在某些实施方案中，所述物质选自表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂。在某些实施方案中，组合物包含细菌孢子和萌发化合物的紧密混合物，其中细菌孢子和萌发化合物保持在邻近的位置直至它们到达有利于萌发的环境。

18、在上述方法的某些实施方案中，植物或植物部分是植物繁殖材料。在某些实施方案中，植物或植物部分是种子。在某些实施方案中，植物或植物部分选自花、种子、根、果实、块茎、球茎、根茎、芽、苗、种子、叶、秧苗和移植物。在某些实施方案中，所述方法包括在萌发后或从土壤出芽后，用组合物处理植物或植物部分。在某些实施方案中，所述方法包括在萌发前或从土壤出芽前，用组合物处理植物或植物部分。

19、在某些实施方案中，细菌孢子选自土壤芽孢杆菌、bacillus aizawai、白色芽孢杆菌、高地芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、食丁酸芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、bacillus endoparasiticus、bacillus endorhythmos、坚强芽孢杆菌、bacilluskurstaki、bacillus lacticola、乳病芽孢杆菌、乳芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、缓病芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、水母芽孢杆菌、bacillus metiens、莫海威芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、bacillus nigrificans、日本甲虫芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌、简单芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、芽孢杆菌属、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、bacillus unifagellatus、热纤梭菌、扬氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、pasteuria nishizawae和链霉菌属的种。

20、在某些实施方案中，萌发化合物选自果糖、葡萄糖、钾、l-丙氨酸、l-缬氨酸、l-脯氨酸、l-亮氨酸、l-半胱氨酸、l-苏氨酸、l-谷氨酰胺、l-天冬酰胺、l-苯丙氨酸及其类似物。在某些实施方案中，细菌孢子选自枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和短小芽孢杆菌；和萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸和l-天冬酰胺。在某些实施方案中，组合物进一步包含种子涂层聚合物。在某些实施方案中，组合物进一步包含表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂中的一种或多种。

21、在另一个方面中，本发明涉及用于处理废水的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物加入废水中。

22、在另一个方面中，本发明涉及用于环境治理的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物施用于土壤或水。

23、在另一个方面中，本发明涉及用于处理水产养殖系统中的水的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物接触水产养殖系统中的水。在某些实施方案中，水产养殖系统包括动物。

24、在另一个方面中，本发明涉及用于在水产养殖系统中饲喂动物的方法，包括将包含组合物的动物饲料给予水产养殖系统中的动物，所述组合物包含细菌孢子和萌发化合物。

25、在上述方法的某些实施方案中，动物选自鱼、虾或软体动物。在某些实施方案中，水产养殖系统包括选自弧菌属(vibrio)的种、气单胞菌属(aerononas)的种和黄杆菌属(flavobacterium)的种的病原体。在某些实施方案中，动物的生长相对于没有用组合物处理的水产系统中的动物得到了提高。在某些实施方案中，组合物是颗粒、压块(briquettes)、丸状、药片或胶囊的形式。

26、在另一个方面中，本发明涉及包含组合物和可接受载体的益生剂，所述组合物包含细菌孢子和萌发化合物。在某些实施方案中，可接受载体选自动物饲料、奶、酸奶、奶酪、发酵奶、谷物、发酵谷物、汁液、冰激凌或用于婴儿或儿童的配方食品(formulation)。

27、在另一个方面中，本发明涉及制备益生剂的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物与可接受载体混合。在某些实施方案中，可接受载体选自动物饲料、奶、酸奶、奶酪、发酵奶、谷物、发酵谷物、汁液、冰激凌或用于婴儿或儿童的配方食品。

28、在另一个方面中，本发明涉及用于饲喂动物的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物给予动物。在某些实施方案中，动物选自家禽、反刍动物、牛、猪、兔子、马、甲壳类、软体动物、鱼和宠物。

29、在另一个方面中，本发明涉及包含组合物和可接受载体的直接饲喂微生物，所述组合物包含细菌孢子和萌发化合物。在某些实施方案中，载体选自动物饲料、代乳品、乳清、植物油、蔗糖、二氧化硅、聚山梨酸酯80、丙二醇、丁羟基茴香醚、柠檬酸、乙氧喹、石灰石、稻壳、酵母培养物、麦芽糊精(malodextrin)、蔗糖、右旋糖、干淀粉和铝硅酸钠。

30、在另一个方面中，本发明涉及制备直接饲喂微生物的方法，包括将包含孢子和萌发化合物的组合物与可接受载体混合。在某些实施方案中，可接受载体选自动物饲料、代乳品、乳清、植物油、蔗糖、二氧化硅、聚山梨酸酯80、丙二醇、丁羟基茴香醚、柠檬酸、乙氧喹、石灰石、稻壳、酵母培养物、麦芽糊精、蔗糖、右旋糖、干淀粉和铝硅酸钠。

31、在另一个方面中，本发明涉及包含组合物和可接受载体的清洁产品，所述组合物包含细菌孢子和萌发化合物。在某些实施方案中，可接受载体选自去污剂、肥皂和香精。

32、在另一个方面中，本发明涉及制备清洁产品的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物与可接受载体混合。在某些实施方案中，可接受载体选自去污剂、肥皂和香精。

33、在另一个方面中，本发明涉及从废料产生甲烷的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物施用于废料。

34、在另一个方面中，本发明涉及处理动物废物、草垫或褥草的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物施用于动物废物、草垫或褥草。

35、在另一个方面中，本发明涉及制备青贮饲料的方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物施用于青贮饲料。

36、在另一个方面中，本发明涉及用于微生物增强采油(meor)方法，包括将包含细菌孢子和萌发化合物的组合物施用于油井。在某些实施方案中，细菌孢子选自枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和莫海威芽孢杆菌。

37、在另一个方面中，本发明涉及一种治疗或预防易感疾病或患有疾病的受试者的疾病的方法，包括将有效量的包含细菌孢子和萌发化合物的组合物给药于受试者，由此治疗或预防受试者的疾病。在某些实施方案中，疾病是细菌疾病、真菌疾病或病毒疾病。在某些实施方案中，疾病是坏死性肠炎。在某些实施方案中，受试者是鸡、火鸡或鸭。在某些实施方案中，受试者感染了产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)。在某些实施方案中，治疗或预防疾病导致与没有施用组合物的受试者相比，降低死亡率、减少病变数量和提高增重。

38、在上述任一方法的某些实施方案中，将孢子和萌发化合物保持在无活性形式，使得萌发化合物不会诱导孢子的萌发直至组合物经历活化环境。

39、在上述任一方法的某些实施方案中，组合物进一步包含阻止细菌孢子和萌发化合物相互作用直至组合物经历活化环境的物质。在上述任一方法的某些实施方案中，所述物质选自表面活性剂、遮蔽剂、塑化剂、着色剂、染料、增亮剂、乳化剂、助流剂、凝结剂、消泡剂、增稠剂、蜡、杀菌剂、填充剂、聚合物、润湿剂和防冻剂。

40、在上述任一方法的某些实施方案中，组合物包含细菌孢子和萌发化合物的紧密混合物，其中细菌孢子和萌发化合物保持在邻近的位置直至它们到达有利于萌发的环境。

41、在上述任一方法的某些实施方案中，细菌孢子选自土壤芽孢杆菌、bacillusaizawai、白色芽孢杆菌、高地芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、食丁酸芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、bacillus endoparasiticus、bacillus endorhythmos、坚强芽孢杆菌、bacillus kurstaki、bacillus lacticola、乳病芽孢杆菌、乳芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、缓病芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、水母芽孢杆菌、bacillus metiens、莫海威芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、bacillus nigrificans、日本甲虫芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌、简单芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、芽孢杆菌属、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、bacillus unifagellatus、热纤梭菌、扬氏梭菌、丙酮丁酸梭菌、拜氏梭菌、丁酸梭菌、穿刺巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、pasteuria nishizawae和链霉菌属的种。

42、在上述任一方法的某些实施方案中，萌发化合物选自果糖、葡萄糖、钾、l-丙氨酸、l-缬氨酸、l-脯氨酸、l-亮氨酸、l-半胱氨酸、l-苏氨酸、l-谷氨酰胺、l-天冬酰胺、l-苯丙氨酸及其类似物。

43、在上述任一方法的某些实施方案中，细菌孢子选自枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和短小芽孢杆菌；和萌发化合物选自l-丙氨酸、l-缬氨酸和l-天冬酰胺。

44、在上述任一方法的某些实施方案中，组合物是干粉形式。

45、在上述任一方法的某些实施方案中，组合物是乳液形式。