新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法与流程

本发明属于新疆一支蒿的组织培养，特别涉及新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法。

背景技术：

1、新疆一支蒿（artemisia rupestris l.），为菊科艾属植物岩蒿 artemisiarupestris l.，以全草入药，为多年生草本植物，主要分布于我国新疆，生长在海拔 1600～3700m 森林草原带。多个中药方剂中均应用一枝蒿，由于一枝蒿疗效显著，至使近年来人为滥采滥挖，野生一枝蒿资源破坏严重，分布面积及密度逐年缩小，价格也随之逐年上涨，具有很高的药用和生产价值。

2、目前，一支蒿主要通过温室播种育苗或大田撒播育苗，耕地、整地后，通过沟播（或畦播、条播）、培育壮苗等田间管理后，才能进行大田移栽，种子繁殖变异性较大，种苗品质特性不均一，并且其操作复杂、繁殖周期长，劳动工作量大，难以实现一支蒿机械化、规模化、产业化生产需要。

3、常规组培苗生根培养是在含有的蔗糖培养基中，很容易造成污染，而且生根培养时间较长；且组培生根培养和炼苗操作复杂繁琐，耗费时间较多，工作量大，对对规模化生产有一定局限性，难以实现快速扩繁的目的。因此，急需一种新疆一枝蒿组织快繁的方法，用以解决一枝蒿现实生产需求。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中中缺乏新疆一枝蒿组培苗生根培养方法、且现有组培方法容易造成污染、生根时间长、且生根培养和炼苗操作复杂繁琐、耗费时间多、工作量大等技术问题，本发明提供了新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

3、本发明提供了新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，所述方法包括以下步骤：

4、a、将新疆一支蒿种子无菌、消毒处理，然后进行无菌水冷冻处理；将处理后的一支蒿种子接种于萌发培养基中培养，获得无菌苗；

5、b、将步骤a获得的无菌苗剪取茎段接种到含无糖培养液和激素的培养基质中，通过调节培养条件连续生根和壮苗培养，培养后进行移栽；

6、步骤a中萌发培养基为：质量分数为20-30%蔗糖和7-7.5%琼脂的1/2ms固体培养基；

7、步骤b中所述含无糖培养液为不含任何有机糖的1/2ms液体培养基，所述激素为0.01-0.02mg/l的吲哚丁酸（iba）或0.03-0.05mg/l的萘乙酸（naa），所述培养基质为蛭石、珍珠岩、沙或石棉；培养条件包括起初培养和壮苗培养条件。

8、进一步地，步骤b中，起初培养条件为：温度23-25℃，3000-5000lx光照培养2-3天，14-16 h/天。

9、进一步地，步骤b中，壮苗培养条件为：温度为23-25℃，光强为5000-8000 lx，光照时间为16-18 h/天，增加co2供气量，起始供气量为400-600ml/min，光照时每供气10-20min暂停10-20 min后再供气10-20min，如此反复，每隔两天供气量增加200ml/min，增加至1000-1500ml/min通气量不在增加，培养10-15天后进行移栽。

10、进一步地，步骤a中培养条件为：温度为23-25℃，暗培养1-2天，然后置于光照连续培养10-15天，温度为23-25℃，光照时间为14-16h/天，光照强度为5000-8000lx。

11、更进一步地，步骤a或步骤b中，ph调节到5.8-6.0。

12、进一步地，步骤a中的无菌、消毒处理为：先用0.05%tween20的无菌水进行清洗1-2次，然后用无菌水洗涤2-3次，0.5-1.0 min/次；然后加入消毒溶液缓慢振荡消毒，消毒溶液为75%的酒精溶液，浸泡20-30s后，无菌水清洗2-3次，每次2-3 min/次；再用2-5%的naclo消毒液震荡消毒2-5 min，最后无菌水洗涤3-5次，2-3 min/次。

13、进一步地，无菌水冷冻处理的条件为：无菌水在-20℃温度下冷冻处理10-15min。

14、本发明提供了新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，实现了新疆一支蒿的组织培养及快速繁殖技术，组培苗生根与壮苗一步培养法，组培苗生根培养液采用不含任何有机糖（比如蔗糖）的1/2ms培养基+0.01-0.02mg/l的吲哚丁酸（iba）或0.03-0.05mg/l的萘乙酸（naa），培养基简单且大大降低污染概率，生根快，几天内即可长出健壮根系；协同控制光照条件和co2通气量，进一步促进组培苗自养生长，对外界生长环境适应性强，大大缩短培养周期。该方法操作简便，生根和壮苗两个步骤同时进行，整个培养过程极大缩短培养周期，同时降低污染，提高成活率，可以为实现大量选育、快速繁殖，规模化推广提供技术支持。

技术特征：

1.新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，其特征在于，步骤b中，起初培养条件为：温度为23-25℃，3000-5000lx光照培养2-3天，14-16h/天。

3.如权利要求1或2所述的新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，其特征在于，步骤b中，壮苗培养条件为：温度为23-25℃，光强为5000-8000 lx，光照时间为16-18 h/天，增加co2供气量，起始供气量为400-600ml/min，光照时每供气10-20min暂停10-20min后再供气10-20min，如此反复，每隔两天供气量增加200ml/min，增加至1000-1500ml/min通气量不在增加，培养10-15天后进行移栽。

4.如权利要求1所述的新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，其特征在于，步骤a中培养条件为：温度为23-25℃，暗培养1-2天，然后置于光照继续培养10-15天，温度为23-25℃，光照时间为14-16h/天，光照强度为5000-8000lx。

5.如权利要求1所述的新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，其特征在于，步骤a或步骤b中，ph调节到5.8-6.0。

6.如权利要求1所述的新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，其特征在于，步骤a中的无菌、消毒处理为：先用0.05% tween20的无菌水进行清洗1-2次，然后用无菌水洗涤2-3次，0.5-1.0min/次；然后加入消毒溶液缓慢振荡消毒，消毒溶液为75%的酒精溶液，浸泡20-30s后，无菌水清洗2-3次，每次2-3 min/次；再用2-5%的naclo震荡消毒2-5min，最后无菌水洗涤3-5次，2-3min/次。

7.如权利要求1或6所述的新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法，其特征在于，无菌水冷冻处理的条件为：无菌水在-20℃温度下冷冻处理10-15min。

技术总结
本发明属于新疆一支蒿的组织培养技术领域，公开了新疆一枝蒿组织培养及快速繁殖方法。该方法包括：A、将新疆一支蒿种子杀菌培养获得无菌苗；B、将步骤A获得的无菌苗剪取茎段接种到含无糖培养液和激素的培养基质中，通过调节培养条件连续生根和壮苗培养，培养后进行移栽；步骤B中所述含无糖培养液为不含任何有机糖的1/2MS液体培养基，所述激素为0.01‑0.02mg/l的吲哚丁酸（IBA）或0.03‑0.05mg/L的萘乙酸（NAA），所述培养基质为蛭石、珍珠岩、沙或石棉；培养条件包括起初培养和壮苗培养条件。该方法操作简便，生根和壮苗两个步骤同时进行，整个培养过程极大缩短培养周期，同时降低污染，提高成活率。

技术研发人员：郝小军,潘虹,林慧
受保护的技术使用者：新疆中亚果树产业研究院有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15