一种细胞冻存保护液及其冻存方法与流程

本发明涉及细胞冻存，尤其涉及一种细胞冻存保护液及其冻存方法。

背景技术：

1、近些年，我国生物医疗产业发展迅速，细胞医疗技术的发展更是如火如荼。新鲜细胞产品保存时限较短，使临床应用受到很大的区域限制，故多为冻存制剂，既能满足产品的质量检测需要，又能满足临床应用的实际需求。但细胞冻存过程对细胞有伤害，所以需要细胞冻存保护液来减低细胞的损伤。

2、低温保护剂主要分为两大类：可渗透性保护剂和非渗透性保护剂。其中，可渗透性保护剂是指能够通过细胞膜渗透到细胞内的化合物，它可以有效地抑制细胞内冰晶的生成并防止细胞膜发生破裂分解，因此也称其为“胞内保护剂”，常见的可参透性保护剂有：二甲基亚讽、醇类等；非渗透性保护剂是指不能通过跨膜运动进入到细胞内部的化合物，它可以有效地减小胞外溶液在冻结过程中产生的高渗效应，因此也称其为“胞外保护剂”，常见的非渗透性保护剂有：糖类、氨基酸、羟乙基淀粉注射液、聚乙二醇等。

3、传统的冻存液中添加大量的dmso，高剂量的dmso可能会促使神经元系统中的干细胞发生变异，提高应用风险。

4、综上所述，如何制备一种含有低浓度的dmso、且不影响冻存效果的冻存液，，是目前本领域技术人员亟待解决的问题。

技术实现思路

1、本发明实施例的主要目的在于提出种细胞冻存保护液及其冻存方法，旨在制备一种低浓度dmso的冻存液。

2、本发明解决上述技术问题的技术方案是，提供一种细胞冻存保护液，包括以下体积比组分：

3、2％的dmso；

4、5％～10％的复方甘油溶液；

5、30％的人血白蛋白；

6、2％～10％的乙酰半胱氨酸注射液；

7、48％～61％的低分子右旋糖酐氨基酸注射液。

8、在本发明一实施例中，所述细胞冻存保护液包括以下体积比组分：

9、2％的dmso；

10、5％的复方甘油溶液；

11、30％的人血白蛋白；

12、2％的乙酰半胱氨酸注射液；

13、61％的低分子右旋糖酐氨基酸注射液。

14、在本发明一实施例中，所述复方甘油溶液包括甘油、乳酸钠、磷酸氢二钠、氯化钾的灭菌水溶液。

15、本发明还提出一种冻存方法，包括以下步骤：

16、取细胞与如上所述的细胞冻存保护液，混匀，冻存。

17、在本发明一实施例中，所述细胞包括nk、cik、til。

18、在本发明一实施例中，所述细胞冻存液保护液的密度为2*107cell/ml～1*108cell/ml。

19、在本发明一实施例中，所述细胞冻存液保护液的体积量为20ml～50ml/制剂，细胞量为4*108～5*109/制剂。

20、本发明技术方案的dsmso为usp临床级，其使用浓度为2％，细胞毒性降至最低，大大提升临床安全性；大量使用人血白蛋白和右旋糖酐作为血液营养成分或扩充血容量使用，对身体无害，无副作用；低剂量使用复方甘油溶液和乙酰半胱氨酸注射液用于利尿和抗氧化作用，对人体也是有益无害；本申请的冻存液能够实现高密度的细胞冻存，大大降低冻存液使用量，避免高剂量回输dmso带来的安全隐患；且本申请的冻存细胞复苏后无需洗涤，经盐水稀释后即可使用。

技术特征：

1.一种细胞冻存保护液，其特征在于，包括以下体积比组分：

2.根据权利要求1所述的细胞冻存保护液，其特征在于，所述细胞冻存保护液包括以下体积比组分：

3.根据权利要求1所述的细胞冻存保护液，其特征在于，所述复方甘油溶液包括甘油、乳酸钠、磷酸氢二钠、氯化钾的灭菌水溶液。

4.一种冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求1所述的冻存方法，其特征在于，所述细胞包括nk、cik、til。

6.根据权利要求1所述的冻存方法，其特征在于，所述细胞冻存液保护液的密度为2*107cell/ml～1*108cell/ml。

7.根据权利要求1所述的冻存方法，其特征在于，所述细胞冻存液保护液的体积量为20ml～50ml/制剂，所述细胞的量为4*108～5*109/制剂。

技术总结
本发明公开一种细胞冻存保护液及其冻存方法，包括以下体积比组分：2％的DMSO；5％～10％的复方甘油溶液；30％的人血白蛋白；2％～10％的乙酰半胱氨酸注射液；48％～61％的低分子右旋糖酐氨基酸注射液。本发明的DSMSO为USP临床级，其使用浓度可降至2％，细胞毒性降至最低，大大提升临床安全性；大量使用人血白蛋白和右旋糖酐作为血液营养成分或扩充血容量使用，对身体无害，无副作用；低剂量使用复方甘油溶液和乙酰半胱氨酸注射液用于利尿和抗氧化作用，对人体也是有益无害；本申请的冻存液能够实现高密度的细胞冻存，大大降低冻存液使用量，避免高剂量回输DMSO带来的安全隐患；且本申请的冻存细胞复苏后无需洗涤，经盐水稀释后即可使用。

技术研发人员：姜丽君,孙红雪,王健英
受保护的技术使用者：吉林省拓华生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15