一拌一包两喷技术在芝麻全生育期枯萎病防治中的应用

本发明涉及一种将微生物菌剂、种衣剂和杀菌剂在芝麻不同生长阶段搭配使用的芝麻枯萎病防治技术，属于植物病害防治。

背景技术：

1、芝麻中含有多种不饱和脂肪酸和氨基酸，以及较高的木酚素、维生素e等抗氧化物质和丰富的矿物质，极具营养价值，是我国特色优质油料作物之一，在我国已有2200多年的栽培历史。由于芝麻整个生育期正值高温多雨季节，极易受到多种病原菌的侵染，芝麻枯萎病是其最重要的真菌病害之一，在芝麻整个生育期均有可能发生，该病发生后症状不能完全恢复，会持续表现甚至逐渐加重。该病是由尖孢镰刀菌引起的一种维管束病害，病原菌以菌丝或厚垣孢子在土壤中越冬，并可在土壤中存活6年以上，致使枯萎病发病率连年增加。芝麻枯萎病主要在我国黄淮流域、华北和东北等地区普遍发生，常年发病率在15％左右，严重时高达30％～40％。芝麻枯萎病的发生常造成植株枯萎、籽粒干瘪及灰分和油脂酸价升高，对芝麻产量、籽粒外观和芝麻油品质具有较大影响。

2、由于芝麻上枯萎病的免疫和高抗种质资源比例较低，极大限制了抗病育种工作的进程，以至于生产上主推芝麻品种的枯萎病抗性不足。目前该病在生产上仍以化学防治为主，但高效化学药剂缺乏，且由于芝麻枯萎病是根系侵染、维管束传输病害，具备侵染隐蔽和防治困难的特点，因此该病的防治应以预防为主，防治为辅。微生物菌剂具备安全高效、环境友好的特性，将其施用到土壤中，可对病原菌起到持续性抑制作用；苗期芝麻枯萎病的发生主要由种子带菌引起，对种子包衣处理，可有效预防苗期芝麻枯萎病的发生；在病害初显时，及时喷施杀菌剂可减缓枯萎病的进程，对未发病植株起到保护作用。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种一拌一包两喷的芝麻全生育期枯萎病高效防控方法，即采用微生物菌剂拌土、种衣剂包衣和两次杀菌剂喷雾的芝麻全生育期枯萎病高效防控的方法。

2、为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

3、一拌一包两喷技术在芝麻全生育期枯萎病防控中的应用，通过在芝麻播种前采用微生物菌剂拌土，对芝麻种子采用种衣剂包衣，并在芝麻生长期内采用杀菌剂喷雾的方法，实现芝麻全生育期内的枯萎病防控。

4、所述微生物菌剂为哈茨木霉或枯草芽孢杆菌；种衣剂为多·福、苯醚甲环唑或噻虫·咯·霜灵；杀菌剂为腈菌·乙嘧酚或吡唑醚菌酯。

5、所述的一拌一包两喷技术在芝麻全生育期枯萎病防控中的应用，具体方法为：

6、(1)微生物菌剂拌土：将哈茨木霉或枯草芽孢杆菌拌细土后，均匀撒施到土壤表面；哈茨木霉或枯草芽孢杆菌的用量均为1000g/亩；

7、(2)种衣剂包衣：用活性氯含量2％的naclo溶液对芝麻种子表面消毒15min，再用无菌水冲洗3遍后，将芝麻种子置于无菌滤纸上，室温晾干，备用；

8、取种衣剂，在种衣剂中加入适量无菌水混匀制成药浆，加入晾干的种子进行包衣，药浆：种子的质量比为1：20；

9、采用的种衣剂为多·福、苯醚甲环唑或噻虫·咯·霜灵；

10、多·福与芝麻种子的质量比为1：60-90；

11、苯醚甲环唑用量为750ml/100kg种子，噻虫·咯·霜灵用量为3000ml/100kg种子；

12、多·福质量浓度为15％；苯醚甲环唑浓度为30g/l；噻虫·咯·霜灵质量浓度为25％；

13、(3)杀菌剂喷雾：在芝麻出苗后出现枯萎病症状时，使用杀菌剂腈菌·乙嘧酚或吡唑醚菌酯进行第一次喷雾，间隔14d进行第二次喷雾；

14、杀菌剂腈菌·乙嘧酚的用量为35ml/亩，吡唑醚菌酯的用量为30ml/亩，喷雾用水量按30l/亩计算；腈菌·乙嘧酚的质量浓度为30％，其中含有10％的腈菌唑和20％乙嘧酚，吡唑醚菌酯采用30％的吡唑醚菌酯悬浮剂。

15、所述微生物菌剂为哈茨木霉菌；种衣剂为苯醚甲环唑；杀菌剂为腈菌·乙嘧酚。

16、一种芝麻全生育期枯萎病防控中种衣剂的筛选方法，包括以下步骤：

17、(1)使用培养皿培养法对种衣剂进行筛选，筛选时设置对照组，通过调查对照组发病率在45％-55％和95％-100％时，皿内各处理组的发病率和防治效果，来筛选种衣剂；

18、(2)通过盆栽试验，验证皿内种衣剂筛选结果；

19、(3)通过调查发病率在45％-55％时皿内不同种衣剂处理组的发病率，筛选种衣剂。

20、所述培养皿培养法对种衣剂进行筛选的具体方法为：

21、将超低温保存的尖孢镰刀菌8f27接种到pda平板上培养3-5d，取3块直径6mm的菌饼接种到200ml pdb培养液中，置于恒温摇床上27℃、160r/min培养4-6d，用纱布过滤去除菌丝碎片，收集滤液，用血球计数板计数孢子浓度，并调整浓度为1.0×107个/ml，备用；

22、用质量浓度为2％的naclo对芝麻种子表面消毒15min，以无菌水冲洗3遍后，将芝麻种子置于无菌滤纸上室温晾干，分别将咯菌·嘧菌酯、苯醚甲环唑、咯菌腈、苯醚·咯·噻虫、多·福和噻虫·咯·霜灵6种供试种衣剂按要求加入适量无菌水混匀稀释成药浆，按照药浆：种子＝1：20的比例进行包衣；

23、将无菌滤纸浸入1.0×107个/ml的尖孢镰刀菌的孢子悬浮液中，然后将滤纸取出铺到直径12cm的培养皿中，每个培养皿铺两层带菌滤纸，分别将供试种衣剂包衣处理过的芝麻种子均匀撒入培养皿内，每皿50粒，每处理4皿，以未包衣的芝麻种子作为对照，盖上皿盖，置于16h光照/8h黑暗的光循环条件下培养，每天补充2ml/皿无菌水保持湿润，分别在对照组发病率在45％-55％和95％-100％时，记录不同处理芝麻植株的发病率和严重度，计算病情指数和防治效果。

24、所述盆栽试验的具体方法为：

25、依据种衣剂皿内筛选试验结果，选取多·福、苯醚甲环唑、噻虫·咯·霜灵和苯醚·咯·噻虫进行盆栽试验；

26、将121℃高压蒸汽灭菌120min的大田土壤与草炭土3:1混匀后，将尖孢镰刀菌8f27的孢子悬浮液拌入土中搅拌均匀，使土中尖孢镰刀菌的孢子含量达到1×106个/g；然后分别将多·福、苯醚甲环唑、噻虫·咯·霜灵和苯醚·咯·噻虫包衣的芝麻种子点播于装有菌土的营养钵中，每盆点播8粒，每处理6盆，重复3次；分别在出苗后15d、30d和45d时，调查发病情况，计算病情指数和防治效果；

27、最后得到防治效果从强至弱的种衣剂为：多·福、苯醚甲环唑、噻虫·咯·霜灵和苯醚·咯·噻虫。

28、通过皿内培养法从6种种衣剂中筛选到4种高效种衣剂，通过盆栽试验验证了皿内培养法的筛选结果，并通过盆栽试验对其中3种高效种衣剂的最佳用量进行了测定，得到了3种高效种衣剂的最佳用量。

29、对杀菌剂的筛选，分别使用了皿内毒力测定和盆栽试验两种方法。本发明中供试的15种杀菌剂在皿内抑菌活性与盆栽防治效果存在很大差异，供试杀菌剂在皿内毒力测定中对尖孢镰刀菌的生长均有一定抑制作用，但其中仅10种对盆栽中芝麻枯萎病有防治效果。从ec50来看，氟环唑、苯甲·吡唑酯和苯醚甲环唑抑菌活性最强，但在盆栽实验中，氟环唑使芝麻植株明显矮化，腈菌·乙嘧酚处理组防治效果最好。

30、腈菌乙嘧酚中含有10％的腈菌唑和20％乙嘧酚，其中腈菌唑是内吸性三唑类杀菌剂，乙嘧酚属内吸性杂环类杀菌剂，据已有报道，两者均对白粉病防治效果显著，但两者对芝麻枯萎病的防治效果未见报道。由于芝麻枯萎病具备根系侵染、维管束传输的特点，药剂对枯萎病的防治效果与药剂的内吸性密切相关，盆栽试验结果比室内毒力测定更直观可靠。

31、生防菌株在枯萎病防治中有极大应用潜力，其中芽孢杆菌和木霉菌繁殖速度快、生命力强，施入土壤后有较强的定殖能力，并可产生有机酸、酶以及抗菌肽等抑菌活性代谢物质，可有效阻止病原菌对植株侵染。针对土传病害的枯草芽孢杆菌和哈茨木霉已开发出商品化制剂应用到田间。

32、本发明有益效果：

33、(1)本发明对种衣剂和杀菌剂进行筛选，结合微生物菌剂拌土，将种衣剂、微生物菌剂和喷雾用杀菌剂在芝麻不同生长阶段搭配使用。在播种前使用种衣剂包衣；在播种时将微生物菌剂拌土施用，微生物菌剂在整个生育期持续作用；在芝麻植株表现出枯萎病症状时使用杀菌剂喷雾。其中种衣剂和微生物菌剂以防为主，杀菌剂以治疗为主，通过防治结合实现了芝麻全生育期枯萎病的高效防控。

34、(2)本发明筛选到三种高效种衣剂多·福、苯醚甲环唑和噻虫·咯·霜灵，并明确了这三种种衣剂的最佳使用浓度。通过盆栽试验，筛选到对枯萎病防治效果最好的杀菌剂为腈菌·乙嘧酚，其次为吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑。在微生物菌剂、种衣剂和杀菌剂组合使用的防治试验中，筛选出哈茨木霉&苯醚甲环唑&腈菌·乙嘧酚的组合，对全生育期芝麻枯萎病的防治效果较好，全生育期的防治效果均在84％以上。

35、(3)本发明在高效种衣剂和杀菌剂的基础上，增加了在土传病害防治中应用的微生物菌剂(枯草芽孢杆菌和哈茨木霉)，实现了芝麻全生育期枯萎病的较好防控。

36、(4)在种衣剂筛选试验中，不同种衣剂对盆栽中芝麻枯萎病的防治效果与培养皿内试验结果相一致，证明了皿内试验筛选种衣剂的方法具有可行性。盆栽中种衣剂的防治效果从高到低的趋势与皿内试验发病率从低到高的趋势一致，通过种衣剂的发病率反向表征种衣剂的防治效果。另外，皿内试验表明，处理16d时对照组发病率在48.14％时，各种衣剂的发病率趋势与20d对照发病率在96.94％时趋势一致，即发病率50％左右时调查发病率已具备代表性。因此，可通过调查皿内对照组发病率在50％左右时筛选高效种衣剂。

37、(5)本发明通过比较皿内和盆栽两种种衣剂筛选方法，证明了皿内筛选种衣剂的可行性，与盆栽筛选相比，皿内筛选试验简化了筛选过程，节省了筛选时间和成本，明确了通过盆栽试验筛选枯萎病杀菌剂的方法更高效，通过配合施用种衣剂、杀菌剂和微生物菌剂，得到了全生育期枯萎病高效防控方法，为芝麻枯萎病全生育期高效防控提供了理论指导。