一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法

本发明涉及组织培养，尤其涉及一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法。

背景技术：

1、植物组织培养是在人为创造的无菌条件下将活的离体器官(如根、茎、叶、茎段和原生质体等)、组织或细胞置于培养基内，并放在适宜的环境中，进行连续培养以获得细胞、组织或个体的技术，这种技术已广泛应用于农业、生物和医药的研究。植物组织培养利用的是细胞全能性，是指已经分化的细胞，仍然具有发育成完整生物体的潜能。每个植物细胞里都含有一整套遗传物质，但只会在特定条件下才会表达。组织培养基于此原理就可以将已处于分化终端或正在分化的植物组织脱分化，诱导形成愈伤组织，再在愈伤组织上诱导形成新的丛生芽。

2、对植物茎段、叶片进行切割时，需要多次交换双手使用镊子、剪刀和解剖刀进行操作，在此过程容易造成污染；同时由于培养瓶口的限制，不便于将植物材料放入培养基中的指定位置；此外，样品和镊子接触时不容易掌握力道很可能破坏样品组织，引起植物发育不良。使用组培袋进行培养有利于节省空间并且袋口较大利于苗的放置，但存在的问题是组培袋的植株污染率较高。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，降低由于使用组培袋作为生根培养容器引发的植株污染率高的问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，包括如下步骤：

4、(1)选取秋石斛萌芽的茎尖作为外植体，接种到丛生芽诱导培养基中，进行诱导培养，得到秋石斛丛生芽；

5、(2)将所述秋石斛丛生芽分割后，接种到丛生芽增殖培养基中，进行增殖培养，得到秋石斛壮苗；

6、(3)将所述秋石斛壮苗分割后，接种到装有生根培养基的组培袋中，进行生根培养，得到秋石斛完整植株，所述生根培养基装入组培袋后使用刮板进行整理，使粘附于组培袋侧壁上的生根培养基聚集到底部；

7、所述生根培养基的组成为：1/2ms+土豆粉15～20g/l+成熟西红柿汁4～6ml/l+花宝一号0.8～1.2g/l+活性炭0.3～0.7g/l+naa4～6mg/l+蔗糖8～12g/l+卡拉胶5～7g/l。

8、优选的，所述丛生芽诱导培养基的组成为：ms+6-ba2.0～4.0mg/l+naa0.1～0.3mg/l+ga30.3～0.5mg/l+蔗糖25～35g/l+琼脂粉5～6g/l。

9、优选的，所述诱导培养的条件为：23～27℃下培养18～22d，每天14～16h光照，8～10h黑暗，光照强度为1500～2000lx。

10、优选的，所述丛生芽增殖培养基的组成为：ms+6-ba1.0～3.0mg/l+naa0.08～0.12mg/l+蔗糖25～35g/l+琼脂5～7g/l。

11、优选的，所述增殖培养的条件为：23～27℃下培养30～35d，每天14～16h光照，8～10h黑暗，光照强度为1500～2000lx。

12、优选的，所述增殖培养后还进行一次继代培养，获得秋石斛壮苗。

13、优选的，所述生根培养的条件为：23～27℃下培养50～60d后，每天12～13h光照，11～12h黑暗，光照强度为1500～1800lx。

14、本发明提供了一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，并提供了一种适合组培袋培养的生根培养基，本发明通过在生根培养基中添加成熟西红柿汁大大降低了秋石斛植株的污染率，且通过优化生根培养基的成分和用量提高了秋石斛植株的生根率。

技术特征：

1.一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基的组成为：ms+6-ba 2.0～4.0mg/l+naa 0.1～0.3mg/l+ga30.3～0.5mg/l+蔗糖25～35g/l+琼脂粉5～6g/l。

3.如权利要求2所述的利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，其特征在于，所述诱导培养的条件为：23～27℃下培养18～22d，每天14～16h光照，8～10h黑暗，光照强度为1500～2000lx。

4.如权利要求1所述的利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，其特征在于，所述丛生芽增殖培养基的组成为：ms+6-ba 1.0～3.0mg/l+naa 0.08～0.12mg/l+蔗糖25～35g/l+琼脂5～7g/l。

5.如权利要求4所述的利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，其特征在于，所述增殖培养的条件为：23～27℃下培养30～35d，每天14～16h光照，8～10h黑暗，光照强度为1500～2000lx。

6.如权利要求5所述的利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，其特征在于，所述增殖培养后还进行一次继代培养，获得秋石斛壮苗。

7.如权利要求1所述的利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，其特征在于，所述生根培养的条件为：23～27℃下培养50～60d后，每天12～13h光照，11～12h黑暗，光照强度为1500～1800lx。

技术总结
本发明提供了一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，本发明属于组织培养技术领域。本发明提供的一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，包括如下步骤：(1)选取秋石斛萌芽的茎尖作为外植体，接种到丛生芽诱导培养基中，进行诱导培养，得到秋石斛丛生芽；(2)将所述秋石斛丛生芽分割后，接种到丛生芽增殖培养基中，进行增殖培养，得到秋石斛壮苗；(3)将所述秋石斛壮苗分割后，接种到装有生根培养基的组培袋中，进行生根培养，得到秋石斛完整植株。本发明提供了一种利用组培袋培养秋石斛组培苗的方法，降低了秋石斛组培植株的污染率，提高了秋石斛组培植株的生根率。

技术研发人员：于晓云,陆顺教,廖易,黄明忠,张志群,易双双,罗小燕,李崇晖
受保护的技术使用者：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16