一种子痫前期动物模型的构建方法及应用

本发明属于生物医疗中动物模型构建，具体涉及一种子痫前期动物模型的构建方法及应用。

背景技术：

1、子痫前期(preeclampsia，pe)是一种妊娠相关的、累及多器官的、系统性、进行性妊娠并发症，严重威胁母体和胎儿的生命健康。pe的发病机制不明，目前唯一有效的治疗方法就是分娩，因此最新指南将pe的发病归因于胎盘功能异常。

2、因此，亟需合理的动物模型研究pe的发病机制及研发相应的防治方法。目前已知的动物模型有脂多糖诱导的炎症模型、rupp术式的血管狭窄模型、血管内皮损伤模型及apoe敲除小鼠等基因编辑诱导的pe模型。

3、虽然目前对于子痫前期动物模型的构建已有报道，但其构建方法极为有限，对于如何开发新的动物模型未见有统一的标准。因此，想要获得一种新的子痫前期动物模型的构建方法是较为困难。

4、另一方面，由于子痫前期发病因素复杂，具有较强的异质性，现有这些动物模型都只能反映部分发病因素。脂多糖诱导的pe模型是由腹腔注射脂多糖引起的广泛炎症导致的；rupp术式通过手术收窄血管减少子宫-胎盘血流灌注诱发pe，操作难度较高，模型批次效果差异较大；血管内皮损伤模型通过静脉直接注射损伤血管内皮的药物诱导pe；而基因编辑小鼠主要集中在某一个基因的敲除或者敲低，与临床实际情况亦存在较大差异，基因编辑小鼠的制作也较为复杂，成本较高。

5、综上所述，如何提供一种新的子痫前期动物模型的构建方法及应用，以期能够较好地模拟pe病人的临床症状和指标，并为子痫前期发病过程及机制的研究提供相应的动物模型，成为亟待解决的技术问题。

技术实现思路

1、本发明就是为了解决上述技术问题，从而提供一种新的子痫前期动物模型的构建方法及其应用。本发明的技术目的在于，为构建更多的子痫前期动物模型提供相应的方法，并实现更简单且成分更低的、能够很好模拟pe病人临床症状和指标的动物模型。

2、本发明首先提供了一种子痫前期动物模型的构建方法，所述构建方法包括：在雌鼠妊娠期间给予邻苯二甲酸或是腺病毒以抑制qprt的活性，即得到所述子痫前期动物模型。

3、本发明人意外发现了qprt(喹啉酸磷酸酯转移酶)与子痫前期疾病的关系，从而构建得到了上述动物模型。发明人通过大量研究发现，pe患者胎盘来源的细胞外囊泡(extracellular vesicles，evs)中nam(烟酰胺)的水平降低，且在细胞实验和动物实验中发现胎盘来源的evs中nam具有显著的抑制母胎界面巨噬细胞和t细胞炎症的作用，在妊娠的维持中起到了关键作用。

4、由于喹啉酸磷酸酯转移酶(quinolinate phosphoribosyl transferase，qprt)是产生nam的一个重要的限速酶，因此本发明人通过采用邻苯二甲酸(phthalic acid，pa)或者腺病毒干扰qprt基因的表达水平(ad sh-qprt)来实现抑制qprt的活性，发现可以有效降低滋养细胞和滋养细胞胞外囊泡中nam的水平，从而使妊娠小鼠出现pe样的一系列症状，包括胚胎吸收率升高、胎鼠体重和顶臀长下降，母鼠尾动脉收缩压、尿uacr值、外周血pigf和sflt-1浓度升高等，因此，本发明很好实现了一种简单快速构建子痫前期动物模型的方法。

5、现有的pe动物模型的构建方法往往采用复杂的造模技术，需要高昂的成本，而本发明提供了一种新的动物模型，只需通过给孕鼠宫腔灌注pa或ad sh-qprt，即可使妊娠小鼠出现pe样的一系列症状，以及母胎界面几种主要的免疫细胞炎症程度的显著升高，补充富含nam的胎盘evs即可恢复。该模型操作简单，且宫腔灌注的给药方式可使药物集中在母胎界面局部发挥作用，免除腹腔注射和静脉注射导致的全身症状；该模型无需复杂的术式或干预小鼠遗传背景，且该小鼠模型能较好地模拟pe病人的临床症状和指标，为子痫前期发病过程及机制的研究提供了全新的小鼠模型。

6、进一步的是，所述雌鼠包括大鼠或小鼠，所述大鼠包括sd大鼠、wistar大鼠或lewis大鼠；所述小鼠包括c57bl/6小鼠或balb/c小鼠。

7、进一步的是，所述雌鼠为8周大的c57bl/6小鼠。

8、进一步的是，所述给予pa或ad sh-qprt的时间为妊娠第10.5天或第16.5天。

9、进一步的是，所述给予pa或ad sh-qprt的方式为宫腔灌注。

10、进一步的是，所述给予pa的用量为50mg/kg，给予ad sh-qprt的浓度为109copies/ml。

11、本发明的目的之二是提供如上所述方法构建得到的子痫前期动物模型在子痫前期疾病的发病过程及研究机制中的应用。

12、本发明的目的之三是提供如上所述方法构建得到的子痫前期动物模型在用于制备防治子痫前期疾病的药物、或在药物筛选和药效评价中的应用。

13、本发明的目的之四是提供qprt基因作为靶标在子痫前期动物模型中的应用。

14、本发明的目的之五是提供qprt基因作为靶标在制备防治子痫前期疾病的试剂或试剂盒中的应用。

15、本发明的有益效果如下：

16、(1)本发明提供了一种子痫前期动物模型的构建方法，只需采用邻苯二甲酸来抑制qprt的活性，或是通过腺病毒干扰qprt基因的表达水平即可有效降低滋养细胞和滋养细胞胞外囊泡中nam的水平，从而使妊娠小鼠出现pe样的一系列症状；该动物模型操作简单，且宫腔灌注的给药方式可使药物集中在母胎界面局部发挥作用，免除腹腔注射和静脉注射导致的全身症状；

17、(2)本发明提供的子痫前期动物模型的构建方法无需复杂的术式或干预小鼠遗传背景，且该小鼠模型能较好地模拟pe病人的临床症状和指标，为子痫前期发病过程及机制的研究提供了全新的小鼠模型；

18、(3)本发明的子痫前期动物模型可用于帮助阐明子痫前期疾病的发病过程及机制，还可用于帮助防治子痫前期疾病药物筛选和药效评价。

技术特征：

1.一种子痫前期动物模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：在雌鼠妊娠期间给予邻苯二甲酸或是腺病毒以抑制qprt的活性，得到所述子痫前期动物模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述雌鼠包括大鼠或小鼠，所述大鼠包括sd大鼠、wistar大鼠或lewis大鼠；所述小鼠包括c57bl/6小鼠或balb/c小鼠。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述雌鼠为8周大的c57bl/6小鼠。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述给予邻苯二甲酸或腺病毒的时间为妊娠第10.5天或第16.5天。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述给予邻苯二甲酸或腺病毒的方式为宫腔灌注。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述给予邻苯二甲酸的用量为50mg/kg，给予腺病毒的用量为109copies/ml。

7.如权利要求1-6任一项所述方法构建得到的子痫前期动物模型在子痫前期疾病的发病过程及机制研究中的应用。

8.如权利要求1-6任一项所述方法构建得到的子痫前期动物模型在用于制备防治子痫前期疾病的药物、或在药物筛选和药效评价中的应用。

9.qprt基因作为靶标在子痫前期动物模型中的应用。

10.qprt基因作为靶标在制备防治子痫前期疾病的试剂或试剂盒中的应用。

技术总结
本发明提供了一种子痫前期动物模型的构建方法及应用，属于动物模型的构建技术领域。本发明提供的子痫前期动物模型的构建方法包括：在雌鼠妊娠期间给予邻苯二甲酸或是腺病毒以抑制QPRT的活性，即得到所述子痫前期动物模型。其中，所述雌鼠为8周大的雌性C57BL/6小鼠，所述雌鼠给予邻苯二甲酸或腺病毒的时间为妊娠第10.5天或第16.5天，给予邻苯二甲酸的用量为50mg/kg，腺病毒的用量为10<supgt;9</supgt;copies/ml。本发明提供的动物模型构建方法具备操作简单，宫腔灌注的给药方式可使药物集中在母胎界面局部发挥作用，免除腹腔注射和静脉注射导致的全身症状；且该小鼠模型能较好地模拟子痫前期病人的临床症状和指标，为子痫前期发病过程及机制的研究提供了全新的小鼠模型。

技术研发人员：江玲玲,张松英,费海怡
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15