本发明涉及玉米选苗，具体为一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法。
背景技术：
1、电解质外渗量(electrolyte leakage，el)是一种用于评估植物细胞膜完整性的方法。在耐冷性研究中，el方法通常用于测量植物组织在低温胁迫下的细胞膜损伤程度。借助这种方法可以比较不同玉米植株的耐冷性，以确定哪些品种对低温胁迫具有更好的适应性。
2、目前大多的基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法在执行过程中，电解质外渗量可以受到多种因素的干扰，包括生长条件、植物年龄和采样时点。这些因素可能会导致结果的不一致性，难以进行可靠的比较。为此本发明提出一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，解决了现有技术中电解质外渗量可以受到多种因素的干扰，导致结果的不一致的问题。
2、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，包括以下步骤：
3、步骤一、选择玉米苗期植株，在适宜的生长条件下预培养植株，以确保它们处于相似的生长状态，同时对植株进行分组和采样；
4、步骤二、将一组植株置于低温环境中，并进行多因子模拟处理，模拟多因子环境下的耐冷性测试条件，另一组植株应保持在适宜的温度条件下，作为对照组；
5、步骤三、在多因子低温胁迫后，从低温处理组和对照组的植物中选择相似的叶片样品；
6、步骤四、将每个分组后的样品叶片切碎，并加入含有电解质外渗的提取液；
7、步骤五、对样品进行离心分离，获取包含电解质的提取液，并将每个分组中提取的提取液再次地均分为多个等份，结合取样时的分组信息进行详细的标注；
8、步骤六、使用电导仪测量每个分组中多个单一等份的电导率，同时对每个组分中另外的多个单一等份的提取液，进行抗寒酶和抗氧化酶活性测定；
9、步骤七、测定每个分组中全部样品提取液的ph值，评估细胞膜的完整性；
10、步骤八、将低温组和对照组中使用导电仪测量的分组取出，比较该分组中低温处理组和对照组的电解质外渗量和ph值；
11、步骤九、记录并将所有数据整合并进行统计分析，以确定哪些参数或组合最能够准确预测植物的耐冷性。
12、优选的，所述步骤一中分组和采样包括：
13、根据实验将植株划分为低温处理组和对照组；
14、在不同时间点对植株进行采样，并将采样的植株等分地划分为低温组和对照组。
15、优选的，所述步骤二中多因子模拟包括以下步骤：
16、设定适宜生长条件的对照组，以确保植物在正常条件下生长；
17、为每种胁迫分别设定单一胁迫组，以确定每种胁迫对植物的影响；
18、将两个或多个胁迫条件同时施加在同一胁迫组植株上，并确定胁迫的持续时间。
19、优选的，所述步骤三中选择相似的叶片样品包括：
20、确保从低温处理组和对照组中选择的植物样品具有相似的生长状态；
21、样品选择随机，并进行足够的重复抽样，以确保获得一组具有代表性的样品；
22、确保在低温处理组和对照组中选择的植物样品的叶片位置相同；
23、对所选的样品进行标记，以便将其与相应的处理组和对照组相关联。
24、优选的，所述步骤四中样品切片提取包括：
25、在进行叶片切碎之前，将叶片浸入液氮中，阻止细胞内生化反应的进行；
26、使用清洁的刀片，将叶片均匀地切碎成碎片；
27、将切碎的叶片样品放入提取液中，并用搅拌器轻轻搅拌，让叶片中的电解质被充分释放到提取液中。
28、优选的，所述步骤五中离心分离包括以下步骤：
29、使用离心机，将搅拌后的叶片和提取液进行离心分离；
30、将每个分区样品内的上清液小心地转移到一个新的离心管中；
31、根据实验需求，将标记的离心管存放在适当的温度条件下。
32、优选的，所述步骤六中抗寒酶和抗氧化酶活性测定包括：
33、使用均质器破坏提取液中的细胞壁，并使用合适的缓冲液，提取样品中的酶，以释放细胞质中的酶；
34、对抗寒酶和抗氧化酶的活性进行测定，将提取的酶溶液与特定底物一起孵育，测定生成的产物或消耗的底物；
35、根据剩余的每个分组内的单一等份提取液重复多次进行测定，根据每个组分内单一等份内的底物消耗速率或产物生成速率来衡量酶的活性。
36、优选的，所述步骤七中测定ph值包括：
37、准备干净的ph电极，并确保其干燥和清洁；
38、同时在使用前，将ph电极放入含有标准缓冲液的容器中进行校准，以确保准确度。
39、优选的，所述步骤八中比较电解质外渗量和ph值包括以下步骤：
40、比较低温处理组和对照组的电解质外渗量和ph值的平均值；
41、低温处理组的电解质外渗量显著高于对照组，表明细胞膜受到了破坏，说明植物对低温胁迫的适应性较差；
42、当低温处理组的ph值显著变化，表明细胞膜的完整性受到了影响。
43、优选的，所述步骤九中将所有数据整合包括：
44、收集和整合所有测定的数据，包括电解质外渗量、ph值、抗寒酶和抗氧化酶活性参数；
45、使用统计软件进行数据分析，以确定哪些参数或参数组合与植物的耐冷性之间存在显著性关联。
46、本发明提供了一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法。具备以下有益效果：
47、1、本发明通过根据选苗的栽种环境，模拟实际环境中的多因子胁迫，低温与干旱、盐胁迫的组合，更真实地模拟实际生长条件，确保玉米苗期分选方法的真实性和可靠性。
48、2、本发明通过时间序列分析，在不同时间点对植物进行采样，以观察其在低温胁迫下的动态响应，提供更多的有关玉米苗期植物对低温胁迫的时间依赖性响应的信息，确保分选的结果精准可靠。
49、3、本发明通过结合多个生物学参数，对玉米苗期不同对照组中的电解质外渗量、ph值、抗寒酶和抗氧化酶活性参数进行测量，进一步地验证电解质的外渗量和玉米苗期耐寒性的关联性，保证分选出的玉米植株耐寒性更加符合种植需求。
1.一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤一中分组和采样包括：
3.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤二中多因子模拟包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤三中选择相似的叶片样品包括：
5.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤四中样品切片提取包括：
6.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤五中离心分离包括以下步骤：
7.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤六中抗寒酶和抗氧化酶活性测定包括：
8.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤七中测定ph值包括：
9.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤八中比较电解质外渗量和ph值包括以下步骤：
10.根据权利要求1所述的一种基于电解质外渗量的耐冷玉米苗期分选方法，其特征在于，所述步骤九中将所有数据整合包括：