一种异叶青兰的组培快繁方法

本发明属于植物组织培养，更具体地涉及一种异叶青兰的组培快繁方法。

背景技术：

1、异叶青兰是传统中藏药材，藏药名为吉孜青保，具有悠久的用药历史和较高药用价值。《晶珠本草》中记载，异叶青兰具有治口腔病、牙齿病、清肝热的功效。《中药大辞典》中记载其具有清肝作用，主要用于黄疸性肝炎、肝火上升的牙龈肿痛、出血及口腔溃疡的治疗。现代医学研究表明，其具有护肝、保护心肌损伤、抗缺氧及降血压等功效。可见，该资源具有较好的应用和发展前景。目前，其多生长于海拔2000～4700m的生境中，但资源分布呈现分散、不连片的规律，且植株较小、资源量较少；同时过量的采挖，也严重破坏地表植被，加剧草场退化和水土流失。针对生态环境和生物多样性保护与生物资源产业民生发展需求之间的矛盾，建立并优化异叶青兰的人工快繁技术，为其资源繁育与野生抚育奠定技术和资源基础。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是提供一种异叶青兰的组培快速繁殖方法。

2、本发明是通过如下技术方案来实现的：

3、一种异叶青兰的组培快繁方法，所述方法包含以下步骤：

4、第一步、将无菌异叶青兰茎段分割为包含1-2对对生叶的长度，放置在丛生芽诱导培养基上，培养条件为25-28oc，2200-3200lx，置于16h/8h的光周期培养条件下培养；

5、所述的丛生芽诱导培养基为i：ms+30g/l蔗糖，6-ba 0.2-0.5mg/l，kt 1-2mg/l+琼脂7.5-7.8g/l，ph 5.8-6.0；

6、或ii：ms+30g/l蔗糖，6-ba 0.2-0.3mg/l，tdz 0.1-0.3mg/l+琼脂7.5-7.8g/l，ph5.8-6.0；

7、第二步、不定芽伸长：当丛生芽的单芽长到1-2cm时，将其切下，放置于芽伸长培养基上；培养条件为25-28oc，2200-3200lx，置于16h/8h的光周期培养条件下培养；芽伸长培养基：1/2ms+15g/l蔗糖+琼脂7.5-7.8g/l，ph5.8-6.0；

8、第三步、不定芽生根：待单芽长至3-6cm，将其移至生根培养基上，所述的生根培养基的成分及终浓度：1/2ms+15g/l蔗糖+0.2-0.5mg/l naa+0.5-1mg/l iba+琼脂7.5-7.8g/l，ph 5.8-6.0；

9、进一步，所述的方法还包括移栽的步骤，获得的生根幼苗长到8-15cm将取出，洗掉培养基，进行移栽。

10、进一步，所述方法还包括重复增殖培养：将切下不定芽后的茎段，分割为包含1-2对对生叶的长度，重新放置在丛生芽诱导培养基上，重复诱导丛生芽。

11、进一步，所述的外植体来源于种子培养，种子消毒的条件是先后用75％酒精消毒30s，10％次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗3-6遍，直至没有次氯酸钠的异味为止，滤纸吸干水分，种子用100mg/l的赤霉素(ga3)浸泡一个晚上后，放置种子萌发培养基萌发；种子萌发培养基：1/2ms+15g/l蔗糖，琼脂7.5-7.8g/l，ph 5.8-6.0。

12、进一步，所述的无菌异叶青兰茎段来源于异叶青兰植株，植株的消毒方法为先后用75％酒精消毒30s，10％次氯酸钠消毒5min，0.5％洁尔灭溶液消毒5min，无菌水冲洗3-5次，滤纸吸干水分。

13、本发明与现有技术相比的有益效果：

14、本发明选用1对对生叶的长度作为外植体，提高了从生芽的出芽率。

15、本发明伸长阶段可直接在伸长培养基上生根，可极大减轻后期生根工作。

技术特征：

1.一种异叶青兰的组培快繁方法，其特征在于，所述方法包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种异叶青兰的组培快繁方法，其特征在于，所述的方法还包括移栽的步骤，不定芽生根后的生根幼苗长到8-15cm将取出，洗掉培养基，进行移栽。

3.根据权利要求1所述的一种异叶青兰的组培快繁方法，其特征在于，所述方法还包括重复增殖培养：将切下不定芽后的茎段，分割为包含1对对生叶的长度，重新放置在丛生芽诱导培养基上，重复诱导丛生芽。

4.根据权利要求1所述的一种异叶青兰的组培快繁方法，其特征在于，所述的外植体来源于种子培养，种子消毒的条件是先后用75％酒精消毒30s，10％次氯酸钠消毒10min，无菌水冲洗直至没有次氯酸钠的异味，吸干水分，种子用100mg/l的赤霉素浸泡一个晚上后，放置种子萌发培养基萌发；种子萌发培养基：1/2ms+15g/l蔗糖+琼脂7.5-7.8g/l，ph为5.8-6.0。

5.根据权利要求1所述的一种异叶青兰的组培快繁方法，其特征在于，所述的无菌异叶青兰茎段来源于异叶青兰植株，植株的消毒方法为先后用75％酒精消毒30s，10％次氯酸钠消毒5min，0.5％洁尔灭溶液消毒5min，无菌水冲洗3-5次，滤纸吸干水分。

技术总结
本发明涉及一种异叶青兰组培快繁的方法，属于植物组织培养技术领域，将无菌异叶青兰茎段分割为包含1对对生叶的长度，放置在丛生芽诱导培养基上，将丛生芽分割成单芽，每个单芽含有1对对生叶，重复进行芽诱导。将不再重复诱导的单芽继代至生根培养基上，获得生根苗。待生根苗长到3‑4cm，可从组培瓶里移栽。整个过程时间短，扩繁系数高，可短时间内产生大量组培苗，对异叶青兰的资源的保护和利用有重要意义。

技术研发人员：吴振映,徐悦,曹英萍,胡娜,付春祥,王洪伦
受保护的技术使用者：中国科学院青岛生物能源与过程研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15