紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用的制作方法

【】本发明属于植物源桃细菌性穿孔病杀菌剂开发，具体涉及紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用。

背景技术

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背景技术：

1、桃细菌性穿孔病为桃树上常见的全球性病害，是我国桃产区重要病害之一，病原是树生黄单胞李致病变种(xanthomonas arboricola pv.pruni,xap)。该病菌主要侵染树叶、枝条和果实，经叶片的气孔、芽痕和果实的皮孔侵入组织，在叶片上表现为水渍状病斑，后期病斑干枯脱落呈穿孔状，引起早期大量落叶，果实被侵染导致果品下降，部分地区果实被严重侵染导致大幅减产甚至绝收，造成巨大经济损失。该病菌除危害桃树外，还危害李、杏、樱桃、扁桃等核果类果树，被欧盟列为检疫性病原物。

2、2022年我国桃栽培面积达到1500万亩，占世界52.0％，产量达到1529.50万t，占世界57.96％(fao统计数据)，面积和产量均位列世界第一。随着桃细菌穿孔病在我国大部分桃产区流行发生，有效的防治药剂需求日益增加。生产上防治桃细菌性穿孔病可选择的化学药剂种类少，其中铜制剂类和抗生素类是防治桃细菌性穿孔病广泛使用的有效药剂，但其依赖性长期使用导致药物抗性、树体毒害、环境污染和农药残留等问题日益突出。

3、据中国农药信息网数据，截至2023年7月，我国登记的杀菌剂为11859个，用于防治细菌性病害的药剂数量约为280个，占国内杀菌剂登记产品总量2.4％，而有效成分约为32个，主要有铜制剂、抗生素、微生物菌剂类和其他类杀细菌制剂。与铜制剂和抗生素相比，植物源杀菌剂具有绿色、安全、不易造成耐药性等特点，目前有多种植物源杀菌剂在作物病害防治上取得显著的效果，如丁香酚、小檗碱、蛇床子素、乙蒜素等。

4、细菌性病害危害作物种类广，危害性严重，防治药剂登记稀少，登记有效成分有限，且铜制剂和抗生素常态使用给产业带来巨大负面影响，因此开发植物源杀菌剂具有迫切性和必要性。

技术实现思路

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技术实现要素：

1、针对现有细菌性病害危害作物种类广，危害性严重，防治药剂登记稀少，登记有效成分有限，且铜制剂和抗生素常态使用给产业带来巨大负面影响等问题，本发明提供了紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用，利用紫叶李叶片制备植物源桃细菌性穿孔病防治药剂。

2、本发明的目的通过以下技术方案实现：

3、用不同浓度甲醇溶液和乙醇溶液分别提取紫叶李叶片中的活性成分，得到紫叶李叶片提取物，采用抑制圈法测定不同紫叶李叶片提取物对桃细菌性穿孔病病原菌的抑制活性，以证实紫叶李叶片提取物可用于桃细菌性穿孔病的防治。

4、紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用，包括如下步骤：

5、1)原材料制备：收集紫叶李叶片，阴干，粉碎，备用；

6、2)粗提物制备：采用超声波辅助法提取紫叶李叶片抑菌物质，过滤得到提取液，提取液经浓缩，真空干燥，得到到紫叶李叶片提取物；

7、所述粗提物制备中超声波辅助法的提取条件为：料液比为1:40，常温，超声波提取4h，提取频率40khz；

8、所述粗提物制备中提取溶剂选自体积浓度100％、90％、80％、70％、60％乙醇水溶液或者体积浓度100％、90％、80％、70％、60％甲醇溶液中的一种；

9、3)紫叶李叶片提取物抑菌活性测试；以体积浓度10％dmso溶液为溶剂，配置2.0、1.0、0.5、0.25、0.125和0.0625mg/ml浓度紫叶李叶片提取物溶液，以土霉素为阳性对照，10％dmso为空白对照，通过抑制圈法测定不同紫叶李叶片提取物对菌株的抑制圈大小和最低抑制浓度，验证紫叶李叶片提取物抑菌活性与土霉素相当；

10、所述的抑菌活性测试的菌株是指树生黄单胞李致病变种(xanthomonasarboricola pv.pruni，xap)。

11、本发明中：

12、步骤1)所述的原材料是蔷薇科李属灌木或小乔木植物(prunus cerasifera‘atropurpurea')的叶片。

13、进一步的，步骤2)所述的粗提物制备中提取溶剂选自体积浓度80％乙醇水溶液。

14、进一步的，所述的应用，是将有效量的紫叶李叶片提取物与农药上可接受的赋形剂或和添加剂配合，制成适合防治桃细菌性穿孔病的不同剂型的药物。

15、和现有技术相比，本发明具有如下优点：

16、现有技术中，未见将紫叶李叶片应用于桃细菌性穿孔病防治的报道。本发明所述的紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用，提供了一种具有较好抑菌效果紫叶李叶片提取物，其植物来源丰富，制备方法简单。所述的紫叶李叶片提取物，其在抑制桃细菌性穿孔病病原菌细菌上的效果较好，最低抑制浓度为0.125mg/ml、阳性对照药物土霉素最低抑制浓度为0.125mg/ml。紫叶李叶片提取物抑菌活性与土霉素相当，有望成为一种效果良好的桃细菌性穿孔病防治药剂。

技术特征：

1.紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用，其特征在于：步骤1)所述的原材料是蔷薇科李属灌木或小乔木植物prunus cerasifera‘atropurpurea'的叶片。

3.根据权利要求1所述的紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用，其特征在于：步骤2)所述的粗提物制备中提取溶剂选自体积浓度80％乙醇水溶液。

4.根据权利要求1所述的紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用，其特征在于：所述的应用，是将有效量的紫叶李叶片或其提取物与农药上可接受的赋形剂或和添加剂配合，制成适合防治桃细菌性穿孔病的不同剂型的药物。

技术总结
本发明公开了紫叶李叶片提取物在防治桃细菌性穿孔病中的应用。本发明利用超声波辅助提取提取紫叶李叶片的活性成分，通过抑菌试验证明，紫叶李叶片80％乙醇提取物对桃细菌性穿孔病病原菌(树生黄单胞李致病变种，Xanthomonas arboricola pv.pruni，Xap)具有较好抑菌活性，最低抑制浓度与阳性对照药物土霉素相同，均为0.125mg/mL，因此可作为防治桃细菌性穿孔病药物的原料。

技术研发人员：陆泰良,万保雄,梁瑞郑,李海炎,朱鹏翔,梁欣
受保护的技术使用者：广西特色作物研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25