一种诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂及其应用

本发明涉及生物，具体涉及一种诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂及其应用。

背景技术：

1、链霉菌次级代谢产物类生物农药一直因为其高效、低毒、低残留等特点被大家持续关注，现已广泛应用于农业病虫害的防治。

2、可湿性粉剂是由原药，助剂和载体配制而成的粉体在水中分散成悬浮液的粉状制剂。生物农药可湿性粉剂母粉中既包含生防菌菌体又包含其次级代谢产生的抑菌活性物质，使得有效成分含量更高，防效更好。可湿性粉剂与水剂制剂相比易于运输和贮存，便于生产和推广，因此可湿性粉剂的开发和使用受到越来越多人的关注。

3、目前，关于可湿性粉剂的研究大多集中在考察可湿性粉剂植物病害作用的方向上，并且因为商业专利保密性等问题，限制了研究者对可湿性粉剂加工工艺和助剂筛选等方面的交流，产品评价也不统一。现阶段活菌类可湿性粉剂以芽孢杆菌类为主，但以链霉菌活菌为有效成分的可湿性粉剂研究还较少。为满足研究的需要我国出台了评价苏云金芽孢杆菌(bacillus thuringiensis)可湿性粉剂国标(gb/t 19567.3-2004)。农用抗生素类生物农药一直是我国挖掘和探索的重要领域，我国也出台了评价春雷霉素可湿性粉剂国标(gb/t 34761-2017)，为后续生物农药可湿性粉剂的研究和评价提供帮助和指导。1994年刘树良等将具有广谱性的链霉菌7072发酵液经过树脂吸附，溶剂提取，加入稳定性填充剂最后低温烘干后粉碎，即制成了7072可湿性粉剂，这是我国最早有文献记载的链霉菌可湿性粉剂制备工艺，该技术解决了链霉菌水剂运输、包装和储存成本高的问题。现阶段申云鑫研制的贝莱斯芽孢杆菌sh-1471可湿性粉剂，其技术已经相对成熟所得制剂活菌数达到2.5×1010cfu/g，悬浮率达到88.6％，其室内盆栽试验也表现出对番茄枯萎病较好的防治效果达到93.7％。王茜研制了链霉菌ga-5的生防菌制剂，按照可湿性粉剂的相关国家标准对其进行评价，结果显示链霉菌ga-5可湿性粉剂在室温条件下活菌含量为5.38×108cfu/g。盆栽实验结果显示，链霉菌ga-5可湿性粉剂采用灌根施用后，可以显著降低小麦全蚀病的病情指数。相比于芽孢杆菌类可湿性粉剂，以活菌为有效成分的链霉菌可湿性粉剂活菌数相对较低一些，防治效果略差推广难度大。然而以阿维菌素、中生菌素等农用抗生素制备成不同质量分数含量的可湿性粉剂，其制备工艺相对简单、成本低、防效好一直是人们研究热点。除了单一成分的可湿性粉剂以外马金慧等还对有效成分进行复配研制出6％寡糖·链蛋白可湿性粉剂；0.136％赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂；10％中生·寡糖素可湿性粉剂等植物免疫诱抗剂可湿性粉剂防治玉米茎基腐，为生物农药的研究打开新思路。

4、诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)其次级代谢产物丰富，可产生聚赖氨酸、制霉菌素、宁南霉素等活性物质。具有抑制丝状真菌，具有广谱抗性的特点。谷军等利用诺尔斯氏链霉菌防真菌病害的特点，通过固体发酵制成诺尔斯氏链霉菌微生物制剂。谷氏菌素属于核苷肽类抗生素，现阶段报道的产谷氏菌素菌株主要是禾粟链霉菌(streptomyces graminearus)与细黄链霉菌(streptomyces microflavus)，在抗肿瘤方面研究广泛，此外坎贝尔已经发现细黄链霉菌产生的谷氏菌素对植物病害有防治作用。

5、目前尚未有诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂相关研究报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂及其应用。

2、第一方面，本发明要求保护一种诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂。

3、本发明所要求保护的诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂的制备原料包括：诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)nk27发酵液的浓缩液、载体和助剂；

4、所述载体含有高岭土和白炭黑；

5、所述助剂包括湿润剂和分散剂；所述湿润剂为十二烷基苯磺酸钠；所述分散剂为羧甲基纤维素钠；

6、所述诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)nk27在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为cgmcc no.28268。

7、进一步地，所述诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂的制备原料中还可包括稳定剂。其中，所述稳定剂可为磷酸二氢钾。

8、进一步地，所述诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂可按照包括如下步骤(a1)-(a2)的方法制备得到：

9、(a1)将所述诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)nk27发酵液的浓缩液(如5倍浓缩液)和所述载体混合，48-52℃(如50℃)烘干后粉碎，得到可湿性粉剂初级制剂；

10、(a2)向所述可湿性粉剂初级制剂中加入所述湿润剂、所述分散剂和/或所述稳定剂，得到所述诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂。

11、示例性的，所述载体由高岭土和白炭黑按照6:4的质量配比混合而成。

12、示例性的，所述诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)nk27发酵液的浓缩液和所述载体的质量配比为1：0.7。

13、示例性的，在所述诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂中，所述湿润剂的质量百分含量为1.5％，所述分散剂的质量百分含量为7.8％；余量为所述可湿性粉剂初级制剂。

14、示例性的，在所述诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂中，所述湿润剂的质量百分含量为1.5％，所述分散剂的质量百分含量为7.8％；所述稳定剂的质量百分含量为4％～10％(如4％)；余量为所述可湿性粉剂初级制剂。

15、更进一步地，所述诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)nk27发酵液可按照包括如下步骤的方法制备得到：将种龄为32-40h的所述诺尔斯氏链霉菌(streptomycesnoursei)nk27的种子液按照2-3％的体积百分比接种到发酵培养基中，在初始ph为7-8的条件进行发酵培养，经过过滤后，获得所述诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)nk27发酵液。

16、示例性的，所述种子液中所述诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)nk27的种龄为32.6h。

17、示例性的，所述种子液的接种量为2.6％。

18、示例性的，所述初始ph为7.6。

19、其中，进行所述发酵培养的时间可为144h。

20、其中，进行所述发酵培养时可为震荡培养，转速可为220rpm。

21、在本发明的具体实施方式中，所述发酵培养基(pbs培养基)的配方如下：葡萄糖40g/l，酵母粉5g/l，蛋白胨5g/l，硫酸镁0.5g/l，氯化钾0.5g/l，氯化钙0.1g/l，硫酸亚铁0.01g，硫酸镁0.01g/l，硫酸锰0.01g/l，甘氨酸0.5g/l，谷氨酰胺1g/l，天冬氨酸1g/l，磷酸二氢钠0.384g/l，磷酸氢二钠1.98g/l；余量为水。

22、本发明所述诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂霉菌个数0、细度99.3％(参考国标gb/t16150-1995中湿筛法的测定方法)、ph 6.2、含水量0.7％(质量百分含量)。

23、第二方面，本发明要求保护一种诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂的制备方法。

24、本发明要求保护大的诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂的制备方法，可包括前文第一方面中所述步骤(a1)-(a2)。

25、第三方面，本发明要求保护前文第一方面中所述诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂在如下任一中的应用：

26、(b1)抑制灰霉病菌；

27、(b2)防治灰霉病。

28、示例性的，所述灰霉病为番茄灰霉病。

29、示例性的，所述灰霉病菌为番茄灰霉病菌(b.cinerea)b05.10。引起所述番茄灰霉病的病菌为番茄灰霉病菌(b.cinerea)b05.10。

30、第四方面，本发明要求保护一种防治灰霉病的方法。

31、本发明所要求保护的防治灰霉病的方法，可包括如下步骤：

32、(c1)将前文第一方面中所述诺尔斯氏链霉菌可湿性粉剂进行稀释，使其中谷氏菌素含量为100-150mg/l，得到可湿性粉剂稀释悬浮液；

33、(c2)用所述可湿性粉剂稀释悬浮液喷洒于防治植株叶片及地上裸露部分，每5天喷洒一次，共喷施3次。

34、在步骤(c1)中，进行所述稀释的稀释倍数不大于300倍。

35、示例性的，所述灰霉病为番茄灰霉病。

36、示例性的，所述灰霉病菌为番茄灰霉病菌(b.cinerea)b05.10。引起所述番茄灰霉病的病菌为番茄灰霉病菌(b.cinerea)b05.10。

37、实验证明，本发明研制的nk27可湿性粉剂对灰霉病(如番茄灰霉病)有较好的防治效果，本发明为灰霉病(如番茄灰霉病)的防控和链霉菌可湿性粉剂的推广提供支持。

38、保藏说明

39、分类命名：诺尔斯氏链霉菌(streptomyces noursei)；

40、参椐的生物材料：nk27；

41、保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

42、保藏机构简称：cgmcc；

43、地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

44、保藏日期：2023年8月28日；

45、保藏中心登记入册编号：cgmcc no.28268。