瓜蒌瓤及瓜蒌根须提取物在瓜蒌组培快繁中的应用的制作方法

本发明属于植物生物，具体涉及药用植物瓜蒌丛生芽的诱导、继代及生根的培养方法，是可增加有效出苗率，提高移栽成活率的方法。

背景技术：

1、瓜蒌（ trichosanthes kirilowii maxim.），俗名吊瓜、栝楼、药瓜、瓜楼等，为葫芦科（cucurbitaceae）栝楼属（ trichosanthes l.）植物，多年生草质藤本。果实、种子、根分别作栝楼、栝楼籽和天花粉入药。瓜蒌主治：清热涤痰，宽胸散结，润燥滑肠。也用于肺热咳嗽，痰浊黄稠，胸痹心痛，结胸痞满，乳痈，肺痈，肠痈肿痛，大便秘结。近年来，瓜蒌籽独特风味，具有保健作用，其食用价值得到充分认可，市场需求旺盛。近十年来，瓜蒌在江苏苏北、安徽、浙江等地种植面积猛增，瓜蒌种苗需求供不应求。

2、目前关于瓜蒌组织培养已有相关报道，对于人工栽培瓶苗，出苗率的高低以及移栽存活率的高低是组织培养技术能否应用于工厂化大规模生产的关键。有研究表明，香蕉、丝瓜络提取物等应用于植物组培快繁，可在较短时间内培育出大量优质种苗，加快推广速度。瓜蒌组培技术在产业化推广中存在玻璃化、黄化、污染等问题。为了提升瓜蒌组培技术的产业化效能，急需优化培养基配方，以有效增加瓜蒌组培出苗数量，提高瓜蒌组培苗炼苗移栽的成活率。长期以来，瓜蒌瓤在瓜蒌皮及瓜蒌子药材生产加工过程中常以非药用部位而丢弃，造成了巨大浪费。瓜蒌根须在瓜蒌种植中也常作为废弃物而丢弃，也造成了巨大浪费。植物提取物是常见的生物技术，可将瓜蒌瓤提取物及瓜蒌根须提取物应用于瓜蒌组培快繁中。

技术实现思路

1、本发明的旨在于提供一种瓜蒌丛生芽的诱导和生根的培养方法，该培养方法中包括一种利用瓜蒌瓤提取物促进丛生芽诱导及继代的培养基，一种利用瓜蒌瓤及瓜蒌根须提取物促进瓜蒌组培苗生根的培养基。针对现有技术中玻璃化、黄化、污染等现象，出苗率不高、移栽存活率低等问题，本发明提供了一种切实可行的解决方法。本发明具有简单易行，出苗数量多，成苗移栽成活率高，为工厂化育苗提供技术支持。

2、选取瓜蒌茎切段和茎卷须为外植体材料，接种到丛生芽的诱导培养基中，5~8天后开始膨大萌发，15~20天左右分化出丛生芽，诱导率超过98%。丛生芽或茎段接种到继代培养基中，12~15天即可形成壮苗。无根苗转接到生根培养基中，25~30天获得根系发达且茎粗壮的成苗即可进行移栽，移栽成活率超过96%，从而实现了本发明的目的。

3、本发明为达到其目的，采用的技术方案如下。

4、（1）一种利用瓜蒌瓤提取物促进丛生芽诱导的培养基：

5、所述丛生芽的诱导培养基为向1/2ms培养基中加入瓜蒌瓤提取物2.5 ~ 3.5 mg/l、白砂糖15 ~ 30 g/l、蛋白胨8 ~ 10 g、琼脂8 ~ 9 g/l配置而成。

6、优化的，如下组分在丛生芽诱导培养基中的浓度分别为：瓜蒌瓤提取物2.5 ~ 3.0mg/l、白砂糖15 ~ 20 g/l、蛋白胨8 ~ 10 g、琼脂8.5 ~ 9g/l配置而成。

7、进一步优化的，如下组分在丛生芽诱导培养基中的浓度分别为：瓜蒌瓤提取物3.0mg/l、白砂糖15 g/l、蛋白胨8 g、琼脂8.8 g/l配置而成。

8、（2）一种利用瓜蒌瓤提取物有助丛生芽或茎段继代的培养基：

9、所述丛生芽或茎段继代的培养基为向1/2ms培养基中加入瓜蒌瓤提取物1.5 ~2.5 mg/l、白砂糖15 ~ 30 g/l、蛋白胨8 ~ 10 g、琼脂8 ~ 9 g/l配置而成。

10、优化的，如下组分在丛生芽或茎段继代的培养基中的浓度分别为：瓜蒌瓤提取物1.5 ~ 2.0 mg/l、白砂糖15 ~ 20 g/l、蛋白胨8 ~ 10 g、琼脂8.5 ~ 9g/l配置而成。

11、进一步优化的，如下组分在丛生芽或茎段继代的培养基中的浓度分别为：瓜蒌瓤提取物2.0 mg/l、白砂糖15 g/l、蛋白胨8 g、琼脂8.8 g/l配置而成。

12、（3）一种利用瓜蒌瓤及瓜蒌根须提取物促进瓜蒌组培苗生根的培养基。

13、所述瓜蒌组培苗生根培养基为向1/2ms培养基中加入瓜蒌瓤提取物1.5 ~ 2.5mg/l、瓜蒌根须提取物1.0 ~ 2.0 mg/l、白砂糖15 ~ 30 g/l、蛋白胨8 ~ 10 g、活性炭1 ~3 g/l、琼脂8 ~ 9 g/l配置而成。

14、优化的，如下组分在瓜蒌组培苗生根培养基中的浓度分别为：瓜蒌瓤提取物1.0 ~2.0 mg/l、瓜蒌根须提取物1.0 ~ 1.5 mg/l、白砂糖15 ~ 20 g/l、蛋白胨8 ~ 10 g、活性炭1 ~ 2 g/l、琼脂8.5 ~ 9g/l配置而成。

15、进一步优化的，如下组分在瓜蒌组培苗生根培养基中的浓度分别为：瓜蒌瓤提取物2.0 mg/l、瓜蒌根须提取物1.5 mg/l、白砂糖15 g/l、蛋白胨8 g、活性炭1.5 g/l、琼脂8.8 g/l配置而成。

16、上述技术方案（1 ~ 3）中，瓜蒌瓤提取物提取方法为：瓜蒌瓤按料液比1 : 15加入蒸馏水，在40 khz条件下60 ~ 65℃超声提取46 ~ 56 min，超声后离心收集上清液和滤渣，滤渣进行二次重复提取，合并2次上清液在60 ~ 65℃条件下减压旋转蒸发浓缩，得到浸膏后冷冻干燥，研磨装瓶保存备用。

17、上述技术方案3中，瓜蒌根须提取物提取方法为：瓜蒌根须洗净阴干，干燥后粉碎过60 ~ 80目筛备用，按料液比1 : 20加入蒸馏水，在40 khz条件下60 ~ 65℃超声提取66~ 76 min，超声后离心收集上清液和滤渣，滤渣进行二次重复提取，合并2次上清液在60 ~65℃条件下减压旋转蒸发浓缩，得到浸膏后冷冻干燥，研磨装瓶保存备用。

18、上述技术方案1中，培养的条件为：温度24 ~ 26℃，光照强度2200 ~ 3000lx，光暗交替14h/10h。

19、上述技术方案（2 ~ 3）中，培养的条件为：温度24 ~ 26℃，光照强度2200 ～2800lx，光暗交替12h/12h。

20、本发明的有益效果在于：

21、本发明向常规培养基中添加瓜蒌瓤及瓜蒌根须提取物，有效增加瓜蒌丛生芽的诱导率，组培苗出苗数量，提高出苗率及移栽成活率，从而降低组培苗成本。另一方面，培养基为无激素培养基，无玻璃化、黄化、污染等问题。诱导、继代、生恨培养中转接，瓜蒌组培苗也能在较短时间内适应新的培养基。

技术特征：

1.一种瓜蒌瓤及瓜蒌根须提取物在瓜蒌组培快繁中的应用；

2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的促进丛生芽的诱导培养基为向1/2ms培养基中加入瓜蒌瓤提取物3.0 mg/l、白砂糖15 g/l、蛋白胨8 g、琼脂8.8 g/l配置而成。

3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述有助丛生芽或茎段继代的培养基为向1/2ms培养基中加入瓜蒌瓤提取物2.0 mg/l、白砂糖15 g/l、蛋白胨8 g、琼脂8.8 g/l配置而成。

4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述促进瓜蒌组培苗生根的培养基为向1/2ms培养基中加入瓜蒌瓤提取物2.0 mg/l、瓜蒌根须提取物1.5 mg/l、白砂糖15 g/l、蛋白胨8 g、活性炭1.5 g/l、琼脂8.8 g/l配置而成。

5. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，瓜蒌瓤提取物提取方法为瓜蒌瓤按料液比1 : 15加入蒸馏水，在40 khz条件下60 ~ 65℃超声提取46 ~ 56 min，超声后离心收集上清液和滤渣，滤渣进行二次重复提取，合并2次上清液在60 ~ 65℃条件下减压旋转蒸发浓缩，得到浸膏后冷冻干燥，研磨装瓶保存备用。

6. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，瓜蒌根须提取物提取方法为瓜蒌根须洗净阴干，干燥后粉碎过60 ~ 80目筛备用，按料液比1 : 20加入蒸馏水，在40 khz条件下60~ 65℃超声提取66 ~ 76 min，超声后离心收集上清液和滤渣，滤渣进行二次重复提取，合并2次上清液在60 ~ 65℃条件下减压旋转蒸发浓缩，得到浸膏后冷冻干燥，研磨装瓶保存备用。

技术总结
本发明提供了一种瓜蒌瓤及瓜蒌根须提取物在瓜蒌组培快繁中的应用。在促进丛生芽的诱导培养基，有助丛生芽或茎段继代的培养基中分别添加了瓜蒌瓤提取物2.5~3.5 mg/L，1.5~2.5 mg/L。促进瓜蒌组培苗生根的培养基中添加了瓜蒌瓤提取物1.5~2.5 mg/L、瓜蒌根须提取物1.0~2.0 mg/L。该方法具有简单易行，提高了诱导率，出苗量高，成苗移栽成活率高，为工厂化育苗提供技术支持。相对瓜蒌常规组织培养缩短了周期30%~40%。

技术研发人员：侯北伟,王胜,王虎,孙力军,刘畅,姚正颖,傅雷
受保护的技术使用者：中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4