一种小黄姜脱毒及薄层培养的组合培养基和培养方法与流程

本发明属于植物的组织培养，具体涉及一种小黄姜脱毒及薄层培养的组合培养基和培养方法。

背景技术：

1、姜(zingiber offcinaleroscoe)为姜科多年生草本植物，又称生姜、黄姜等，在我国中部、东南至西南各省区广为栽培。

2、姜分为小种姜、大种姜、山姜(野姜)等品种，习惯把小种生姜叫“小黄姜”，小黄姜具有切面纯黄色，味辛辣浓，肉细嫩，味香，纤维较细等独特优点，深受人们的喜爱。

3、长期的无性繁殖导致病毒和病菌在种姜体内积累，并传到下一代姜苗中，使生姜抗逆性降低，生活力下降，生长缓慢，品种种性退化，品质差。目前中国专利cn107529398a-一种生姜脱毒繁育方法中公开了一种生姜脱毒苗的制备方法，生姜根茎萌发的幼芽进行组培，得到脱毒苗，利用脱毒苗的茎叶进行扩繁，分枝数量最高为6。目前生姜的脱毒组培中存在繁殖系数低的问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种小黄姜脱毒及薄层培养的组合培养基和培养方法，应用本发明提供的组合培养基进行小黄姜脱毒和细胞薄层培养，脱毒彻底、增殖扩繁效率显著提高，能够获得大量小黄姜脱毒植株。

2、为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：

3、本发明提供了一种小黄姜脱毒及薄层培养的组合培养基，所述组合培养基包括初代培养基、丛芽诱导培养基与增殖和生根培养基；

4、所述初代培养基以sh培养基为基本培养基，还包括：1～3mg/l 6-ba、0.1～1.5mg/lnaa、0.1～1.5mg/lga3、30g/l蔗糖和5.5g/l琼脂；

5、所述丛芽诱导培养基以sh培养基为基本培养基，还包括：2～4mg/l 6-ba、0.1～1mg/lnaa、30g/l蔗糖和5.5g/l琼脂；

6、所述增殖和生根培养基以sh培养基为基本培养基，还包括：2～4mg/l 6-ba、0.1～1mg/lnaa、30g/l蔗糖和5.5g/l琼脂。

7、优选的，所述初代培养基的ph值为5.8～6.0；所述丛芽诱导培养基的ph值为5.8～6.0；所述增殖和生根培养基的ph值为5.8～6.0。

8、本发明提供了一种小黄姜的培养方法，所述培养方法采用上述技术方案所述组合培养基，包括以下步骤：

9、将小黄姜的茎尖接种于初代培养基进行初代培养，得到脱毒组培苗；

10、对所述脱毒组培苗茎基部往上0～0.5cm位置进行横切片，得到薄层培养切片材料；将所述切片材料接种于丛芽诱导培养基中进行薄层丛芽诱导培养，得到丛芽；

11、将所述丛芽接种于增殖和生根培养基进行增殖和生根培养，得到脱毒植株。

12、优选的，所述小黄姜的茎尖长度为1～3mm。

13、优选的，所述小黄姜的茎尖的培养方法包括：选取外表无病症的姜芽，在所述姜芽中剥取长度为1～3mm的茎尖。

14、优选的，剥取姜芽得到茎尖前，还包括对姜芽进行消毒；

15、所述消毒的方式包括：先用质量浓度70％～75％酒精浸泡30～45s，用无菌水冲洗3～4次；再用质量浓度为0.1％升汞溶液浸泡2～4min；最后用无菌水冲洗6～8次。

16、优选的，所述初代培养、薄层丛芽诱导培养与增殖和生根培养的温度分别为(25±2)℃。

17、优选的，所述初代培养先进行暗培养再进行光培养，所述暗培养的时间为2～3d；所述光培养的时间为27～28d；所述初代培养的时间30d；光培养中的光照强度为1500～1800lux，光照时间为12h/d。

18、优选的，所述薄层丛芽诱导培养先进行暗培养再进行光培养，所述暗培养的时间为2～3d；所述光培养的时间为27～28d；光照强度为1500～1800lux，光照时间为12h/d。

19、优选的，所述薄层丛芽诱导培养的时间为30d，所述增殖和生根培养的时间为30d。

20、本发明的有益效果：本发明提供了一种小黄姜脱毒及薄层培养组合培养基，所述组合培养基包括初代培养基、丛芽诱导培养基与增殖和生根培养基；

21、所述初代培养基以sh培养基为基本培养基，还包括：1～3mg/l 6-ba、0.1～1.5mg/lnaa、0.1～1.5mg/lga3、30g/l蔗糖和5.5g/l琼脂；

22、所述丛芽诱导培养基以sh培养基为基本培养基，还包括：2～4mg/l 6-ba、0.1～1mg/lnaa、30g/l蔗糖和5.5g/l琼脂；

23、所述增殖和生根培养基以sh培养基为基本培养基，还包括：2～4mg/l 6-ba、0.1～1mg/lnaa、30g/l蔗糖和5.5g/l琼脂。

24、在本发明提供的组合培养基中，6-ba(6-苄氨基嘌呤)刺激细胞分裂促进小黄姜生长和发育，促进芽的形成；naa(1-萘乙酸)促进小黄姜发芽和生长；ga3(赤霉素)进茎的生长；6-ba、naa、赤霉素共同作用下利于诱导小黄姜芽的形成，提高小黄姜的扩繁系数，获得小黄姜脱毒及薄层培养植株。

25、本发明还提供了一种小黄姜脱毒及薄层培养的培养方法，将小黄姜的茎尖接种于初代培养基进行初代培养，得到脱毒组培苗；对所述脱毒组培苗茎基部往上0～0.5cm位置进行横切片，得到薄层培养切片材料；将所述切片材料接种于丛芽诱导培养基中进行薄层丛芽诱导培养，得到丛芽；将所述丛芽接种于增殖和生根培养基进行增殖和生根培养，得到脱毒植株。本发明利用脱毒及薄层培养相结合的方案显著提高了脱毒植株的扩繁系数，实施例结果表明：本发明获得的脱毒植株的扩繁系数为21，扩繁效率显著提高。可见，本发明的技术方案不仅有效，而且显著提升了扩繁效率，还具有操作简单和成本低廉的优势。

技术特征：

1.一种小黄姜脱毒及薄层培养的组合培养基，其特征在于，所述组合培养基包括初代培养基、丛芽诱导培养基与增殖和生根培养基；

2.根据权利要求1所述组合培养基，其特征在于，所述初代培养基的ph值为5.8～6.0；所述丛芽诱导培养基的ph值为5.8～6.0；所述增殖和生根培养基的ph值为5.8～6.0。

3.一种小黄姜的培养方法，其特征在于，所述培养方法采用权利要求1或2所述组合培养基，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述培养方法，其特征在于，所述小黄姜的茎尖长度为1～3mm。

5.根据权利要求3或4所述培养方法，其特征在于，所述小黄姜的茎尖的培养方法包括：选取外表无病症的姜芽，在所述姜芽中剥取长度为1～3mm的茎尖。

6.根据权利要求5所述培养方法，其特征在于，剥取姜芽得到茎尖前，还包括对姜芽进行消毒；

7.根据权利要求3所述培养方法，其特征在于，所述初代培养、薄层丛芽诱导培养与增殖和生根培养的温度分别为25±2℃。

8.根据权利要求3所述培养方法，其特征在于，所述初代培养先进行暗培养再进行光培养，所述暗培养的时间为2～3d；所述光培养的时间为27～28d；所述初代培养的时间30d；光培养中的光照强度为1500～1800lux，光照时间为12h/d。

9.根据权利要求3所述培养方法，其特征在于，所述薄层丛芽诱导培养先进行暗培养再进行光培养，所述暗培养的时间为2～3d；所述光培养的时间为27～28d；光照强度为1500～1800lux，光照时间为12h/d。

10.根据权利要求3所述培养方法，其特征在于，所述薄层丛芽诱导培养的时间为30d，所述增殖和生根培养的时间为30d。

技术总结
本发明属于植物的组织培养技术领域，具体涉及一种小黄姜脱毒及薄层培养的组合培养基和培养方法。本发明提供了一种小黄姜脱毒及薄层培养组合培养基，所述组合培养基包括初代培养基、丛芽诱导培养基与增殖和生根培养基；本发明提供了一种小黄姜脱毒及薄层培养的培养方法，将小黄姜的茎尖接种于初代培养基进行初代培养，得到脱毒组培苗；对所述脱毒组培苗进行细胞薄层培养，得到脱毒植株。本发明的技术方案丛芽诱导培养中的丛芽出芽数量多，脱毒植株的扩繁系数为21，显著提高了扩繁系数和扩繁效率。

技术研发人员：何莲梅,张连娟,王亚金,林亮,万阳
受保护的技术使用者：云南龙藏生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4