一种杂花二色补血草组织培养方法与流程

本发明涉及植物培养，具体涉及一种杂花二色补血草组织培养方法。

背景技术：

1、杂花二色补血草是通过二色补血草与黄花矶松杂交形成的具有多种花色的二色补血草，是重要的观赏植物资源。杂花二色补血草不仅可作鲜切花，还因其花萼宿存，可以长期保持美丽的花色与花型，而适宜作干花；但由于杂花二色补血草种子采集困难，遗传性状不稳定，人工育苗受季节和周期的限制，繁殖缓慢，不能满足日益增长的需求；因此，亟待一种杂花二色补血草组织培养方法。

技术实现思路

1、一种杂花二色补血草组织培养方法，包括如下步骤：

2、s1、外植体的选择与灭菌：取杂花二色补血草没开花的花序进行消毒灭菌；

3、s2、愈伤组织诱导：将消毒灭菌后的没开花的花序切成0.8-1.2厘米小段，并放置在初代培养基上培养15-20天，诱导出愈伤组织；

4、所述初代培养基为：ms+6ba 0.4-0.6mg/l+naa 0.04-0.06mg/l+ac 0.8-1.2mg/l+2,4-d 0.04-0.06mg/l；

5、s3、继代增殖培养：将步骤s2诱导出的愈伤组织取出,接种于增殖分化培养基上培养15-25天，增殖培养出不定芽；

6、所述增殖分化培养基为：改良ms+6ba 0.09-0.11mg/l+naa 0.04-0.06mg/l+ac1.5-2.5mg/l；

7、所述改良ms为：将ms培养基中的大量元素硝酸铵减少1/3mg/l，大量元素硝酸钾减少1/3mg/l，微量元素硼酸减少1/5mg/l；

8、s4、生根培养：将步骤s3得到的不定芽转入生根培养基中，生根培养5-7天，获得无菌苗；

9、所述生根培养基为：1/2ms+iaa 0.09-0.11mg/l+ac 2.5-3.5mg/l。

10、优选的，所述步骤s1中，消毒灭菌的方法为：

11、（1）将杂花二色补血草没开花的花序用无菌水冲洗2-4次；

12、（2）转移至超净台，用无菌水冲洗1-2次，然后用吸水纸吸取水分，接着用75%酒精清洗25-35秒后，再用无菌水冲洗1-3次；

13、（3）用0.1%氯化汞溶液处理2-4分钟后，再用无菌水淋洗4-6次。

14、优选的，所述步骤s2中，诱导愈伤组织时，温度为23-27℃,光照强度为1500-2000lx,光照时间为12-16h/d。

15、优选的，所述步骤s3中，继代增殖培养时，温度为23-27℃,光照强度1500-2000lx,光照时间12-16h/d。

16、优选的，所述步骤s4中，生根培养时，温度为23-27℃,光照强度1500-2000lx,光照时间12-16h/d。

17、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

18、1、本发明筛选杂花二色补血草没开花的花序做为外植体进行组织培养，结合本发明配制的初代培养基，愈伤组织诱导率最高可达到86.7%。

19、2、本发明通过对现有技术中常用的组织培养的药剂进行筛选，经过反复实验，筛选出适合杂花二色补血草在愈伤组织诱导阶段、继代增殖培养阶段、生根培养阶段分别所需的药剂，并确定了各药剂的用量，分别为：初代培养基（ms+6ba 0.4-0.6mg/l+naa 0.04-0.06mg/l+ac 0.8-1.2mg/l+2,4-d 0.04-0.06mg/l）、增殖分化培养基（改良ms+6ba 0.09-0.11mg/l+naa 0.04-0.06mg/l+ac 1.5-2.5mg/l）、生根培养基（1/2ms+iaa 0.09-0.11mg/l+ac 2.5-3.5mg/l）；使用本发明的技术方案，愈伤组织诱导率最高为86.7%，分化率最高为86.7%，生根率最高为93.3%。

技术特征：

1.一种杂花二色补血草组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的一种杂花二色补血草组织培养方法，其特征在于，所述步骤s1中，消毒灭菌的方法为：

3.如权利要求1所述的一种杂花二色补血草组织培养方法，其特征在于，所述步骤s2中，愈伤组织诱导时，温度为23-27℃,光照强度为1500-2000lx,光照时间为12-16h/d。

4.如权利要求1所述的一种杂花二色补血草组织培养方法，其特征在于，所述步骤s3中，继代增殖培养时，温度为23-27℃,光照强度1500-2000lx,光照时间12-16h/d。

5.如权利要求1所述的一种杂花二色补血草组织培养方法，其特征在于，所述步骤s4中，生根培养时，温度为23-27℃,光照强度1500-2000lx,光照时间12-16h/d。

技术总结
本发明提供一种杂花二色补血草组织培养方法，包括如下步骤：S1、外植体的选择与灭菌：取杂花二色补血草没开花的花序进行消毒灭菌；S2、愈伤组织诱导：将消毒灭菌后的没开花的花序切成0.8‑1.2厘米小段，并放置在初代培养基上进行诱导15‑20天，诱导出愈伤组织；S3、继代增殖培养：将愈伤组织接种于增殖分化培养基上培养15‑25天，培养出不定芽；S4、生根培养：将不定芽转入生根培养基中，生根培养5‑7天，获得无菌苗；本发明通过对常用的组织培养的药剂进行筛选，经过反复实验，筛选出适合杂花二色补血草在愈伤组织诱导阶段、继代增殖培养阶段、生根培养阶段分别所需的药剂，并确定了各药剂的用量，诱导率最高为86.7%；分化率最高为86.7%；生根率最高为93.3%。

技术研发人员：刘亚玲,马怀林,赵慧敏,付娜娜,马彩娥,刘英俊,贾振宇,苑峰
受保护的技术使用者：蒙草生态环境（集团）股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10