一种蓝色大斑石斑鱼促雄发育及成熟配子产生的方法与流程

本发明涉及水产，特别涉及一种蓝色大斑石斑鱼促雄发育及成熟配子产生的方法。

背景技术：

1、石斑鱼为先雌后雄的雌雄同体的鱼类，大多数石斑鱼在5龄左右时才首先成熟为雌性，然后一些石斑鱼的性别逆转为雄性。而传统的选择育种需要对目的性状进行多代的选育，因此远缘杂交对石斑鱼新品种的开发具有重要意义。近年来，杂交育种作为鱼类新品种培育方法被广泛应用于石斑鱼杂交育种。其中，蓝身大斑石斑鱼生长速度较快，且肉质鲜美，是重要的海水经济鱼类。

2、蓝身大斑石斑鱼（ epinephelus tukula）属鲈形目、鮨科、石斑鱼亚科、石斑鱼属，俗名金钱斑，是石斑鱼中大型品种之一，广泛分布于印度—太平洋区域，以及我国南部海域及澎湖湾海域。蓝身大斑石斑鱼生长速度快、肉味鲜美，是重要的海水经济鱼类。具有生长速度快的优点，属中大型鱼类，因此常作为父本用于与其他石斑鱼进行杂交。然而蓝身大斑石斑鱼的研究尚处于起步阶段，有关资料甚少，国内外文献中均未见有关种类的系统描述。蓝身大斑石斑鱼性成熟时间较晚，一般需要3~4年龄鱼才能达到初次性成熟，精子自然成熟时间长，在实际生产中，经常会遇到雄鱼精液量不足等问题，严重制约了养殖产业的发展。大多石斑鱼类为多批产卵鱼类。卵巢内同时具有不同时相的卵母细胞。雌鱼在一个繁殖期内。卵子分批成熟。如青石斑鱼( e.awoara)、点带石斑鱼( e.malabaricus)和云纹石斑鱼( e.moara)等。因此经常出现精卵不同步等问题，目前蓝身大斑石斑鱼只能有精子冷冻技术等来实现保存，并且无法长期保存并且其精子存活率不高。

技术实现思路

1、鉴以此，本发明提出一种蓝色大斑石斑鱼促雄发育及成熟配子产生的方法，来解决上述问题。

2、本发明的技术方案是这样实现的：一种蓝色大斑石斑鱼促雄发育及成熟配子产生的方法，包括以下步骤：

3、步骤一、实验亲鱼预备

4、（1）雄性亲本：选择不同年龄健康的蓝身大斑石斑鱼作为雄性亲本；

5、（2）雌性亲本：选择3年龄以上健康的棕点石斑鱼（ epinephelus fuscoguttatus）作为雌性亲本；

6、步骤二、亲鱼暂养

7、（1）暂养环境：工厂化水泥养殖池环境培育；

8、（2）亲本投喂

9、隔1-2天投喂一餐，投喂食物为冰冻鱼料，喂到不吃为止，在埋植前1-2天停止投喂；

10、步骤三、药物配置、埋植

11、（1）使用质量比为1:2:3的酮基睾酮、来曲唑和海藻多糖，在常温下加入超纯水揉搓成长条状制成药条，放入烘箱烘干，保存；

12、（2）埋植药物为烘干后的步骤三中（1）所配药条，在埋植前，进行麻醉，麻醉后擦干泄殖孔周围，埋植部位为头后背部两侧肌肉；

13、步骤四、亲鱼成熟判断

14、每周对雄性亲鱼进行成熟度检查，生殖孔微红，轻压腹部，能挤出乳白色的精液，即达到性成熟；

15、步骤五、精液采集

16、（1）选取经过药条埋植、生长良好、精巢发育成熟的雄鱼，通过人工挤压的方式取精，在采集前，进行麻醉，麻醉后擦干泄殖孔周围，轻压腹部至泄殖孔，待流出乳白色、干净无污染的精液，收集其精液至ep管中；

17、（2）采集到的所有精液混合处理；

18、（3）统计能人工挤压出精子的亲本数量；

19、（4）将所述ep管先用锡箔纸包裹避光，再包裹脱脂棉，最外层纱布裹紧，放入含冰袋的冰盒内，温度为2-6℃；

20、步骤六、人工授精、受精卵孵化

21、（1）采用人工挤压的方法从雌性亲本获取卵子，将步骤五采集的精子加入装有卵子的容器中，搅拌静置2-3min，使其完全受精，用海水冲洗受精卵；

22、（2）采用孵化桶进行微流水孵化得到仔鱼。

23、进一步的，一种蓝色大斑石斑鱼促雄发育及成熟配子产生的方法，包括以下步骤：

24、步骤一、实验亲鱼预备

25、（1）雄性亲本：选择4-7年龄健康的蓝身大斑石斑鱼作为雄性亲本；

26、（2）雌性亲本：选择3年龄以上健康的棕点石斑鱼作为雌性亲本；

27、步骤二、亲鱼暂养

28、（1）暂养环境：工厂化水泥养殖池环境培育，光线为自然光，设置遮阳网，晚上不加灯，温度为23±0.5℃，养殖池规格为长4.7m，宽4.7m，高1.8m；

29、（2）亲本投喂

30、隔天投喂一餐，投喂食物为冰冻鱼料，喂到不吃为止，在埋植前1-2天停止投喂；

31、步骤三、药物配置、埋植

32、（1）称量质量比1:2:3的酮基睾酮、来曲唑和海藻多糖；在常温下加入超纯水揉搓成长条状制成药条，放入35-38℃烘箱中烘干6-9小时，2-5℃下保存使用，保存时间为25-35天；

33、（2）埋植药物为烘干后的步骤三中（1）所配药条，在埋植前，进行麻醉，麻醉后用干毛巾擦干泄殖孔周围，埋植部位为头后背部两侧肌肉；

34、步骤四、亲鱼成熟判断

35、每周对雄性亲鱼进行成熟度检查，生殖孔微红，轻压腹部，能挤出乳白色的精液，即达到性成熟；

36、步骤五、精液采集

37、（1）选取经过药条埋植、生长良好、精巢发育成熟的雄鱼，通过人工挤压的方式取精，在采集前，进行麻醉，麻醉后用干毛巾擦干泄殖孔周围，轻压腹部至泄殖孔，待流出乳白色、干净无污染的精液后，使用移液枪立即吸取，并打入无任何液体的5ml无菌ep管底部；

38、（2）采集到的所有精液混合处理，初始活力大于90%；

39、（3）统计能人工挤压出精子的亲本数量；

40、（4）将所述ep管先用锡箔纸包裹避光，目的是防止光激活，再包裹脱脂棉，最外层纱布裹紧，放入含冰袋的冰盒内，温度为4℃；

41、步骤六、人工授精、受精卵孵化

42、（1）采用人工挤压的方法从雌性亲本获取卵子，采用干式受精法进行受精，将步骤五采集的精子加入装有卵子的容器中，一边加入海水一边搅拌，静置2-3min，使其完全受精，用海水冲洗受精卵；

43、（2）采用孵化桶进行微流水孵化得到仔鱼。

44、进一步的，所述步骤二（1）的培育条件：溶解氧8mg/l、水流交换量1.4米水排到0.5m，换水量0.9m，每天4次。

45、进一步的，所述步骤三（1）的药物长条状规格：长1.8cm，宽0.3cm，重量为0.1g±0.008。

46、进一步的，所述步骤三（1）放入37℃烘箱中烘干8小时，4℃下保存使用，保存时间为30天。

47、进一步的，所述步骤三（1）放入37℃烘箱中烘干8小时，4℃下保存使用，保存时间为30天。

48、进一步的，所述步骤三（2）的埋植剂量为15.0-25.0mg/kg（药条/鱼体重）。

49、进一步的，所述步骤六（2）的孵化温度为26-28℃，溶氧为6-8mg/l，盐度为28-30，ph值为7.8-8.1。

50、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

51、（1）提高性成熟率：通过精确的药物配比和埋植技术，显著提升了雄性蓝身大斑石斑鱼的性成熟率，确保了精液的质量和数量。操作简便易行，按照程序化要求提前配好埋植药物后，定期往鱼体进行药物埋植即可；

52、（2）加快蓝身大斑石斑鱼性成熟：解决现有蓝身大斑石斑鱼性成熟时间晚、繁殖方法效率低下的问题。能够高效获得精液，满足实际生产上的要求。

53、（3）精液质量保障：通过严格的暂养环境控制和精液采集流程，确保了采集到的精液具有高活力（初始活力大于90%），为后续的人工授精提供了优质的精子资源。

54、（4）受精卵孵化率提升：在受精和孵化阶段，通过控制适宜的水温、溶氧、盐度和ph值等参数，为受精卵提供了理想的孵化环境，从而提高了孵化率。