一种促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法

本发明涉及植物组织培养，具体涉及一种促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法。

背景技术：

1、龙牙百合(lilium brownii var.viridulum)是百合科(liliaceae)百合属(lilium)多年生草本植物，是野百合(lilium brownii)的变种，因其鳞片肥大、形似龙牙而得名。其主产于湖南邵阳、隆回和江西万载、泰和等地，是卫生部首批公布的药食同源食品，在东南亚国家和地区深受消费者的青睐。生产上，龙牙百合主要靠鳞片扦插和分球等无性方式进行繁殖，但是该方式会导致其种性退化，产量和品质显著下降，且龙牙百合在繁育过程中也存在着分化系数低，繁育周期长的问题。因此，种球高质高效繁育是解决龙牙百合产业发展的必由之路。

2、植物组织培养技术是生命科学中重要的研究技术和手段之一。利用组织培养技术，可加快百合的繁殖速度，缩短百合籽球的生育周期，弥补种球繁育的不足，因而在百合商品化及产业化过程中被广泛应用。近年来，国内外关于百合组织培养方面的研究报道较多，百合组织培养常以鳞片、茎段等作为外植体，添加6-ba、naa、2,4-d等激素，通过单独或组合的形式来促进百合籽球诱导、增殖及膨大。如公布号为cn 107396835 a的中国发明专利公开了一种食用百合快速繁殖方法，该发明通过确定名优品种百合外植体增殖各阶段的培养基及培养条件，大大提高了名优品种百合外植体的不定芽诱导效果，同时不定芽分化率高、分化量大。但是该方法仅能促进百合鳞片分化，百合繁育培养过程中，仍然存在鳞片褐化的问题。并且百合基因组庞大，杂合度高，品种倍性不一、不同杂种系间存在巨大差异，针对不同品种的百合所需要的激素处理组合是不一样的，因此，该方法并不能广泛的应用。

技术实现思路

1、针对现有技术中的上述不足，本发明的目的在于提供一种促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法。

2、为了达到上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

3、提供一种促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法，其通过设置培养基及培养条件实现；培养基及培养条件为：ms+naa 0.05mg·l-1+tdz 0.25mg·l-1+kt 0.05mg·l-1+ac 6g·l-1，ph 6.0。

4、进一步地，具体包括以下步骤：

5、步骤1、选取龙牙百合种球中部洁白无斑的鳞片，流水下清洗干净；

6、步骤2、配制培养基：ms+naa0.05mg·l-1+tdz 0.25mg·l-1+kt 0.05mg·l-1+ac6g·l-1，ph 6.0，培养基高温灭菌后使用；

7、步骤3、将鳞片放于灭菌空瓶中置于超净工作台紫外灭菌15min，用75％酒精处理30s后，10％ naclo处理15min，无菌水冲洗3次，每次3min；

8、步骤4、去除鳞片四周透明部分，将鳞片切成上下两部分，凹面朝上接种至培养基中；

9、步骤5、20d后观察百合鳞片分化、褐化情况，统计分化率，测定籽球大小。

10、进一步地，活性炭ac需要在最后加入培养基中。

11、本发明的有益效果为：

12、本发明提出了一种促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法，能够有效提高龙牙百合鳞片分化率并且降低龙牙百合鳞片褐化情况，缩短籽球生长时间并显著促进籽球生长。其中，ms+naa0.05mg·l-1+tdz 0.25mg·l-1+kt 0.05mg·l-1为龙牙百合籽球诱导最适培养基，鳞片分化率可达81.67％±3.33a，添加6g·l-1ac后分化率为71.66％±6.00ab，与对照无显著差异，但褐化率显著降低为26.66％±6.00c，且籽球大小可达(0.52cm±0.01ab)×(0.4cm±0.02a)(长×宽)，显著高于其他组，可为龙牙百合种球高效繁育提供支撑。

技术特征：

1.一种促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法，其特征在于，通过设置培养基及培养条件实现；培养基及培养条件为：ms+naa 0.05mg·l-1+tdz 0.25mg·l-1+kt0.05mg·l-1+ac 6g·l-1，ph 6.0。

2.根据权利要求1所述的促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

3.根据权利要求1或2所述的促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法，其特征在于，活性炭ac需要最后加入培养基。

技术总结
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种促进龙牙百合鳞片分化且降低鳞片褐化的方法。本发明通过观察不同培养基条件下鳞片分化和褐化情况，发现当NAA为0.05mg·L<supgt;‑1</supgt;，TDZ为0.25mg·L<supgt;‑1</supgt;，KT为0.05mg·L<supgt;‑1</supgt;，AC为6g/L时，龙牙百合鳞片分化率可达71.66％±6.00ab，褐化率降低为26.66％±6.00c，且显著促进籽球生长，籽球大小可达(0.52cm±0.01ab)×(0.4cm±0.02a)，可为龙牙百合种球高效繁育提供支撑。

技术研发人员：杨盼盼,明军,徐雷锋,张政
受保护的技术使用者：中国农业科学院蔬菜花卉研究所
技术研发日：
技术公布日：2025/4/10