用于河豚的杀寄生物药和杀寄生物方法

专利名称:用于河豚的杀寄生物药和杀寄生物方法
技术领域：
本发明涉及用于渔业养殖领域中养殖鱼上的寄生物的杀寄生物药和杀寄生物方法，具体地说，本发明涉及用于河豚的寄生物的杀寄生物药及其杀寄生物方法。
背景技术：
由于外寄生物对渔业养殖领域中的鱼导致的损害非常显著，所以需要合适的杀寄生物方法。
例如，寄生性疾病可阻止虎河豚养殖中的稳定生产，它正在变成一个极为严重的问题。在寄生性疾病中，Heterobothrium感染特别是虎河豚(Takifugu)养殖中最存在问题的感染情况之一，因为在日本的每个养殖场中均会发生这种情况。
由于虎河豚上的寄生物Heterobothrium属(Monogenea中的Heterobothrium okamotoi，Decridophora)寄生在虎河豚上并从鳃或其周围肉质的部位中吸取血液，所以导致虎河豚不能充分生长且有时会导致它们死亡(Shuzo Egusa编辑的《鱼类病理学》(FishPathology)[“感染与寄生物版”(Infections and parasiteseditions)]，Koseisha Koseikaku，1983，p 284-286)。据认为这种寄生物的生命周期至其从卵中孵化后的4-5个月时终止。从卵中孵化出的幼虫会浮起并寄生在鳃上而成为幼小的寄生物，它可以运动至鳃周围的组织，此时它已经生长至约5-6mm大小而成为成虫并产卵。
据报导2-环己基羰基-1，2，3，6，7，11b-六氢-4H-吡嗪并-[2，1-a]-异喹啉-4-酮(通用名由Bayer Co.制造的Pladi cantel)在以200mg/kg口服给药3天时是有效的(日本专利未审公开号Hei 11-92309(Japan Patent Laid-Open Publication No.Hei 11-92309))，但迄今为止尚未开发出实际有效的杀寄生物方法作为这种寄生物的杀寄生物方法，这是因为鳃瓣上的寄生物幼虫和鳃腔壁上的寄生物成虫十分耐药且渗透压发生改变。
针对养殖地中这种寄生物的唯一相反的杀寄生物方案是定期用约800ppm的福尔马林浴将鱼浸渍约1小时。然而，福尔马林是一种致癌物质，从环境污染等的观点来看它会产生问题。此外，1998年将过氧化氢药物批准用于所述疾病(日本专利未审公开号Hei 06-046708(Japan Patent Laid-Open Publication No.Hei 06-046708))，但存在有效浓度和毒性浓度范围相近而由此难以应用这类问题。
如上所述，强烈需要开发适于有效杀灭渔业养殖中鱼上外寄生物的药物。
本发明的一个目的是提供渔业养殖领域中用于鱼寄生物的杀寄生物药和杀寄生物方法、特别是杀河豚寄生物药。本发明的一个目的特别是提供用于Heterobothrium属即虎河豚寄生物的杀寄生物药及其杀寄生物方法。
本发明的公开内容本发明提供了权利要求
中所述的下列
发明内容
。
(1)用于河豚寄生物的杀寄生物药，其特征在于它包括至少一种噻苯达唑类化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐作为有效成分。
(2)上述(1)所述的杀寄生物药，其特征在于它包括芬苯达唑(Fenbendazole)、非班太尔(Febantel)、奥芬达唑(Oxfendazole)、氟苯达唑(Flubendazole)、三氯苯达唑(Triclabendazole)、阿苯达唑(Albendazole)、奥苯达唑(Oxibendazole)及其药物上可接受的盐中的至少一种作为有效成分。
(3)上述(1)所述的杀寄生物药，其特征在于所述的河豚是虎河豚(Fugu)且所述的寄生物是Heterobothrium okamotoi。
(4)用于河豚寄生物的沙寄生物方法，其特征在于对河豚给予杀寄生物药，该杀寄生物药包括至少一种噻苯达唑类化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐作为有效成分。
(5)上述(4)所述的杀寄生物方法，其特征在于用于所述寄生物的杀寄生物药包括芬苯达唑、非班太尔、奥芬达唑、氟苯达唑、三氯苯达唑、阿苯达唑、奥苯达唑及其药物上可接受的盐中的至少一种作为有效成分。
(6)上述(4)所述的方法，其特征在于所述的河豚是虎河豚(Fugu)且所述的寄生物是Heterobothrium okamotoi。
(7)上述(4)所述的方法，其特征在于通过在饲喂的水中添加有效量的杀寄生物药以便使河豚接触该杀寄生物药来给予所述的杀寄生物药。
(8)用于河豚的饵料(饲料)，其特征在于它含有选自由噻苯达唑类化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐组成的组的杀寄生物药中的至少一种作为有效成分。
(9)上述(8)所述的用于河豚的饵，其特征在于所述的杀寄生物药包括至少一种选自芬苯达唑、非班太尔、奥芬达唑、氟苯达唑、三氯苯达唑、阿苯达唑、奥苯达唑及其药物上可接受的盐中组成的组的药物。
(10)用于河豚寄生物的杀寄生物注射剂，其特征在于它含有有效量的至少一种选自由噻苯达唑类化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐组成的组的杀寄生物药。
(11)上述(10)所述的注射剂，其特征在于用于所述寄生物的杀寄生物药包括至少一种选自芬苯达唑、非班太尔、奥芬达唑、氟苯达唑、三氯苯达唑、阿苯达唑、奥苯达唑及其药物上可接受的盐中组成的组的药物。
本发明的最佳实施方式作为本发明中所用的“噻苯达唑类化合物”可以提及的有如“噻苯达唑化合物杀寄生物药”(“Thiabendazole compoundparasiticides”)(《动物药和工具手册》(Animal Drugs andTools Handbook)，1998，日本兽药协会(Japan VeterinaryPharmaceutical Association)编辑，p 224-226；E.Lacey，“细胞骨架蛋白微管蛋白在苯并咪唑的耐药作用方式和机理中的作用”(The Role of the cytoskeletal protein，tubulin，in themode of action and mechanism of drug resistance tobenzimidazole.)-《国际寄生虫学杂志》(Int.J.Parasitol.)，1988，18，p 885-936)中所述的芬苯达唑、奥芬达唑、阿苯达唑、噻苯达唑、帕苯达唑、氟苯达唑、三氯苯达唑、甲苯达唑、奥苯达唑、坎苯达唑、鲁苯达唑、诺考达唑、Rycobendazole和环苯达唑等。
此外，作为“其前体药物”可以提及的有非班太尔、奈替米星和苯硫脲酯等。
此外，“其药物上可接受的盐”指的是无机酸盐，诸如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐和磷酸盐；有机酸盐，诸如乙酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐、甲苯磺酸盐和甲磺酸盐；金属盐，诸如钠盐、钾盐和钙盐；以及与碱形成的盐，诸如三乙胺盐、胍盐和铵盐。
上述噻苯达唑化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐是已知化合物，已知它们作为牛、猪、小鸡、绵羊、狗和猫等上的线虫和吸虫的杀虫剂(Hoshu Toyama，《新编家畜药理学》(New RevisedEdition of Livestock Pharmacology)，Yokendo K.K.，1994，p325-327)。
已知诸如非班太尔(C.Montesissa，J.M.Stracciari，L.Fadini和C.Beretta，“不同动物种类中非班太尔及其代谢物芬苯达唑的微粒体氧化比较”(“Comparative microsomal oxidationof febantel and its metabolite fenbendazole in variousanimal species”-《异生物》(Xenobiotica)，1989，19，p97-100))、奈替米星(C.E.Lanusse和R.K.Prichard.“奈替米星及其代谢物在绵羊体内的药动学特性”(Pharmacokineticsbehaviour of netobimin and its metabolites in sheep.)《兽药药理学疗法杂志》(J.Vet.Pharmacol.Therap.)，1990，13，p 170-178)和苯硫脲酯(E.Lacey，“细胞骨架蛋白微管蛋白在耐苯并咪唑的药物作用方式和机理中的作用”(The Role of thecytoskeletal protein，tubulin，in the mode of action andmechanism of drug resistance to benzimidazole.)-《国际寄生虫学杂志》(Int.J.Parasitol.)，1988，18，p 885-936)这样的噻苯达唑类化合物的前体药物可代谢成噻苯达唑类化合物并表现出杀寄生物作用。
此外，已知芬苯达唑可代谢成奥芬达唑(芬苯达唑-S0)(C.R.Short，W.F.Flory，L.C.Hsieh和S.A.Barker“芬苯达唑的氧化代谢比较研究”(“The oxidative metabolism offenbendazoleComparative study.”- 《兽药药理学疗法杂志》(J.Vet.Pharmacol.Therap.)，1988，11，p 50-55))。
认为这些功能机理可通过与寄生物的肠上皮细胞中的微管蛋白特异性结合而修饰它来防止葡萄糖吸收，由此表现出杀寄生物作用(E.Lacey，“苯并咪唑类的作用方式”(Mode of action ofbenzimidazoles.)-《今日寄生虫学》(Parasitology Today)，1990，6，p 112-115)。
作为本发明可以施用的寄生物可以提及的例如有多后盘目(polyopisthocotylea)。多后盘目属于吸虫纲单殖亚纲种类的Platyhelminthes phylum(Iwanami Biological Dictionary，第3版，动物分类表(Table of animal classication)，P45，ShuzoEgusa编辑的“鱼类病理学”(Fish Pathology)[“感染与寄生物版”(Infections and Parasites eiditions)]，KoseishaKoseikaku Co.，Ltd.，1983，p 235-289)。单殖亚纲属于雌雄同体且它们大部分是鱼上的外寄生物。其体大小在小于1mm的小种类至几个cm的范围。主要根据粘附在鱼类上的背端的器官结构而将它们分成单后盘目(monopisthocotylea)和多后盘目。
作为属于多后盘目的主要寄生物的分类族和种类可以提及的有Microcotyle sebastisci、Bivagina tai、Heteraxineheterocerca、Heterobothrium okamotoi、Eudiplozoonnipponicum和Neoheterobothrium hirame等。然而，在本发明中主要以属于Heterobothrium属的寄生物为靶。
此外，作为本发明可以施用的河豚可以提及的有单角鲀亚科(粗单角鲀属)、粒突箱鲀(箱鲀属)、虎河豚(Fugu)、六斑刺鲀(Dioton)和Kusabifugu(长翻车鲀属)等。另外，就养殖的鱼类而言，本发明可以施用那些受上述寄生物感染的养殖鱼类，诸如黄条鰤、Hiarmasa、菱体兔牙鲷、比目鱼(牙鲆属)、与青鲹近缘的鱼(鲹属)和鲤(Cyprius)等。
作为本发明杀寄生物药的给药方法可以提及的有对河豚等进行注射给药和口服给药，此外还有直接接触方法，其中将目标鱼类引入含有所给予的溶解的杀寄生物药的饲喂水中。
在所述的杀寄生物药中，可以单独使用上述化合物作为有效成分或如果必要可以将其与诸如辅助性成分这样的其它物质混合，所述的辅助性成分诸如有载体、稳定剂、溶剂、赋形剂和稀释剂。
作为载体可以提及的有藻酸钠、乳糖、纤维素、淀粉、谷蛋白、酪蛋白、一代磷酸钙、明胶、聚乙二醇和轻硅酐等。
作为稳定剂可以提及的有丙二醇、氯化镁、抗坏血酸钙、乙酸生育酚酯、乙氧基喹和焦亚硫酸钠等。
作为将所述杀寄生物药溶入饲喂水过程中所用的载体可以提及的有溶剂和共溶剂。作为溶剂可以提及的有水；醇类，诸如乙醇、丁醇、苄醇和甘油；烃类，丙二醇、聚乙二醇类、N-甲基吡咯烷酮及其混合物。
作为共溶剂可以提及的有聚乙烯吡咯烷酮、失水山梨糖醇单硬脂酸酯、失水山梨糖醇单棕榈酸酯、失水山梨糖醇单月桂酸酯和聚乙烯醇等。
本发明的杀寄生物药可以含有有效杀灭靶向的寄生物的用量的上述化合物，其中可以单独使用所述的化合物或可以将其与载体或其它成分联用。一般来说，上述化合物有效成分在杀寄生物药中的浓度为0.01-20％、优选0.05-10％。然而，如果必要，可以另外加入0.5-10％的上述稳定剂和0.1-10％的所述稀释剂。在单独使用所述化合物的杀寄生物药的情况中，更好的情况是在使用时通过将其用辅助性成分稀释来获得上述浓度。
在将本发明杀寄生物药混入饵料(饲料)的情况中，优选使用噻苯达唑化合物、其前体药物或其药物上可接受的盐，它是通过用诸如明胶、甲基纤维素、乙基纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素和羟丙基甲基纤维素这样的包衣剂包衣的有效量的杀寄生物药。
作为包衣方法可以提及的有已知的方法，诸如流化层包衣法、沃斯特包衣法和喷流混合分散包衣法等。通过使用包衣的上述化合物可以获得防止饵料味道下降和有效成分难以从饲喂饲料中泄漏出的优选的这类作用。
此外，混入了本发明杀寄生物药的饵料可以是含有用于饲喂河豚类的成分的任意一种。例如，可以提及的有鱼粉、乌贼鱼粉、磷虾鱼粉、饵料用酵母、沙丁肉馅和湿丸粒等，可以单独使用它们或如果需要可以将它们中的一种或多种进行混合。
就使用作为注射剂(肌内、皮下、静脉内和腹膜内)的本发明杀寄生物药而言，通过将上述化合物有效成分溶于适宜溶剂或悬浮于适宜溶剂且如果合适加入诸如加溶剂这样的添加剂、酸类、碱类或缓冲盐作为等渗剂、如果必要加入抗氧化剂和抗菌剂来制备所述的注射剂。然后将其进行灭菌且如果必要进行过滤，而此后装入瓶或其它容器。
作为所用的溶剂可以提及的有生理上可接受的溶剂，诸如水、醇类(例如乙醇、丁醇、苄醇和甘油)、烃类、丙二醇、聚乙二醇类、N-甲基吡咯烷酮及其混合物。此外，可以将上述化合物有效成分溶于生理上可接受的植物油或注射用合成油。
作为加溶剂可以提及的有那些促进噻苯达唑类化合物、其前体药物或其药物上可接受的盐溶于所述溶剂或防止形成沉淀的加溶剂，诸如聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙基化蓖麻油和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯类等。
作为抗菌剂可以提及的有苄醇、三氯乙醇、对羟基苯甲酸和正丁醇等。
就本发明杀寄生物药的给药量而言，上述化合物有效成分的给药量在1mg-2g/1kg体重/天、优选1mg-1g/1kg体重/天的范围。这里的给药期限适于在1-10天。此外，在溶于饲喂的水的杀寄生物药的情况中，将鱼体浸入它以便使鱼与杀寄生物药直接接触，将目标河豚类引入含有有效成分浓度为0.5-500ppm的饲喂水中10分钟-2天。就注射给药而言，一次给予0.1mg-200mg、优选0.5mg-100mg。这里给药期限适宜在1-3天。
通过下列实施例来更具体地解释本发明，但本发明并不限于这些实施例1试验组总计为三组，即经腹膜内给予100mg/kg芬苯达唑的组、经腹膜内给予200mg/kg非班太尔的组和经腹膜内给予含有3％失水山梨糖醇单月桂酸酯的生理盐水的对照组。通过每组使用3条虎河豚进行试验。
向100mg芬苯达唑或200mg非班太尔中加入150μl的聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯和生理盐水并使其悬浮而制成终体积为5mL，由此制备相应的注射溶液。
为了进行试验，使用平均体重为165g的感染了Heterobothriumokamotoi幼虫的9条虎河豚。
在以1mL/200g体重感染了Heterobothrium后第5天经腹膜内在虎河豚中给予所述注射溶液。在给药结束后，在第4天取出虎河豚并进行尸体解剖且切下其主动脉。在放血后取鳃样品、片下每片鳃瓣、浸入10％福尔马林溶液并使用搅拌器充分搅拌10分钟。
将经搅拌的鳃瓣散落在其下铺有浮游生物网的网上并在网上通过摩擦充分洗涤剩余的鳃瓣。然后收网并充分洗涤浮游生物网。当海水充分流出后，回收该浮游生物网上保留的海水。将该操作重复3次。
将回收的海水倾入培养皿并在立体显微镜下检验以便确定Heterobothrium的寄生数量。根据给予杀寄生物药的组中寄生物数量与对照组中寄生物数量之比而获得杀寄生物比例。结果如表1中所示。
表1


实施例2试验组总计为五组，即分别经腹膜内给予三氯苯达唑、氟苯达唑、阿苯达唑和奥苯达唑各100mg/kg的组和经腹膜内给予含有3％失水山梨糖醇单月桂酸酯的生理盐水的对照组。通过每组使用4条虎河豚进行试验。
向160mg三氯苯达唑、氟苯达唑、阿苯达唑或奥苯达唑中加入240μl的聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯和生理盐水并使其悬浮而制成终体积为8mL，由此制备相应的注射溶液。
为了进行试验，使用平均体重为211g的感染了Heterobothriumokamotoi幼虫的20条虎河豚。
在以1mL/200g体重感染了Heterobothrium后第4天经腹膜内在虎河豚中给予所述注射溶液。在给药结束后，在第4天取出虎河豚并进行尸体解剖且切下其主动脉。在放血后取鳃样品、片下每片鳃瓣、浸入10％福尔马林溶液并使用搅拌器充分搅拌10分钟。
将经搅拌的鳃瓣散落在其下铺有浮游生物网的网上并在网上通过摩擦充分洗涤剩余的鳃瓣。然后收网并充分洗涤浮游生物网。当海水充分流出后，回收该浮游生物网上保留的海水。将该操作重复3次。
将回收的海水倾入培养皿并在立体显微镜下检验以便确定寄生虫幼虫数量。通过在给予杀寄生物药组与对照组中比较寄生物的数量进行评价。根据给予杀寄生物药的组中寄生物数量与对照组中寄生物数量之比而获得杀寄生物比例。结果如表2中所示。
表2


实施例3试验组总计为两组，即溶解了500ppm的芬苯达唑的组和仅有海水的对照组。通过每组使用4条虎河豚进行试验。
向5g芬苯达唑中加入20ml的聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯且之后加入20ml海水制成用于浸渍虎河豚的混悬液。制备两种混悬液。
为了进行试验，使用平均体重为217g的感染了Heterobothriumokamotoi幼虫的8条虎河豚。
在含有10L海水的桶中加入所述药物混悬液以便制备含有芬苯达唑浓度为500ppm的溶液。为了进行试验，使每一桶中感染了Heterobothrium的2条虎河豚于通风环境下浸泡2小时，在2组中的每一组中均仅含有海水和含有海水和含有500ppm芬苯达唑的2组这两种情况。
此后，在1吨容量的池中将虎河豚饲喂一整天且然后进行尸体解剖。取鳃瓣样品、片下并直接在立体显微镜下检验以便确定Heterobothrium的寄生数量。根据浸渍组中寄生物数量与对照组中寄生物数量之比而获得杀寄生物比例。结果如表3中所示。
表3


实施例4试验组总计为三组，即经口服给予5天170mg/kg芬苯达唑的组、经口服给予2天200mg/kg非班太尔的组和不给予所述杀寄生物药的对照组。通过每组使用11条虎河豚进行试验。
将118g的杀寄生物药与2.4kg作为混合饵料的虎河豚用湿丸粒均匀混合以便制备对鱼给药的饵料。在对照组中，仅使用不含杀寄生物药的湿丸粒。为了进行试验，使用平均体重为396g的感染了Heterobothrium okamotoi幼虫的虎河豚并在每组1吨的池中饲喂。在注射Heterobothrium后第7天开始给药。
在开始给药后，在第12天和第13天随机取出测试各组中11条虎河豚中的8条并进行尸体解剖且取鳃瓣样品。将取样的鳃瓣片下并在立体显微镜下检验以便确定Heterobothrium的数量。根据给予杀寄生物药的组中寄生物数量与对照组中寄生物数量之比而获得杀寄生物比例。结果如表4中所示。
表4


工业实用性本发明提供了用于河豚的杀寄生物药。通过使用这种杀寄生物药可以有效地杀灭河豚上寄生物。此外，通过给河豚饲喂混有该杀寄生物药的饵料(饲料)可以预防或治疗寄生物感染。
权利要求
1.用于河豚寄生物的杀寄生物药，其特征在于它包括至少一种噻苯达唑类化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐作为有效成分。
2.权利要求
1所述的杀寄生物药，其特征在于它包括芬苯达唑、非班太尔、奥芬达唑、氟苯达唑、三氯苯达唑、阿苯达唑、奥苯达唑及其药物上可接受的盐中的至少一种作为有效成分。
3.权利要求
1所述的杀寄生物药，其特征在于所述的河豚是虎河豚(Fugu)且所述的寄生物是Heterobothrium okamotoi。
4.用于河豚寄生物的杀寄生物方法，其特征在于对河豚给予杀寄生物药，该杀寄生物药包括至少一种噻苯达唑类化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐作为有效成分。
5.权利要求
4所述的杀寄生物方法，其特征在于用于所述寄生物的杀寄生物药包括芬苯达唑、非班太尔、奥芬达唑、氟苯达唑、三氯苯达唑、阿苯达唑、奥苯达唑及其药物上可接受的盐中的至少一种作为有效成分。
6.权利要求
4所述的方法，其特征在于所述的河豚是虎河豚(Fugu)且所述的寄生物是Heterobothrium okamotoi。
7.权利要求
4所述的方法，其特征在于通过在饲喂的水中添加有效量的杀寄生物药以便使河豚接触该杀寄生物药来给予所述的杀寄生物药。
8.用于河豚的饵料(饲料)，其特征在于它含有有效量的至少一种选自由噻苯达唑类化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐组成的组的杀寄生物药。
9.权利要求
8所述的用于河豚的饵料，其特征在于所述寄生物的杀寄生物药包括至少一种选自芬苯达唑、非班太尔、奥芬达唑、氟苯达唑、三氯苯达唑、阿苯达唑、奥苯达唑及其药物上可接受的盐组成的组的药物。
10.用于河豚寄生物的杀寄生物注射剂，其特征在于它含有有效量的至少一种选自由噻苯达唑类化合物、其前体药物及其药物上可接受的盐组成的组的杀寄生物药。
11.权利要求
10所述的注射剂，其特征在于用于所述寄生物的杀寄生物药包括至少一种选自芬苯达唑、非班太尔、奥芬达唑、氟苯达唑、三氯苯达唑、阿苯达唑、奥苯达唑及其药物上可接受的盐组成的组的药物。
专利摘要
本发明提供了水产养殖领域中的杀寄生物药和鱼上的寄生物、特别是寄生在虎河豚(tiger globfish)上的heterobotuliums的杀寄生物方法。上述杀寄生物药和杀寄生物方法可发挥有利的杀寄生物作用，同时不会表现出对虎河豚(tiger globfish)、人和环境的有害作用。
文档编号A01N43/78GKCN1441638SQ01812673
公开日2003年9月10日 申请日期2001年7月13日
发明者森田淳, 石原守, 沟口秀城, 畠山英树 申请人:明治制果株式会社, 拜耳株式会社