专利名称：芦荟的组织培养繁殖方法以及所使用的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及芦荟的组织培养繁殖方法以及所使用的培养基。
芦荟(Aloe Liliaceae)又名油葱、龙角、狼牙掌，是百合科芦荟属常绿肉质多浆植物。科学研究证明它含有芦荟甙、蛋白质、20种氨基酸、多种维生素、大黄素、活性酶和微量元素100余种成分，能治疗肠、胃病、高血压、糖尿病、心脏病、肝炎、肾病、感冒、哮喘、便秘癌症，外用能治疗烫伤、烧伤、刀伤、扭伤、冻伤、脚癣、神经皮炎、痔疮、皲裂、湿疹、牙病、鼻炎、蚊虫叮咬、痱子等，在日化工业上又是“天然的化妆品，”具有防晒、护肤、养颜，除雀斑皱纹等作用，高级化妆品中80％含有芦荟的成分。近几年来，芦荟所具有的神奇药用价值及工业用途越来越引起人们的兴趣，被称为“植物保健美容医师”。
芦荟虽有强大的生命力，但自身不能繁殖，只能靠分株和扦插，因此如果采植物组织培养的方法来繁殖芦荟，进行工厂化育苗，将会大大地加快芦荟的生产周期，产生更大的效益。
植物组织培养技术是利用细胞的全能性(即每一个细胞都潜在着发育成新个体的能力)，采取植物体上的细胞团或一块组织，通过人工配制不同营养成分和激素调控，使这些组织形成成千上万个植株并且保存了母体内全部优良性状，这种方法可在短时间内获得大量试管苗，可在车间内流水作业进行，因而称为工厂化生产。由于生产幼苗是在试管内进行并摆放在有光照条件的恒温房间内，四季皆可进行，可在极少的面积内进行大规模生产，因而不占用土地，大大降低了成本。
然而，用组织培养方法繁殖芦荟难度较大，由于芦荟含酚类醌类物质多，很易氧化变褐，使培养基褐化从而影响分化率，故组培效果很难令人满意。针对现有技术的不足，本发明提供一种可以快速、大规模繁殖芦荟的组织培养方法。经计算机检索，未发现有关于芦荟组织培养繁殖方法的报导。
本发明提供芦荟，尤其是美国库拉索芦荟(A.barbadersis)和日本木立芦荟(A.arborescens)的组织培养方法，包括以下步骤1、诱导及分化利用胚状体组培途径进行诱导。将芦荟的分生组织，接种在诱导培养基上，该培养基为MS常规基本培养基(Marashige & Skoog培养基，以下简称MS)，其中加入了6-苄基嘌呤0.5-5毫克/升，最好为0.5-3毫克/升、6-糠基嘌呤(激动素)0.5-5毫克/升，最好为0.5-3毫升、2，4-二氯苯氧乙酸0.1-2毫克/升，最好为0.1-1毫克/升、萘乙酸0.1-2毫克/升，最好为0.1-1毫克/升，另外该培养基还含有维生素C1-2毫克以及蔗糖30-60克，最好为40-50克/升。培养约60-80天后，小苗长至常规生根程序所需高度时，进入下一步。
2、生根将第一步所得小苗齐根取下，转移至生根培养基中，该培养基与上述的诱导及分化培养基相同，只是没有加入维生素，但加入了活性炭0.1-0.5克，且加入了吲哚丁酸为0.1-0.5毫克/升，最好为0.1-0.2毫克/升。20-30天后，小苗基部开始出现白色短根并很快长出完整根系，即可按常规方法移栽长成正常芦荟植株。
本发明的特点在于通过胚状体途径进行诱导，效果很好，另外，在分化过程中普通组织培养使用的培养基蔗糖浓度为30克，我们大大提高了蔗糖浓度，并针对培养基褐化加入了维生素C。比较高的蔗糖浓度可为高频率分化提供更多的营养，并增加培养基对培养物的渗透压，从而使培养基的激素更好的作用于细胞内部；Vc的使用可以防止细胞在培养过程中褐化。在生根培养基中，可在上述范围内大大提高萘乙酸的含量，这样可更好地促进生根。
此发明的培养基有如下优点启动早、出苗快，同步性好，分化频率高，苗齐壮，生长良好。
实施例1.
1.取材取日本木立芦荟上端或吸芽。
2.材料消毒方法取下的材料在流水中冲洗5分钟后浸泡30秒，然后放入0.1％升汞溶液中消毒15分钟(在超净工作台上用无菌水冲洗3-4次后滤纸吸干水分)。
3.接种在超净工作台上，用常规无菌操作方法将灭菌后材料中心部分(生长点及附近组织)切成小拇指大小，沿原生长方向插入培养基中，该培养基为MS+6-BA 2mg/L+KT 2mg/L+NAA 0.1mg/L+2.4-D 0.1mg/L+Vc2mg/L+蔗糖45克/L，培养温度25℃±2℃，光照强度为1500-2000Lux。
4.分化20天后可见小芽萌发，长出小苗继代三次，约60天，小苗可长至3公分高。
5.生根，把小苗转至MS+IBA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30克，2克活性炭，约20天后，下端长出白色小根。
6.移栽当试管苗长至具完整的根，苗时，将其移栽于含有1/2草炭土和1/2蛭石的基质中。
移栽方法将试管口打开，在常温下敞开瓶口24小时，用长把镊子将苗从试管中小心取出，用自来水洗去沾在根上的琼脂培养基，将移栽基质放入花盆中，将小苗小心栽入盆中，浇透水后覆盖塑料薄膜24小时后打开塑料薄膜，换气2小时，以后每天延长打开塑料膜的时间，直至完全不覆盖为止，根据当地空气温度和湿度，适当延长或减少覆盖时间，等幼苗确实完全成活后，按常规量施一些钾肥和氮肥，保证苗壮、苗齐.，我们在本实验室及京郊顺义农业示范基地各移栽了100株日本木立芦荟小苗，成活株数分别81株和83株，成活率达80％以上。实施例二取美国库拉索芦荟，按实施例一相同方法进行培养和移栽，其结果也得到了健壮的芦荟苗。我们在本实验室及京顺义农业示范基地各移栽了100株美国库拉索芦荟小苗，成活株数分别为87株和84株，成活率均达80％以上。
权利要求
1.一种芦荟的组织培养繁殖方法，包括下述步骤a.将芦荟的分生组织接种在诱导培养基上，该诱导培养基为MS常规基本培养基，其中加入了6-苄基嘌呤0.5-5毫克/升、6-糠基嘌呤(激动素)0.5-5毫克/升、2，4-二氯苯氧乙酸0.1-2毫克/升、萘乙酸0.1-2毫克/升，另外该培养基还含有维生素C1-2毫克以及蔗糖30-60克；将分生组织在此培养基上培养60-80天；b.将上述步骤中所得小苗齐根剪除，转移至生根培养基中，该培养基与上述的诱导培养基相同，只是没有加入维生素，但加入了活性炭0.1-0.5克，且加入了吲哚丁酸为0.1-0.5毫克/升；20-30天后，小苗基部开始出现白色短根并长出完整根系，按常规方法移栽长成正常芦荟植株。
2.按照权利要求1所述的方法，其中，所述的芦荟是美国库拉索芦荟(A.barbadersis)或者日本木立芦荟(A.arborescens)。
3.按照权利要求1所述的方法，其中，所述的诱导培养基中6-苄基嘌呤为0.5-3毫克/升、6-糠基嘌呤(激动素)为0.5-3毫升、2，4-二氯苯氧乙酸为0.1-1毫克/升、萘乙酸为0.1-1毫克/升，蔗糖为40-50克/升；所述的生根培养基中吲哚丁酸为0.1-0.2毫克/升。
4.一种用于芦荟的组织培养繁殖方法的诱导培养基，该培养基为MS常规基本培养基，其中加入了6-苄基嘌呤0.5-5毫克/升、6-糠基嘌呤(激动素)0.5-5毫克/升、2，4-二氯苯氧乙酸0.1-2毫克/升、萘乙酸0.1-2毫克/升，另外该培养基还含有维生素C1-2毫克以及蔗糖30-60克。
5.按照权利要求4所述的培养基，其中，6-苄基嘌呤为0.5-3毫克/升、6-糠基嘌呤(激动素)为0.5-3毫升、2，4-二氯苯氧乙酸为0.1-1毫克/升、萘乙酸为0.1-1毫克/升，蔗糖为40-50克/升。
6.按照权利要求4所述的培养基，其中，所述的芦荟是美国库拉索芦荟(A.barbadersis)或者日本木立芦荟(A.arborescens)。
7.一种用于芦荟的组织培养繁殖方法的生根培养基，其组成与权利要求1所述的诱导培养基相同，只是没有加入维生素，但加入了活性炭0.1-0.5克，且加入了吲哚丁酸为0.1-0.5毫克/升。
8.按照权利要求7所述的生根培养基，其中，吲哚丁酸为0.1-0.2毫克/升。
9.按照权利要求7所述的生根培养基，其中，所述的芦荟是美国库拉索芦荟(A.barbadersis)或者日本木立芦荟(A.arborescens)。
全文摘要
本发明提供了一种芦荟的组织培养繁殖方法以及所使用的培养基,该方法包括:a.将芦荟的分生组织接种在诱导培养基上;将分生组织在此培养基上培养60—80天;b.将上述步骤中所得小苗齐根剪除,转移至生根培养基中;20—30天后,小苗基部开始出现白色短根并长出完整根系,按常规方法移栽长成正常芦荟植株。
文档编号A01H4/00GK1276423SQ9910792
公开日2000年12月13日 申请日期1999年6月2日 优先权日1999年6月2日
发明者刘敏, 薛淮, 张纯花, 陈宇红 申请人:中国科学院遗传研究所