专利名称：一种莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法
技术领域：
本发明一种莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法。属于蔬菜种苗生产技术领域，专用于莲藕种苗的脱毒快繁。
莲藕(Nelumbo nucifera Gaertn)是我国南方地区的传统特色水生蔬菜，具有很好的营养保健功能，也是我国主要的出口创汇蔬菜。因长期采用无性繁殖而使病毒积累。目前各产区均发生严重，因此而致的“僵藕”问题造成种性严重退化，根状茎(藕)变小，僵硬，品质变劣，产量严重下降，影响了其出口创汇及其在国内市场上的竞争力。努力改善球茎质量和产量，提高繁殖系数，解决目前生产上“僵藕”问题是当务之急。目前普遍采用每年均进行严格的大田选种的方法来改善或缓解上述问题的发生，但劳动强度大，技术要求高，效果不显著，不能真正彻底解决上述实践问题。
目前许多无性繁殖作物都使用茎尖生长点培养脱毒苗，并快繁脱毒种苗应用生产。但至今未见有莲藕茎尖脱毒快繁的研究报道。
本发明的目的是提供一种莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法，提出快速获得大量脱毒苗，试管苗健壮生长，诱导试管苗大量生根的最佳培养方案，适合工厂化育苗，适于移栽田间生长。
本发明所提供的一种莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法实施方案如下1.取莲藕茎尖为外植体，将茎尖外包叶鞘剥除后接种在附加0.01-8.0mg/l6-BA或ZRs和0-10mg/l NAA的MS或B5培养基中，培养60-80d后，取试管苗带节部位进行继代培养。
2.继代快繁将上述试管苗转接于附加0.01-6.4mg/l 6-BA，0-8.0mg/l NAA，30-100g/l糖的MS或B5培养基中，30-60d即可形成大量的试管苗。
3.生根培养将上述试管苗转接于附加0.01-4.0mg/l 6-BA，1.0-20.0mg/lNAA，30-150mg/l糖的MS或B5培养基中，20-50d后即可形成大量根系，培养苗移栽田间成活率达80％以上。
上述莲藕脱毒种苗快速繁殖方法中，pH5.6-7.2，光照强度1800-2500lx，光照时间10-14h/d，所用糖指蔗糖、白糖，以蔗糖为好。
本发明与现有技术相比，具有如下优点1.与目前采用的以成熟根茎(藕)作种相比，本发明利用莲藕茎尖为外植体，建立莲藕脱毒快繁体系，繁殖系数达8-20，可获大量脱毒苗，且不会发生变异，脱毒苗移栽成活率达80％以上，生长势旺，可大大减少用种量，便于种苗运输，从而解决了现有技术中的莲藕种苗繁殖系数低，用种量大、运输和生产成本高，不利于优良品种的快速大面积推广应用的问题。
2.与目前普遍采用的从生长期即开始一直到种藕采收持续进行的长时间选留种相比，本发明通过培育脱毒苗，劳动强度小，持续时间短，脱毒效果好。
3.本发明所提供的莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法适用于各种藕莲品种。
实施例11)脱毒试管苗的获得供试品种为宝应美人红(Nelumbo mucifera Gaertn)。取美人红茎尖为外植体，自来水冲洗后，用70％乙醇表面消毒1分钟，再用0.1％氯化汞溶液消毒15-20分种，无菌水冲洗4-5遍后，剥去外包叶鞘，切取茎尖后接种于三角瓶中，以MS为基本培养基，附加3.2mg/l 6-BA和4.0mg/l NAA培养70d后，可获带12芽的培养苗。
2)继代快繁将上述试管苗切割或带节个体接种于MS基本培养基中，附加2.0mg/l 6-BA，1.0mg/l NAA，80g/l蔗糖的MS培养基中，50d即可形成带14芽的培养苗。
3)生根培养苗将上述试管苗转接于附加1.0mg/l 6-BA，6.0mg/l NAA，50g/l蔗糖的MS培养基中，30d后形成大量根系，培养苗移栽田间成活率达88％。实施例21)脱毒试管苗的获得供试品种为“扬藕一号”(Nelumbo nucifera Gaertn)。取扬藕一号茎尖为外植体，自来水冲洗后，用70％乙醇表面消毒1分种，再用0.1％氯化汞溶液消毒15-20分种，无菌水冲洗4-5遍后，剥去外包叶鞘，切取茎尖后接种于三角瓶中，以B5为基本培养基，附加3.0mg/l ZRs和4.0mg/l NAA，培养80d后，可获得带14芽的培养苗。
2)继代快繁将上述试管苗切割成带节个体，接种于B5基本培养基中，附加8.0mg/l ZRs，2.0mg/l NAA，50g/l蔗糖的B5培养基中，50d即可形成带18芽的培养苗。
3)生根培养将上述试管苗转接于附加2.0mg/l ZRs，10mg/l NAA，90g/l蔗糖的B5培养基中，30d后即形成大量根系，培养苗移栽大田成活率92％。实施例3供试莲藕品种为宝应大紫红，取茎尖为外植体，按照以上方法，调整培养基成份后实施结果如下1)试管苗培养基MS+2.0mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA；继代增殖培养基MS+3.2mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA，50g/l蔗糖；40d后统计繁殖系数15；生根培养基MS+0.4mg/l 6-BA+8.0mg/l NAA，60g/l蔗糖，30d后生根，培养苗移栽大田成活率87％。
2)试管苗培养基MS+3.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；继代增殖培养基MS+5.0mg/l 6-BA+3mg/l NAA，60g/l白糖，40d后统计繁殖系数14；生根培养基MS+0.4mg/l 6-BA+8.0mg/l NAA80g/l白糖，30d后培养苗生根，培养苗移栽大田成活率90％。
3)试管苗培养基MS+6.0mg/l 6-BA+3.0mg/l NAA；继代增殖培养基MS+6.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后统计繁殖系数16；生根培养基MS+0.4mg/l 6-BA+18.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后培养苗生根，培养苗移栽大田成活率91％。
4)试管苗培养基B5+1.0mg/l ZRs+0.5mg/l NAA；继代增殖培养基B5+4.0mg/lZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后统计繁殖系数；生根培养基B5+0.02mg/l6-BA+12.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后试管苗生根，试管苗移栽大田成活率89％。
5)试管苗培养基B5+7.0mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；继代增殖培养基B5+4.0mg/lZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后统计繁殖系数13；生根培养基B5+0.5mg/l6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后试管苗生根，试管苗移栽大田成活率92％。
6)试管苗培养基B5+3.2mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；继代增殖培养基B5+6.0mg/lZRs+2.0mg/l NAA，50g/l蔗糖，40d后统计繁殖系数15；生根培养基B5+0.5mg/l6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后试管苗生根，试管苗移栽大田成活率93.5％。
7)试管苗培养基MS+6.0mg/l 6-BA+3.0mg/l NAA；继代增殖培养基B5+4.0mg/lZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后统计繁殖系数14；生根培养基MS+0.4mg/l6-BA+18.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后培养苗生根，培养苗移栽大田成活率89％。
8)试管苗培养基MS+2.0mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA；继代增殖培养基B5+4.0mg/lZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后统计繁殖系数数13；生根培养基MS+0.4mg/l6-BA+16.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后，培养苗生根，培养苗移栽大田成活率93％。
9)试管苗培养基B5+7.0mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；继代增殖培养基MS+5.0mg/l6-BA+30mg/l NAA，60g白糖，40d后统计繁殖系数17；生根培养基B5+0.02mg/l6-BA+12.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后试管苗生根，试管苗移栽大田成活率95％。
10)试管苗培养基B5+1.0mg/l ZRs+0.5mg/l NAA；继代增殖培养基MS+6.0mg/lZRs+3.0mg/l NAA，60g蔗糖，40d后统计繁殖系数13；生根培养基MS+0.4mg/l6-BA+8.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后培养苗生根，培养苗移栽大田成活率93％/11)试管苗培养基B5+1.0mg/l ZRs+0.5mg/l NAA；继代增殖培养基MS+3.0mg/lZRs+2.0mg/l NAA，60g/l蔗糖，40d后统计繁殖系数16；生根培养基MS+0.4mg/l6-BA+8.0mg/l NAA，80g/l白糖，30d后培养苗生根，培养苗移栽大田成活率90％。
12)试管苗培养基MS+2.0mg/l 6-BA+0.5mg/l NAA；继代增殖培养基B5+4.0mg/l ZRs+1.0mg/l NAA，60g/l白糖，40d后统计繁殖系数17；生根培养基MS+0.4mg/l 6-BA+12.0mg/l NAA，80g/l蔗糖，30d后培养苗生根，培养苗移栽大田成活率95％。
13)试管苗培养基MS+3.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；继代增殖培养基B5+6.0mg/l ZRs+2.0mg/l NAA，50g蔗糖，40d后统计繁殖系数17；生根培养基B5+0.5mg/l 6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后试管苗生根，试管苗移栽大田成活率95％。
14)试管苗培养基MS+3.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；继代增殖培养基B5+4.0mg/l ZRs+1.0mg/l NAA，40d后统计繁殖系数15；生根培养基B5+0.5mg/l6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后培养苗生根，培养苗移栽大田成活率94％。
15)试管苗培养基MS+3.0mg/l 6-BA+2.0mg/l NAA；继代增殖培养基MS+3.0mg/l ZRs+2.0mg/l NAA，60g/l蔗糖，40d后统计繁殖系数15；生根培养基B5+0.5mg/l 6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后试管苗生根，试管苗移栽大田成活率93％。
16)试管苗培养基B5+3.2mg/l ZRs+2.0mg/l NAA；继代增殖培养基B5+6.0mg/lZRs+2.0mg/l NAA，50g/l蔗糖，40d后统计繁殖系数16；生根培养基B5+0.5mg/l6-BA+10.0mg/l NAA，90g/l蔗糖，30d后试管苗生根，试管苗移栽大田成活率94％。
权利要求
1.一种莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法，其实施步骤如下1.1)取莲藕茎尖为外植体，将茎尖外包叶鞘剥除后接种在附加0.01-8.0mg/l6-BA或ZRs和0-10mg/l NAA的MS或B5培养基中，培养60-80d后，取试管苗带节部位进行继代培养。1.2)继代快繁将上述试管苗转接于附加0.01-6.4mg/l 6-BA，0-8.0mg/lNAA，30-100g/l糖的MS或B5培养基中，30-60d即可形成大量的试管苗。1.3)生根培养将上述试管苗转接于附加0.01-4.0mg/1 6-BA，1.0-20.0mg/lNAA，30-150mg/l糖的MS或B5培养基中，20-50d后即可形成大量根系，培养苗移栽田间成活率达80％以上。
2.根据权利要求1所述的一种莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法，其特征在于各阶段的培养条件为，pH5.6-7.2，光照强度1800-2500lx，光照时间10-14h/d。
3.根据权利要求1或2所述的一种莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法，其特征在于所用糖指的是蔗糖、白糖，以蔗糖为好。
全文摘要
本发明一种莲藕脱毒种苗快速繁殖的方法,属于蔬菜种苗生产技术领域。专用于莲藕脱毒种苗的快速繁殖。包括:取莲藕茎尖为外植体,接种在附加:0.01—8.0mg/l6－BA或ZRs和0—10mg/lNAA的MS或B
文档编号A01H4/00GK1258435SQ9912063
公开日2000年7月5日 申请日期1999年12月22日 优先权日1999年12月22日
发明者李良俊, 曹碚生, 何小弟, 赵有为, 丁存明, 江解增 申请人:扬州大学