一种柳树带芽茎皮的组织培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物技术领域的组织培养方法，特别是一种柳树带芽茎皮的组织培养方法。
【背景技术】
[0002]柳树组织培养方法主要是先产生愈伤组织到丛生芽再到生根这样一个过程，繁殖速度比较慢。本方法直接诱导丛成芽到生根，缩短了繁殖时间。组培中一般外植体选择为芽时，在诱导过程中愈伤产生的机率的比较多，本方法中采用带茎皮的芽作为外植体目的是提高丛成芽的诱导效率。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是为了克服柳树组培中的繁殖不足，提供繁殖速度快，繁殖效率高，成活率高的一种柳树带芽茎皮的组织培养方法。
[0004]本发明的目的通过以下技术方案来实现:
本发明涉及一种柳树带芽茎皮的组织培养方法，包括下列步骤:
(1)选枝培芽:选取生长健壮、无病虫害的I年生柳树带休眠芽枝条，剪成1cm带有侧芽的茎段，先用洗涤精水漂洗10-15min，再用自来水冲洗10_15min，浸泡在20%多菌灵溶液中15-20min后置于光照培养箱中进行水培，培养条件:温度24_26°C，光强2000Lx，水培5-6天，待水培枝条的休眠芽刚刚吐白萌动时为止；
(2)外植体选择:用刀片将含芽枝条带木质部切下约1cm，用洗涤精水浸泡20min，用自来水冲洗30min,置超净工作台无菌条件下,用70%的酒精消毒30s,用无菌水冲洗3次,用20%次氯酸钠消毒液消毒20分钟，用无菌水冲洗5次，将外植体表面用经过灭菌处理的滤纸吸干，用镊子挑去芽的外层表皮，用刀片切下与芽连接的茎皮，茎皮不带木质部；
(3)培育无菌试管苗:将带芽茎皮接种在诱导丛成芽培养基上，茎皮贴进培养基，芽保持向上，培养基配方:MS+0.4mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA+0.2mg/L KT+0.6mg/L PVP，置于普通日光灯光源的环境下，光照强度为1500-2000LX，每日光照时间为20小时，温度25 ± 2 °C，相对湿度在65%-70%，培养约20天，长成2-3cm的丛成芽的无菌试管苗；
(4)育苗生根:将丛生芽分离切成单株，对基部进行剪切，接入到增殖生根培养基中，增殖生根培养基配方:l/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.8mg/L IAA+0.5mg/L NAA+lg/L 活性炭，置于普通日光灯光源的环境下，光照强度为1500-2000LX，每日光照时间为20小时，温度25 ±2 V，相对湿度在65%-70%，培养约30天，长成6_8cm的试管生根苗；
(5)炼苗:将试管苗开瓶保存2天，取出试管苗洗净，移栽到含松树皮的基质中，其中松树皮，粒径7-15mm，保持温度24°C左右，相对湿度75%左右，培养两个星期。
[0005]本发明的优点在于:
缩短了柳树组培繁殖时间，提高了丛成芽的诱导率，利用带茎皮的休眠芽进行大量的繁殖，一可以有效防止木质部腐化对培育无菌试管苗时的无菌环境的影响，二提高丛成芽的诱导率，具有很强实用性；在育苗生根过程中，生根率可达到100%，从而有效地提高了成活率；本发明有效地提高了繁殖速度和繁殖率，使得繁殖的速度比其他方法快2-3倍，繁殖率高达3-5倍，成活率保证在99%以上。
[0006]【具体实施方式】:
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
[0007]一种柳树带芽茎皮的组织培养方法20小时，温度25±2°C，相对湿度在65%_70%，培养约30天，长成6-8cm的试管生根苗；
(5)炼苗:将试管苗开瓶保存2天，取出试管苗洗净，移栽到含松树皮的基质中，其中松树皮，粒径7-15mm，保持温度24°C左右，相对湿度75%左右，培养两个星期。
[0008]本发明的优点在于:
缩短了柳树组培繁殖时间，提高了丛成芽的诱导率，利用带茎皮的休眠芽进行大量的繁殖，一可以有效防止木质部腐化对培育无菌试管苗时的无菌环境的影响，二提高丛成芽的诱导率，具有很强实用性；在育苗生根过程中，生根率可达到100%，从而有效地提高了成活率；本发明有效地提高了繁殖速度和繁殖率，使得繁殖的速度比其他方法快2-3倍，繁殖率高达3-5倍，成活率保证在99%以上。
[0009]【具体实施方式】:
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
[0010]一种柳树带芽茎皮的组织培养方法，每日光照时间为20小时，温度25±2°C，相对湿度在65%-70%，培养约20天，长成2-3cm的丛成芽的无菌试管苗；
(4)育苗生根:将丛生芽分离切成单株，对基部进行剪切，接入到增殖生根培养基中，增殖生根培养基配方:l/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.8mg/L IAA+0.5mg/L NAA+lg/L 活性炭，置于普通日光灯光源的环境下，光照强度为1500-2000LX，每日光照时间为20小时，温度25±2°C，相对湿度在65%-70%，培养约30天，生根率可达100%，长成6_8cm的试管生根苗。
[0011](5)炼苗:将试管苗开瓶保存2天，取出试管苗洗净，移栽到含松树皮的基质中，其中松树皮，粒径7-15mm，保持温度24°C左右，相对湿度75%左右，培养两个星期可适应存活。成活率在99%以上。
【主权项】
1.一种柳树带芽茎皮的组织培养方法，其特征在于包括下列步骤: (1)选枝培芽:选取生长健壮、无病虫害的I年生柳树带休眠芽枝条，剪成1cm带有侧芽的茎段，先用洗涤精水漂洗10-15min，再用自来水冲洗10_15min，浸泡在20%多菌灵溶液中15-20min后置于光照培养箱中进行水培，培养条件:温度24_26°C，光强2000Lx，水培.5-6天，待水培枝条的休眠芽刚刚吐白萌动时为止； (2)外植体选择:用刀片将含芽枝条带木质部切下约1cm，用洗涤精水浸泡20min，用自来水冲洗30min,置超净工作台无菌条件下,用70%的酒精消毒30s,用无菌水冲洗3次,用20%次氯酸钠消毒液消毒20分钟，用无菌水冲洗5次，将外植体表面用经过灭菌处理的滤纸吸干，用镊子挑去芽的外层表皮，用刀片切下与芽连接的茎皮，茎皮不带木质部； (3)培育无菌试管苗:将带芽茎皮接种在诱导丛成芽培养基上，茎皮贴进培养基，芽保持向上，培养基配方:MS+0.4mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA+0.2mg/L KT+0.6mg/L PVP，置于普通日光灯光源的环境下，光照强度为1500-2000LX，每日光照时间为20小时，温度25 ± 2 °C，相对湿度在65%-70%，培养约20天，长成2-3cm的丛成芽的无菌试管苗； (4)育苗生根:将丛生芽分离切成单株，对基部进行剪切，接入到增殖生根培养基中，增殖生根培养基配方:l/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.8mg/L IAA+0.5mg/L NAA+lg/L 活性炭，置于普通日光灯光源的环境下，光照强度为1500-2000LX，每日光照时间为20小时，温度.25 ±2 V，相对湿度在65%-70%，培养约30天，长成6_8cm的试管生根苗； (5)炼苗:将试管苗开瓶保存2天后，取出试管苗洗净，移栽到含松树皮的基质中，其中松树皮，粒径7-15mm，保持温度24°C左右，相对湿度75%左右，培养两个星期。
【专利摘要】本发明公开了一种柳树带芽茎皮的组织培养方法，包括选枝培芽、外植体选择、培育无菌试管苗、育苗生根、炼苗等步骤。本发明具有很强的实用性，提高了柳树组培繁殖速度和繁殖率，使得繁殖的速度比其他方法快2-3倍，繁殖率高达3-5倍，成活率可保证在99％以上。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104604684
【申请号】CN201510045532
【发明人】李敏, 张健, 李玉娟
【申请人】江苏沿江地区农业科学研究所
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年1月29日