一种分散福寿螺卵块的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种分散卵块的方法，具体涉及一种分散福寿螺卵块的方法。
【背景技术】
[0002]福寿螺早在2000年就被世界自然保护联盟(IUCN)外来入侵物种专家委员会列为世界最具入侵性的100种物种之一，也是2003年国家环保部所列的我国首批16种恶性入侵生物之一。目前已经入侵到了世界上的许多国家和地区，在我国的长江以南地区也已广泛分布，危害我国的农业生产、水域生态安全的同时还威胁人体健康。所以近年来关于福寿螺的研宄日益重要，这其中福寿螺的种群动态、遗传变异、个体发育甚至风险评估等问题的研宄都离不开对螺卵的分离，但是传统的机械分离方法费时费力且很难完整、无损地将粘连的福寿螺卵粒分离开来。福寿螺产卵时会同时分泌胶质粘液，粘液干燥固化以后即形成胶膜，使卵粒紧密粘连形成卵块，从而对卵粒起到固定和保护作用，加之螺卵壳的主要成分是性质稳定的碳酸钙，因而福寿螺卵的抗逆性强。要完整、无损地分离福寿螺卵粒，关键是要破坏卵粒之间的粘膜，粘液的主要成分是水和糖蛋白。
[0003]众所周知，维持蛋白质一级结构的作用力主要是肽键和二硫键等共价键；而维持蛋白质的高级结构的作用力主要是氢键、疏水键、离子键和范德华力等非共价键。其中氢键是维持蛋白质二级结构结构如α -螺旋，β -折叠等构象的作用力。疏水键是多肽链上疏水性较强的氨基酸的非极性侧链避开水相粘附聚集在一起形成的孔穴，在维持蛋白质的三级结构中起着尤其重要的作用。盐键是由蛋白质中正负电荷的侧链基团通过静电吸引而形成的作用力。范德华力是分子间的吸引力。某些物理因素或化学因素可以破坏和改变维持蛋白质结构的作用力，使蛋白质分子的结构发生不可逆转的变化，从而导致蛋白质的理化性质和生理功能发生改变。通常物理因素有:加热、加压、搅拌、振荡、紫外线照射、超声波等，而化学因素有:强酸、强碱、重金属盐、三氯乙酸、乙醇、丙酮等。
[0004]因而寻找并利用合适的物理、化学因素以使蛋白质变性，尤其是固化的粘膜从卵壳表面脱离，破坏卵粒之间的粘液但是保留卵粒的完整性即可达到分离福寿螺卵粒的目的。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种分散福寿螺卵块的方法，该方法所用试剂简单且其成分稳定，采用该方法可将福寿螺卵块分散均匀，且分散后的卵粒可保留卵粒本身的形态结构完整和生物学功能特性。
[0006]为实现上述目的，本发明采取的技术方案为:一种分散福寿螺卵块的方法，包括以下步骤:
[0007](I)将待分散的福寿螺卵块置于容器中，加入分散剂摇匀，所加入分散剂与福寿螺卵块的体积比为2?8:1 ；
[0008](2)振荡或摇晃容器至福寿螺卵块完全分散为卵粒；
[0009](3)去除容器中的分散剂和碎肩，将分散得到的卵粒留于容器中；
[0010](4)向容器中加入清洗剂，清洗卵粒(清洗卵粒后去除清洗剂，将卵粒留于容器中)；
[0011](5)向容器中加入pH值为6.0?8.0的缓冲溶液，浸润卵粒至少3分钟，加入的缓冲溶液与步骤(I)所加入分散剂的体积比为I?3:1 ;
[0012](6)加入清洗剂清洗卵粒；
[0013](7)晾干或者烘干卵粒。
[0014]本发明将卵块与分散剂混合后，经振荡或摇晃使福寿螺卵块完全分散为卵粒；于分散得到的卵粒中加入缓冲溶液和清洗剂，目的在于调节卵粒表层的PH值至其为中性，并且步骤(6)中最后清洗过卵粒的清洗剂为中性即表明卵粒表层的pH值为中性。
[0015]本发明所述分散福寿螺卵块的方法中，步骤(I)中加入分散剂与福寿螺卵块的体积比为2?8:1，以便分散剂充分浸润卵块；步骤(2)中可优选于摇床上振荡或者手动摇晃容器，振荡或者摇晃容器可加速福寿螺卵块分散，但振荡或摇晃速度或动作幅度不宜过大，以免破坏卵粒；步骤(3)中的碎肩来源于少量破损的卵粒、卵粒之间固化的粘膜以及卵块上附着的其他杂质等。
[0016]本发明所用的分散剂、缓冲溶液和清洗剂可于常温常压下配制；其中，缓冲溶液配制过程中，可先分别配制母液(母液指的是高浓度的缓冲溶液组分)，然后根据需要按照一定的体积比分别取母液，混合，若需低浓度的缓冲溶液，按一定比例稀释母液混合物即可。本发明试剂的保存方法为:分散剂可在室温条件下于玻璃瓶(橡胶塞)或塑料瓶中密封保存；缓冲溶液的母液可于棕色瓶中密封保存；清洗剂可在室温条件下存储。
[0017]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述分散剂为不与福寿螺卵壳反应的强碱溶液，该溶液中强碱的质量百分比浓度为3?10%。分散剂应不与卵壳反应，而福寿螺卵壳的主要成分是性质稳定的碳酸钙，故作为分散剂的强碱溶液应不与碳酸钙CaCO3、磷酸钙Ca3 (PO4)2和氢氧化钙Ca(OH) 2等发生反应，以免破坏卵壳。
[0018]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述分散剂为K0H、Na0H或Ca (OH)2溶液。
[0019]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述缓冲溶液不与糖类化合物以及碳酸钙反应。本发明中，缓冲溶液应不易与糖类等化合物形成复盐、且不与碳酸钙反应而使卵壳分解，缓冲溶液优选能抑制某些酶的催化反应的溶液；最佳地，选择对卵壳具有一定的保护作用、且在不同温度状态下PH值较为稳定，成分简单的缓冲溶液。
[0020]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述缓冲溶液为Na2HPO4-NaH2PO4^l冲溶液。Na ,O4-NaH2PO^l冲溶液的配制方法优选为:先分别配制0.2mol/L Na2HPOdP0.2mol/L NaH2PO4 (0.2mol/L Na2HPOjP 0.2mol/L NaH2POj^为母液)，然后根据需要按照一定的体积比分别取0.2moI/LNa2HPOdP 0.2mol/L NaH 2P04，混合，若需低浓度的缓冲溶液，按一定比例稀释母液混合物即可。
[0021]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述清洗剂为水。更优选地，所述水为纯净水或者蒸馏水。
[0022]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述步骤(I)中，容器为圆柱形。更优选地，容器为离心管或试管。
[0023]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述步骤(3)中，通过吸取或过滤的方法去除容器中的分散剂和碎肩。
[0024]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述步骤(4)和步骤
(6)中，清洗剂与步骤⑴加入的分散剂的体积比为3?8:1。
[0025]作为本发明所述分散福寿螺卵块的方法的优选实施方式，所述步骤(7)中，于20?25°C晾干卵粒或者于20?30°C烘干卵粒，且烘干卵粒的温度与环境温度之差不大于5。。。
[0026]本发明的有益效果为:本发明提供了一种分散福寿螺卵块的新方法，该方法可将福寿螺卵块分散均匀，且分散福寿螺卵块时对福寿螺卵粒的保护效果较好，分散后的卵粒可保留卵粒本身的形态结构完整和生物学功能特性。本发明提供的方法工艺简单且适用性强，成功解决了福寿螺卵块难以高效且完整分散的难题。
[0027]此外，本发明提供的方法所用试剂简单，其成分稳定，且易于生产和配制、耐存储和运输。
【附图说明】
[0028]图1为本发明所述分散福寿螺卵块的方法中，步骤(2)所需最少分散时间与福寿螺卵发育孵化程度的对应关系图；
[0029]图2为采用本发明所述方法分散福寿螺卵块时，分散前后福寿螺卵的状态图。
【具体实施方式】
[0030]为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
[0031]实施例中，所用试剂及其配制方法如下:
[0032]分散剂:实施例优选以KOH、NaOH或Ca (OH) 2溶液为分散剂，其具体配制方法为:根据溶液中强碱的质量百分比浓度(3?10% )和待配制溶液量，计算所需强碱的质量，称取强碱固体，加入水，搅拌至其完全溶解，定容。例如:质量百分比浓度为5%的NaOH溶液的配制方法为:在室温条件下称取氢氧化钠50g，置于容量瓶中，加入水并搅拌至NaOH完全溶解，定容至1000ml，即得到质量浓度为5%的NaOH溶液。
[0033]缓冲溶液:实施例优选Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液，其配制方法为:首先配制浓度为0.2mol/L的母液，即配制0.2moI/LNa2HPO4溶液和0.2mol/LNaH 2P04溶液，根据所需缓冲溶液的PH值，分别量取0.2mol/L的Na2HPO4溶液和0.2mol/L的NaH 2P04溶液，混匀(若需低浓度的缓冲溶液，还需进行稀释)。例如:pH值为7的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液可通过混匀 61.0mL 0.2mo I/LNa2HPOjP 39.0mL 0.2mol/LNaH 2P04 而得到。
[0034]清洗剂:纯净水或者蒸馏水。
[0035]实施例1
[0036]本发明分散福寿螺卵块的方法的一种实施例，本实施例所述分散福寿螺卵块的方法包括以下步骤:
[0037](I)将待分散的福寿螺卵块置于容积为50mL的离心管中，