一种简易高效的牡丹试管苗生根方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种简易高效的牡丹试管苗生根方法，属于组织培养植物再生技术领 域。
【背景技术】
[0002] 牡丹（Paeonia sect. Moutan)是毛茛科苟药属花丼，是我国特有的名贵观赏、药用 和油用植物。长期以来，牡丹的繁殖以分株、嫁接为主，繁殖系数低、周期长，远远不能满足 商品苗规模化、规范化生产的需要，是阻碍牡丹成为大宗商品花丼的主要因素。
[0003] 植物组织培养具有微型繁殖周期短，繁殖系数高等优点，已是公认的植物快速繁 殖的有效途径。生根培养是组织培养的重要阶段，现有的牡丹组培苗生根方法为"三部生根 法"。"三步生根法"包括三个阶段，根据不同生根阶段的不同要求的更换三次培养基。第一 步，无激素培养基培养；第二步，培养基附加 IBA诱导根原基发生；第三步，无激素且附加活 性炭培养基促进根原基伸长。该方法虽然提高了生根率（50-60%;)，减轻了试管苗基部愈 伤组织的形成，但操作复杂，耗费大量人力物力，极大增加了生产成本。同时生根周期长（5 个月以上）不利于生产过程的成本控制。总之，现有技术没有使牡丹组培苗的生根问题得 到很好的解决，生根难仍然制约着牡丹组织培养技术的产业化应用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种简易高效的牡丹试管苗生根方法，通过在生根培养基中 添加维生素 B2以及对培养过程中光照条件的控制操作，以"一步生根法"实现了"三步生根 法"的生根效果，并缩短了生根周期。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] -种牡丹试管苗生根方法，通过在生根培养基中添加 IBA、维生素 B2,采取先暗培 养再光培养的生根方式，可实现牡丹试管苗高效"一步生根"的目的。
[0007] 在本发明所述的生根方法中，所述维生素 B2的添加量为1.0-5. Omg/L，优选 I. 〇-3. 0mg/L〇
[0008] 在本发明所述的生根方法中，所述生根培养基为以1/2MS培养基为基本培养 基，附加 IBA(吲哚丁酸）L 0-3. Omg/L，腐胺 L 0-5. Omg/L，维生素 B21. 0-5. Omg/L，蔗糖 30-40g/L，琼脂6. 0-7. 0g/L，PH = 5. 8-6. 0 ;优选培养基为：以1/2MS培养基为基本培养基， 其中CaCl2添加量加倍，且添加 IBA (吲哚丁酸）I. 0mg/L、腐胺I. 0mg/L、维生素 B21. 0mg/L、 鹿糖 30g/L，琼脂 6. 0g/L，PH = 5. 8 ;
[0009] 所述MS培养基为本领域技术人员所掌握的常用组织培养基；所述1/2MS培养基是 指以MS培养基为基本，其中无机盐添加量减半，且0&(：1 2添加量加倍的培养基。
[0010] 在本发明所述的生根方法中，所述暗培养条件为：先于2-4°C暗培养8天，再转入 18-20 °C 暗培养 22-23 天。
[0011] 在本发明所述的生根方法中，所述光培养条件为：每天光照12-14小时，光强 30-40 ymol πΓ2^1。其中光照的光源可采用荧光灯或LED灯。
[0012] 作为本发明优选的实施方式，所述的牡丹试管苗生根方法，具体包括如下步骤：
[0013] 1)培养基的配制：以1/2MS培养基为基本培养基，附加 IBA(吲哚丁 酸）L 0-3. Omg/L，腐胺 L 0-5. Omg/L，维生素 B21. 0-5. Omg/L，蔗糖 30-40g/L，琼脂 6. 0-7. Og/L，PH = 5. 8-6. 0。
[0014] 2)组织培养：先将试管苗置于2-4°C暗培养8天；然后转入18-20 °C暗培养 22-23天，以诱导根源基发生；最后将试管苗转入光培养20天，每天光照12-14小时，光强 30-40 μ mol m 2s 1O
[0015] 在实施本发明所述的生根方法之前，先切除牡丹试管苗上多余的叶片，仅保留展 开的1-2片叶片，再进行组织培养。
[0016] 本发明的有益效果：
[0017] 1)本发明通过生根培养基中添加维生素 B2以及对培养过程中光照条件的控制， 可一步法实现生根，中间不需更换培养基，大大简化了生根流程，有助于降低生产成本；
[0018] 2)本发明所述的"一步生根"使牡丹组培苗生根率达到70%，明显高于现有技术 "三步生根法"的生根率水平（50-60% )，生根率的提高有助于提高生产效率；
[0019] 3)采用本发明所述的"一步生根"法，在生根过程中，组培苗基部几乎不产生愈伤 组织，有利于组培苗的移栽成活；
[0020] 4)采用本发明所述的"一步生根"法，整个生根周期为50天，远远短于现有生根法 5-6个月的培养周期，极大缩短了培养周期，有助于控制生产成本。
【具体实施方式】
[0021] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0022] 实施例1
[0023] 1、材料
[0024] 选用继代培养三次得到的'正午'牡丹的组培苗。
[0025] 2、培养
[0026] 1)培养基的配制：以1/2MS (CaCl2加倍）培养基为基本培养基，添加 IBA (吲哚丁 酸）I. 0mg/L、腐胺 I. 0mg/L、维生素 B21. 0mg/L ;鹿糖 30g/L，琼脂 6. 0g/L，PH = 5. 8 ;
[0027] 2)组织培养：先切除牡丹试管苗上多余的叶片，仅保留1-2片展开的叶片，将试管 苗置于4°C暗培养8天，转入19 ± 1°C暗培养22天以诱导根源基发生，最后将试管苗在荧光 灯（TLD 36W/33Philips)光照下培养20天；其中，每天光照12小时，光强30μηιο1 nT2sd。
[0028] 实施例2-3
[0029] 采用实施例1的方法进行牡丹试管苗生根，区别在于，维生素 B2添加量分别为 3. 0mg/L、5. 0mg/L〇
[0030] 对比例1-3
[0031] 采用实施例1的方法进行牡丹试管苗生根，区别在于，维生素 B2添加量为10.0 mg/ L、15. 0mg/L、0mg/L〇
[0032] 实施例4
[0033] 采用实施例1的方法进行牡丹试管苗生根，区别在于，根形成阶段光照强度为 40 μ mol m 2S 1O
[0034] 对比例4-6
[0035] 采用实施例4的方法进行牡丹试管苗生根，区别在于，根形成阶段光照强度为 Oymol m 2S \20 μ mol m 2S \50 μ mol m 2S 1。
[0036] 对比例 7-10
[0037] 采用实施例1的方法进行牡丹试管苗生根，区别在于，根形成阶段光照强度为 20 μ mol m 2S \ 根诱导阶段光照强度为 20 μ mol m 2s 1JOymol m 2s 1JOymol m 2S \ 50 μ mol m 2S、
[0038] 对比实验结果
[0039] 将实施例1-5及对比例1-11的生根情况统计，包括生根率、生根条数、根长等指 标，并评价试管苗基部愈伤组织等级，结果如下表：
[0040] 表1试管苗生根结果统计
[0043] 注：表中数据为均值土标准差，字母表示不同处理间多重比较的结果，不同小写 字母表示P = 0. 05差异显著水平。
[0044] 愈伤等级：+愈伤组织极少；++基部膨大，有轻微愈伤组织。+++基部严重愈伤化， 根从愈伤组织发出。
[0045] 由表1可见，1)在根诱导暗培养、根形成光照强度30μπι〇1 Hf2iT1条件下，添加不 同量的维生素 B2处理的组培苗（实施例1-3、对比例1-2)的生根率、平均根数、平均根长皆 显著高于空白对照组（对比例3)。其中，维生素 B2添加量在I. 0-5. Omg/L范围内处理效果 最佳（实施例1-3)，生根率71. 0-74. 2 %，平均根数3. 1-3. 3,平均根长3. 5-3. 7cm，且试管 苗基部愈伤组织极少。
[0046] 2)培养基中添加维生素 B2,根诱导暗培养后，牡丹试管苗基部诱导得到根原基。 当根形成阶段最佳光照强度为30-40 μ mol Hf2iT1范围内，既可以保证较高的生根率，又可 避免刺激试管苗基部愈伤组织的形成。
[0047] 3)维生素 Β2的添加与根诱导阶段光照培养相结合可导致牡丹试管苗生根率为0。 因此，在培养基中添加维生素 Β2的同时，根诱导阶段应采用暗培养（光照强度为0)才有利 于牡丹试管苗生根。
[0048] 综上，本发明通过在生根培养基中添加 IBA以及适宜浓度维生素 Β2,采取先暗培 养（诱导根原基）再光培养（促进根原基伸长生长）的生根方式，可实现牡丹试管苗高效 "一步生根"的目的。
[0049] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种牡丹试管苗生根方法，其特征在于，在生根培养基中添加IBA和维生素B2,并采 取先暗培养再光培养的生根方式。2. 根据权利要求1所述的生根方法，其特征在于，所述维生素B2的添加量为 I. 〇-5. 0mg/L〇3. 根据权利要求2所述的生根方法，其特征在于，所述维生素B2的添加量为 I. 〇-3. 0mg/L〇4. 根据权利要求1所述的生根方法，其特征在于，所述暗培养条件为：先于2-4°C暗培 养8天，再转入18-20°C暗培养22-23天。5. 根据权利要求1所述的生根方法，其特征在于，所述光培养条件为：每天光照12-14 小时，光强 30-40 ymol m 2s 1O6. 根据权利要求5所述的生根方法，其特征在于，所述光照的光源采用荧光灯或LED 灯。7. 根据权利要求2、4或5任一所述的生根方法，其特征在于，所述生根培养基为 以1/2MS培养基为基本培养基，附加IBAL0-3.Omg/L，腐胺I. 0-5.Omg/L，维生素B2 I. 0-5.Omg/L，蔗糖 30-40g/L，琼脂 6. 0-7.Og/L，PH= 5. 8-6. 0。8. 根据权利要求1所述的生根方法，其特征在于，所述的牡丹试管苗生根方法，具体包 括如下步骤： 1) 培养基的配制：以1/2MS培养基为基本培养基，附加IBA(吲哚丁酸）I. 0-3.Omg/ L，腐胺I. 0-5. 0mg/L，维生素B2I. 0-5. 0mg/L，蔗糖 30-40g/L，琼脂 6. 0-7. 0g/L，PH= 5. 8~6. 0 ； 2) 组织培养：先将试管苗置于2-4°C暗培养8天；然后转入18-20°C暗培养22-23天， 以诱导根源基发生；最后将试管苗转入光培养20天，每天光照12-14小时，光强30-40 y mol m 2s 1O9. 根据权利要求8所述的生根方法，其特征在于，先切除牡丹试管苗上多余的叶片，仅 保留展开的1-2片叶片，再进行组织培养。
【专利摘要】本发明涉及一种牡丹试管苗生根方法，在生根培养基中添加IBA和维生素B2，并采取先暗培养再光培养的生根方式。采用本发明所述的生根方法一步实现生根，中间不需更换培养基，简化了生根流程，降低生产成本；生根率达到70％，有助于提高生产效率；在生根过程中，组培苗基部几乎不产生愈伤组织，有利于组培苗的移栽成活；整个生根周期为50天，极大缩短了培养周期，有助于控制生产成本。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN104920210
【申请号】CN201510256388
【发明人】成仿云, 文书生, 钟原
【申请人】北京林业大学
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年5月19日