一种野生灵芝的育种方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种野生灵芝的育种方法，属于食用菌遗传选育技术领域。
【背景技术】
[0002]野生灵芝，又称仙草、瑞草、灵芝草，属担子菌纲多孔菌科灵芝属，是一种以孢子进行有性繁殖、以木质素为主要碳源养分的药用真菌，自古以来就被我国人民当做中草药利用。灵芝，味甘、性平，归心、肺、肝、肾经，具有补气养血、养心安神、止咳平咳之功效，主治虚劳、咳嗽、气喘、失眠、消化不良、恶性肿瘤等病症。
[0003]灵芝的菌丝体、子实体和孢子都可入药，以紫灵芝药效为最好。紫芝主要含麦角甾醇、有机酸、氨基葡萄糖、多糖类、树脂、甘露醇和多糖醇等麦角留醇、树脂、脂肪酸、甘露醇和多糖类，又含生物碱、内酯、香豆精、水溶性蛋白质和多种酶类。
[0004]现代科学证明，灵芝具有滋补、健脑强壮、消炎利尿健胃、抗肿瘤、镇痛、祛痰、保肝解毒、调节血糖、控制血压、辅助肿瘤放化疗、保肝护肝、促进睡眠、提高人体免疫力等功能，还能治疗慢性支气管炎、心脑血管疾病、冠心病、神经衰弱、失眠、糖尿病、偏头痛、血细胞减少症、心肌炎，以及阳瘘遗精、频繁性感冒、消除皮肤黑斑、青春痘。
[0005]由于野生灵芝极少，远远不能满足人们需求。目前，有关野生灵芝育种方法的报道也相对较少。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是提供一种野生灵芝的育种方法，该育种方法能解决野生灵芝的培养扩大问题，且成品率高。
[0007]本发明解决上述技术问题的技术方案如下:一种野生灵芝的育种方法，包括如下工艺步骤:
[0008](I)野生灵芝采集:采集在海拔800?1900m高山生长的野生灵芝；
[0009](2)配制试管斜面培养基:
[0010]①配制母种培养基；
[0011]②制作试管斜面培养基:将步骤①所得母种培养基分装于试管中，高压灭菌30?50分钟，制成试管斜面培养基后，冷却；
[0012](3)组织分离:取步骤(I)所得野生灵芝的子实体，用水冲洗干净，切去菌柄，再消毒并洗净后吸干水分，将菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成3?5_的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于步骤(2)②得到的试管斜面培养基上，培养，上述操作均在无菌条件下进行，即得组织分离的母种；
[0013](4)菌种接种和培养:将步骤(3)所得组织分离的母种，在无菌状态下，接种于步骤(2)②得到的的试管斜面培养基上，继续培养，待试管上长满菌丝，即得二次母种，并于5?6°C保存；将二次母种在无菌条件下，转移到另一支步骤(2)②得到的试管斜面培养基中，即得栽培母种；
[0014](5)接种与培养:将步骤⑷所得栽培母种接种于原种培养基中，培养，即得原种；再将上述原种接种于栽培种培养基，培养，即得栽培种。
[0015]在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0016]进一步，步骤(I)所述野生灵芝为紫芝，形状为盖圆形或偏半圆形、直径为25?35cm、柄长为8?15cm、颜色为紫黑色。
[0017]进一步，步骤(2)所述母种培养基为以下三种培养基中的一种或几种:
[0018]a、糯米培养基:取糯米100g、葡萄糖25g、琼脂20g、水lOOOmL，将糯米加水，文火煮20?30分钟，用2层纱布过滤，取汁液，然后将上述汁液补充到100mL ；
[0019]b、马铃薯培养基:去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水lOOOmL，马铃薯切片，加水lOOOmL，文水煮沸15?20分钟，4层纱布过滤，取汁液，然后将上述汁液补充到100mL ；
[0020]C、综合培养基:去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B11mgJl^g 20g。
[0021]进一步，步骤(3)所述子实体的性状为出菇早、正常、健壮、朵形大、未成熟，所述消毒并洗净后吸干水分的具体方法为用体积分数为75%的酒精消毒，然后用无菌水冲洗，用无菌纱布吸干水分，所述培养的温度为25?30°C、环境为黑暗、培养的时间为10?15天。
[0022]进一步，步骤(4)所述继续培养的温度25?30°C、环境为黑暗、培养的时间为10?15天。
[0023]进一步，步骤(5)中原种培养基包括质量百分数为70%的玉米粒、24%的木肩、
5%的麦麸、I %的石膏，其制作方法为:取质量百分数为24 %的木肩，先预湿，取质量百分数为70%的玉米粒，用质量百分数为0.3%的多菌灵浸泡15?20小时，用清水过滤一次，再取质量百分数为5%的麦麸、I %的石膏，然后将上述木肩、玉米粒、麦麸、石膏拌匀后装袋，即得原种培养基袋，在< 1h内，置于灭菌锅中，升温至100°C，开始计时，灭菌20?25小时，然后待上述原种培养基袋完全冷却后，移至接种箱，将接种箱密封，消毒I?2小时后，备用。
[0024]进一步，步骤(5)所述栽培种培养基为以下两种培养基中的一种或两种的混合:
[0025]a、包括质量百分数为50%的玉米粒、42%的木肩、7%的麦麸、I %的石膏，其制作方法为:取质量百分数为42%的木肩，先预湿，取质量百分数为50%的玉米粒，用质量百分数为0.3%的多菌灵浸泡15?20小时，用清水过滤一次，再取质量百分数为7%的麦麸、I %的石膏，然后将上述木肩、玉米粒、麦麸、石膏拌匀后装袋，即得栽培种培养基菌袋，在
<1h内，置于灭菌锅中，升温至100°C，开始计时，灭菌20?25小时，然后待上述栽培种培养基菌袋完全冷却后，移至接种箱，将接种箱密封，消毒I?2小时后，备用；
[0026]b、包括质量百分数为70 %的玉米粒、24 %的木肩、5 %的麦麸、I %的石膏，其制作方法为:取质量百分数为24%的木肩，先预湿，取质量百分数为70%的玉米粒，用质量百分数为0.3%的多菌灵浸泡15?20小时，用清水过滤一次，再取质量百分数为5%的麦麸、I %的石膏，然后将上述木肩、玉米粒、麦麸、石膏拌匀后装袋，即得栽培种培养基菌袋，在
<1h内，置于灭菌锅中，升温至100°C，开始计时，灭菌20?25小时，然后待上述栽培种培养基菌袋完全冷却后，移至接种箱，将接种箱密封，消毒I?2小时后，备用。
[0027]进一步，步骤(5)所述培养的温度均为25?30°C，环境均为黑暗环境，培养的时间均至菌丝长满菌袋为止。
[0028]本发明的有益效果:
[0029](I)本发明的育种方法所分离出的野生灵芝母种朵形大、产量高、抗杂菌能力强。
[0030](2)本发明采用糯米培养基作为母种培养基，具有菌丝粗壮洁白、不易老化、菌丝生活力强等特点。
[0031](3)本发明的原种培养基和栽培种培养基均采用玉米粒培养基，得到的菌种菌丝洁白、旺盛、生长快，萌发率100%，具有生长快、产量高的特点，一般Im3的杂木菌筒6?7年产干品40?60kg。
[0032](4)本发明的育种方法能解决野生灵芝的培养扩大问题，且成品率高。
【具体实施方式】
[0033]以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
[0034]实施例1:
[0035](I)野生灵芝采集:采集在海拔800?1900m高山生长的野生灵芝，所述野生灵芝为紫芝，形状为盖圆形或偏半圆形、直径为25?35cm、柄长为8?15cm、颜色为紫黑色；
[0036](2)配制试管斜面培养基:
[0037]①配制母种培养基:选取儒米培养基:取儒米100g、葡萄糖25g、琼脂20g、水100mL,将糯米加水，文火煮20?30分钟，用2层纱布过滤，取汁液，然后将上述汁液补充到 100mL ；
[0038]②制作试管斜面培养基:将步骤①所得母种培养基分装于试管中，高压灭菌30?50分钟，制成试管斜面培养基后，冷却；
[0039](3)组织分离:取步骤(I)所得野生灵芝的子实体，所述子实体的性状为出菇早、正常、健壮、朵形大、未成熟，用水冲洗干净，切去菌柄，再用体积分数为75%的酒精消毒，然后用无菌水冲洗，用无菌纱布吸干水分，将菌盖切成两半，在菌盖和菌柄连接中央处割成3?5_的菌肉组织片，置于无菌培养皿内，再将组织片接种于步骤(2)②得到的试管斜面培养基上，培养，在温度为25?30°C的黑暗环境下培养10?15天，上述操作均在无菌条件下进行，即得组织分离的母种；
[0040](4)菌种接种和培养:将步骤(3)所得组织分离的母种，在无菌状态下，接种于步骤(2)②得到的的试管斜面培养基上，继续在温度为25?30°C的黑暗环境下培养10?15天，待试管上长满菌丝，即得二次母种，并于5?6°C保存；将二次母种在无菌条件下，转移到另一支步骤(2)②得到的试管斜面培养基中，即得栽培母种；
[0041](5)接种与培养:将步骤⑷所得栽培母种接种于原种培养基中，在温度为25?30°C的黑暗环境下培养至菌丝长满菌袋为止，即得原种；再将上述原种接种于栽培种培养基，在温度为25?30°C的黑暗环境下培养至菌丝长满菌袋为止，即得栽培种；
[0042]其中，原种培养基包括质量百分数为70%的玉米粒、24%的木肩、5%的麦麸、I %的石膏，其制作方法为:取质量百分数为24%的木肩，先预湿，取质量百分数为70%的玉米粒，用质量百分数为0.3%的多菌灵浸泡15?20小时，用清水过滤一次，再取质量百分数为5 %的麦麸、I %的石膏，然后将上述木肩、玉米粒、麦麸、石膏拌匀后装袋，即得原种培养基袋，在< 1h内，置于灭菌锅中，升温至100°C，开始计时，灭菌20?25小时，然后待上述原种培养基菌袋完全冷却后，移至接种箱，将接种箱密封，消毒I?2小时后，备用。
[0043]所述栽培种培养基包括质量百分数为50%的玉米粒、42%的木肩、7%的麦麸、I %的石膏，其制作方法为:取质量百分数为42%的木肩，先预湿，取质量百分数为50%的玉米粒，用质量百分数为0.3%的多菌灵浸泡15?20小时，用清水过滤一次，再取质量百分数为7 %的麦麸、I %的石膏，然后将上述木肩、玉米粒、麦麸、石膏拌匀后装袋，即得栽培种培养基袋，在< 1h内，置于灭菌锅中，升温至100°C，开始计时，灭菌20?25小时，然后待上述栽培种培养基袋完全冷却后，移至接种箱，将接种箱密封，消毒I?2小时后，备用。
[0044]实施例2:
[0045](I)野生灵芝采集:采集在海拔800?1900m高山生长的野生灵芝，所述野生灵芝为紫芝，形状为盖圆形或偏半圆形、直径为25?35cm、柄长为8?15cm、颜色为紫黑色；
[0046](2)配制试管斜面培养基:
[0047]①配制母种培养基:选取马铃薯培养基:去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水lOOOmL，马铃薯切片，加水lOOOmL，文水