一种香港四照花叶片培养与植株再生方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物组织培养快速繁殖的方法，具体为香港四照花叶片为外植体的组 织培养与植株再生方法。
【背景技术】
[0002] 香港四照花（Dendrobenthamia japonica (DC. ) Fang var. chinensis (Osborn.) Fang)，为山茱萸科四照花属的常绿乔木。树形圆整呈伞形，叶片光亮，树姿优美。花序苞片 洁白，果序球形红艳，是观姿、观叶、观花、观果兼而有之的优良观赏植物。是极具开发前景 的乡土彩叶树种。
[0003] 香港四照花现有繁殖技术主要采用种子播种育苗、也采用扦插、分蘖繁殖方法，但 大都存在以下缺点：种子繁殖苗木会产生变异，不能保持优良性状和苗木不整齐，影响苗木 质量；扦插、分蘖繁殖虽然属于无性繁殖能保持优良性状，但是繁殖效率低、速度慢，不利于 优良品种的大量繁殖和推广。现有技术中也有通过组织培养繁殖的方法，但是外植体取材 为茎段，以芽生芽的培养方式，繁殖系数仍然偏低。
【发明内容】
[0004] 为了克服现有技术的不足，本发明目的在于提供一种适合香港四照花叶片为外植 体的组织培养与植株再生的方法，不用茎段、直接用叶片为外植体，减少了外植体的使用量 也不伤害植株，同时进行愈伤组织诱导分化方式培养，产生的不定芽更多，繁殖系数更高， 可以大大提高离体培养的效率。
[0005] 本发明是通过以下技术方案来实现的：
[0006] 一种香港四照花叶片培养与植株再生方法，包括以下步骤：
[0007] (1)配制愈伤组织诱导培养基所用的1号基本培养基，以及增殖分化培养基和生 根培养基所用的2号基本培养基；备用；
[0008] (2)采用10年生香港四照花的当年生幼嫩叶片为外植体，经70%酒精消毒10s，再 用0. 1%的升汞溶液消毒灭菌10-12min，用无菌水冲洗3-5次；
[0009] (3)在超净工作台上，将消毒好的外植体接种在愈伤组织诱导培养基中，先将其置 于黑暗条件下培养7-12d后，再置于普通日光灯下、光照强度为1000-15001X下，每日光 照12h，温度250C、湿度为50% -65%，培养35d形成愈伤组织；
[0010] (4)将从（3)步中培养的愈伤组织，转接于分化增殖培养基中，进行增殖分化培 养，不断增殖分化，视繁殖生产规模需要达1000瓶进入下一步；
[0011] (5)将（4)步中增殖分化培养中生长粗壮试管幼苗，去掉基部愈伤组织和部分叶 片，留3-4片叶片，接种于生根培养基中生根培养9-lld ;
[0012] (6)将（5)步中生长的试管生根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭、黄心土、蛭石的 混合基质中，浇透水，保持温度25°C -28°C，相对湿度85 %以上，前5天遮光65 %，后逐渐见 光，14d后生根成活，生根率达95%以上，48d左右，全光照。
[0013] 每升所述愈伤组织诱导培养基包括如下组分：1号基本培养基，噻苯隆 (TDZ)0.0 5-0. lmg、6-苄基嘌呤（6-BA)0. 8-1. Omg、α -萘乙酸（NAA)O. 2-0. 4mg、2, 4-二氯 苯氧乙酸（2, 4-D)0. 5-1. Omg，pH值调至5· 8左右。
[0014] 所述1号基本培养基包括如下组分：如表1所示。
[0015] 表1每升1号基本培养基中含有物质种类和质量
[0018] 每升所述的增殖分化培养基包括如下组分：2号基本培养基，噻苯隆 (TDZ)O. 1-0. 2mg、6-苄基嘌呤（6-BA) 1.0-2. Omg、α-萘乙酸（NAA)O. 1-0. 2mg;pH 值调至 5. 8左右。
[0019] 每升所述的生根培养基包括如下组分：2号基本培养基，α -萘乙酸0. 4-0. 6mg、吲 哚乙酸（IAA)O. 3-0. 5mg和活性炭300-500mg，pH值调至5. 8左右。
[0020] 所述2号基本培养基包括如下组分：如表2所示。
[0021] 表2每升2号基本培养基中含有物质种类和质量
[0025] 所述基质中，泥炭：黄心土：蛭石的体积比是3 :2 :2。
[0026] 有益效果：本发明的香港四照花叶片培养与植株再生方法，节省外植体数量、只使 用叶片、不用茎段、不伤害植株，而且愈伤组织分化繁殖系数高，繁殖速度快，效率高。
【具体实施方式】
[0027] 实施例1
[0028] -种香港四照花叶片培养与植株再生方法所用的基本培养基配方如表3、表4。
[0029] 表3 1号基本培养基中含有物质种类和质量
[0035] 每升愈伤组织诱导培养基：1号基本培养基（表3)+TDZ (λ 05mg+BA 0· 8mg+NAA 0. 2mg+2, 4-D 0. 5mg ；
[0036] 每升增殖分化培养基：2号基本培养基（表4)+TDZ 0· lmg+BA 1.0 mg+NAAO. Img ;
[0037] 每升生根培养基：2号基本培养基（表4) +NAA 0· 4mg+IAA 0· 5mg+活性炭300mg。
[0038] 将上述培养基分别注入三角瓶中，经高温高压消毒（120_125°C，I. lKg/cm2)20分 钟，待用。
[0039] 下面是香港四照花叶片培养与植株再生方法，包括以下步骤：
[0040] 1、采用10年生香港四照花当年生嫩叶为外植体，经质量浓度70%酒精消毒10s， 再用质量浓度〇. 1 %的升汞溶液消毒10-12min，用无菌水冲洗3-5次；
[0041] 2、在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒的外植体接种叶片愈伤组织诱导 培养基中，先将其置于黑暗条件下培养7-12d后，再置于普通日光灯下、光照强度为 1000-15001x下，每日光照12h，温度25°C、湿度为50% -65%，培养35d形成愈伤组织；
[0042] 3、将从步骤2中愈伤组织，剪切，转接于增殖分化培养基中，进行增殖培养，不断 增殖，一个周期30d的繁殖倍数为6. 8,生长高度达4. 9cm，视繁殖生产需要达1000瓶时进 入下一步；
[0043] 4、将步骤3中的分化培养的粗壮试管幼苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3-4 片叶片，接种于生根培养基中生根培养9-lld ;
[0044] 5、将步骤4中