一种杀线虫的菌剂的制作方法
【技术领域】
[0001]发明涉及一种杀线虫的菌剂，属微生物农药技术领域。
【背景技术】
[0002]植物寄生线虫是一种世界范围内普遍发生的植物病害，仅根结线虫已知种类达70多种，为害3000多种植物，每年造成的损失巨大。据联合国粮农组织统计，每年因线虫造成损失全球高达1000亿美元。在我国，线虫主要危害烟草、花卉、蔬菜、棉花、大豆、花生、三七、西洋参等主要经济作物，成为发展这些作物的重要限制因子。据全国烟草病虫害防治信息中心不完全统计，仅云南省发病面积就达2.7万公倾，直接经济损失1.2亿元，间接损失更为严重。黑龙江省仅大豆胞囊线虫每年造成的损失达8亿元之多。松材线虫被称为无烟森林火灾，在江苏、浙江、广东、山东、安徽、湖北、上海、台湾、香港等部份地区严重发生，有向全国漫延的趋势。在山东、广东、海南和云南等蔬菜主产区，蔬菜根结线虫呈上升趋势。更严重的是由于根结线虫侵染后，造成作物伤口，致使作物根部病害严重发生。云南的三七根腐就是典型例子。化学杀线虫剂自上个世纪40年代发现以来，在线虫防治中发挥了重要作用。但是随着科学技术的进步，发现许多化学杀线虫剂均有副作用，造成环境污染，危害人体健康。相继有不少被禁用或即将禁用。特别是植物寄生线虫发生于作物根部，由于土壤环境的特殊性，必须大剂量施用才能保证其防效。而大剂量化学农药对地下水污染非常严重。因此，研究开发高效低毒低残留杀线虫剂已经是农业可持续发展中的重要课题。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是通过对一株具有产生酶而分解线虫功能的嗜麦芽窄食单胞菌研究，开发生物杀线虫剂。
[0004]本发明筛选到的一株对植物寄生线虫具有很好杀虫功能的嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)G6,本发明 stenotrophomonas maltiphilia G6 菌株形态特征为:微弯或直杆状，典型的细胞长2 μ m，宽0.5μπι。菌落灰色到绿色，圆形，隆起，湿润有光泽。G6菌株的杀线虫机制理为先形成粗蛋白分解线虫体壁，通过体壁侵入线虫体内，最终将线虫全部分解。在整个杀线虫过程中，伴随着产生蛋白酶、几丁质酶对线虫的作用。
[0005]本发明是这样实现的:扩大培养G6菌株，提取杀线虫有效成分，进行杀线虫药效试验，确定其对线虫的作用。
[0006]G6培养方法(以下为重量百分比):
1、试管种培养
培养基配方为:卜3%酵母浸膏、0.5 — 2%蛋白胨、卜4%葡萄糖、1.8 — 2%琼脂、余下为水，ρΗ7。将G6菌丝体接种到培养基上，30。C下培养2天，获得试管种。
[0007]2、液体扩大培养:
液体培养基配方为:1-3%酵母粉、10-20%大豆饼粉、0.5-2%鱼粉、1-4%葡萄糖，余下为水，pH7。将试管种接种到250ml三角瓶液体培养基中，每瓶装100ml，于30。C下摇床培养培养时间2天，转速为220rpm。
[0008]3、试验方法:
取试验用药剂20091于1.5ml离心管中，加入活松材线虫150条，离心管平放，置于250C下，松材线虫分别于24小时、48小时、60小时检查计算线虫的死亡率。并在光学显微镜下观察，观察线虫体壁变化情况。
[0009]鉴定死亡的方法为:在处理离心管中加入1-5滴NaCl溶液，2分钟后观察，死虫僵直，活虫则卷曲或扭动。
[0010]结果表明，从G6菌株液体发酵产物中提取的试验用药剂对松材线虫具有较好的杀虫效果，线虫的平均死亡率在95%以上。
【具体实施方式】
[0011]下面是本发明的实施例，但本发明的内容并不局限于此。
[0012]将stenotrophomonas maltophilia G6菌体接种到试管琼脂培养基斜面上，培养基配方为:2%酵母浸膏、1.5%蛋白胨、2%葡萄糖、1.8%琼脂、余下为水，pH为7。将G6菌丝体接种到培养基上，30°C下培养2天，获得试管种。
[0013]将试管种接种到250ml三角瓶液体培养基中(每瓶装100ml)，液体培养基配方为:
2%酵母粉、15%大豆饼粉、1%鱼粉、3%葡萄糖、余下为水，pH7。于30°C下摇床培养培养时间2天，转速为220rpm。即得杀线虫药液。
[0014]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种杀线虫的菌剂，其特征在于该菌剂由如下步骤得到: a.生产菌株为嗜麦芽窄食单胞菌G6， b.试管种培养:将G6菌丝体接种到配方为卜3%酵母浸膏、0.5-2%蛋白胨、1-4%葡萄糖、1.8-2%琼脂、余下为水，pH7的培养基上，30°C下培养2天，获得试管种； c.液体培养:将试管种接种到250ml三角瓶液体培养基中，每瓶装100ml，于30°C下摇床培养培养时间2天，转速为220 rpm;液体培养基配为:1_3%酵母粉、10-20%大豆饼粉、0.5-2%鱼粉、1-4%葡萄糖，余下为水，pH7 ;即得杀线虫药液。2.根据权利要求1所述的菌剂，其特征在于该菌剂对松材线虫具有毒杀作用，可应用于植物寄生线虫的生物防治。
【专利摘要】本发明涉及一种杀线虫的菌剂，其特征在于该菌剂由如下步骤得到：生产菌株为嗜麦芽窄食单胞菌G6，将G6菌丝体接种到配方为卜3％酵母浸膏、0．5-2％蛋白胨、l-4％葡萄糖、1．8-2％琼脂、余下为水，pH7的培养基上，30℃下培养2天，获得试管种；将试管种接种到250ml三角瓶液体培养基中，每瓶装lOOml，于30℃下摇床培养时间2天，转速为220rpm；液体培养基配为：1-3％酵母粉、10-20％大豆饼粉、0．5-2％鱼粉、1-4％葡萄糖，余下为水，pH7；即得杀线虫药液。该菌剂对松材线虫具有较好的杀虫效果，线虫的平均死亡率在95％以上。
【IPC分类】A01P5/00, A01N63/00
【公开号】CN105309480
【申请号】CN201410324464
【发明人】马宗刚
【申请人】马宗刚
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年7月9日