一种松茸的液体菌种繁育方法和大田仿生栽培方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及松茸的人工培育技术领域，具体而言，涉及一种松茸的液体菌种繁育方法和大田仿生栽培方法。
【背景技术】
[0002]松茸，学名松口蘑，别名松蕈、合菌、台菌，隶属担子菌亚门、口蘑科，是松栎等树木外生的菌根真菌，具有独特的浓郁香味，是世界上珍稀名贵的天然药用菌，被誉为〃菌中之王〃。但目前仅限于野生菌，产量非常有限，难以满足人们对松茸的需求，所以大家一直在寻求一种人工繁殖松鸾的方法。
[0003]现有的人工繁殖松茸的方法不仅操作复杂、生产周期长，而且感染率高。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种松茸的液体菌种繁育方法，所述的松茸的液体菌种繁育方法具有生产周期短、方法简单、感染率低等优点。
[0005]本发明的另一个目的在于提供一种松茸的大田仿生栽培方法，该方法具有成本低、操作简单、便于推广等优点。
[0006]为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案:
[0007]—种松茸的液体菌种繁育方法，包括以下步骤:
[0008]母种制作步骤:在无菌的环境下，分别取松茸的菌柄、菌帽和菌脚的组织单独放入第一培养基进行培养，然后将培养后的菌柄、菌帽和菌脚在24-26°C的环境下混合培养，菌柄、菌帽和菌脚的菌丝相融合后得到母种；
[0009]其中，按重量份计，第一培养基由以下组分制成:180-220份土豆、180-220份木肩、1600-2400份水、18-22份葡萄糖、1.8_2.2份硫酸镁、2.8-3.2份磷酸二氢钾、4.8-5.2份蛋白胨、0.25-1份维生素BI和18-22份琼脂；
[0010]液体菌种制作步骤:无菌环境下在第二培养液中接入母种，进行摇床培养，摇床培养的温度为24-26 °C，摇床的旋转频率为350-500rpm，摇床培养3-6天后得到第一液体菌种；
[0011]其中，按重量份计，第二培养基由以下组分制成:180-220份土豆、180-220份木肩、1600-2400份水、18-22份葡萄糖、1.8_2.2份硫酸镁、2.8-3.2份磷酸二氢钾、4.8-5.2份蛋白胨和0.25-1份维生素BI。
[0012]本发明还提供了一种松茸的大田仿生栽培方法，包括以下步骤:
[0013]菌包制作步骤:将木肩、麦麸、石膏、石灰、糖、玉米粉和豆柏混合得到混合物;混合物中，各个组分的重量百分数分别为:木肩66-74%，麦麸18-22%，石膏0.8-1.2%，石灰0.8-1.2 %，糖0.8-1.2%，玉米粉4-6 %，豆柏1.8_2.2 % ;然后将混合物装袋并进行加热灭菌处理，再将第一液体菌种在无菌环境下接种到混合物，然后在25-30°C条件下培养28-35天得到菌包；
[0014]脱袋栽培步骤:先在栽培区挖掘出土坑，然后将菌包脱袋后摆放在土坑内，再向土坑内填土并且覆盖菌包，然后向栽培区浇水。
[0015]与现有技术相比，本发明的有益效果为:
[0016](I)这种松茸的液体菌种繁育方法，生产周期短，固体菌种从母种到栽培种三级制种的时间为3个月，而制备液体菌种不到20天，培养固体原种或栽培种的时间需90天，而培养一批液体菌种只需3-7天。制作液体菌种大大缩短了制种时间，能够及时地供应生产需要。
[0017](2)液体菌种制作简单，固体菌种的制作要经过从母种到原种再到栽培种三级制种过程，而且要更换培养基，手续繁杂。液体菌种的制作，只要同一种培养基，培养出来的菌种，既可作为母种使用，也可作为原种、栽培种的使用，减少了培养基的更换和培养环境的改变。
[0018](3)接种简便，液体菌种可以用注射、拌料等多种形式接种，简便、快速、均匀、适于机械化、自动化大规模生产使用。
[0019](4)发育快，每一个液体菌种的菌丝球都是一个生长中心，由于菌丝球数量多、分布均匀，接种后菌丝可迅速发育，短时间内完成营养生长期，避免污染的发生和危险。可提前发现菌球的生长情况至栽培种的菌丝缠绕强弱。
[0020](5)这种松茸的液体菌种繁育方法比固体菌种感染率低50%左右。
[0021](6)大田仿生栽培方法降低了投资成本，操作容易便捷，更适用于推广，带动老百姓发家致富。
【附图说明】
[0022]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0023]图1为大棚内栽培区的分布示意图。
【具体实施方式】
[0024]下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0025]—种松茸的液体菌种繁育方法，包括以下步骤:
[0026]母种制作步骤:将180-220份土豆和180-220份木肩分别用800-1200份水煮20-40min，然后过滤并将两种滤液混合得到第一混合水。为了方便过滤，可以先将180-220份土豆用800-1200份水煮20-40min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将180-220份木肩用布袋装好，再将用布袋装好的木肩放入800-1200份水中煮20-40min后取出并得到木肩水，然后将土豆水和木肩水混合后得到第一混合水。
[0027]然后将18-22份葡萄糖、1.8-2.2份硫酸镁、2.8-3.2份磷酸二氢钾、4.8-5.2份蛋白胨、0.25-1份维生素BI和18-22份琼脂加入第一混合水中并煮15-25min得到第一培养液。其中维生素BI和片酵母片均呈片状，0.5片指的是半片，1.5片指的是I片加半片，依次类推。此夕卜，为了使第一培养液内的各个营养成分混合更均匀，最好将第一培养液搅拌均匀后使用。
[0028]再将第一培养液分装在灭菌容器内进行加热灭菌处理，然后将灭菌容器静置并使第一培养液冷却凝固3-5天得到第一培养基;在无菌的环境下，分别取松茸的菌柄、菌帽和菌脚的组织单独放入第一培养基，然后将培养后的菌柄、菌帽和菌脚在24-26 °C的环境下混合培养，菌柄、菌帽和菌脚的菌丝相融合后得到母种。
[0029]作为优选，母种制作步骤中，松茸由新鲜松茸处理后得到，处理过程为:采摘生长完好、强壮的新鲜松茸，然后将新鲜松茸放入密闭容器内或者用胶布包裹后在18-22°C条件下放置3-5天。
[0030]作为优选，母种制作步骤中的加热灭菌处理的条件为:在压力为0.1-0.2Pa且温度为110-130°(^的条件下灭菌40-50111；[11。
[0031]作为优选，灭菌容器为试管，加热灭菌处理后将试管倾斜并与水平面保持15°的夹角进行冷却。试管容量小，每只试管装的第一培养液量少，便于将第一培养液内的病菌彻底杀灭。使试管保持倾斜状态是本领域的常用手段，可以增大第一培养液的液面面积，有利于在单个试管内获得更多的母种。进一步，还可以观察母种的生长情况，挑选其中长势好的母种进行提纯复壮。
[0032]液体菌种制作步骤:将180-220份土豆和180-220份木肩分别用800-1200份水煮20-40min，然后过滤并将两种滤液混合得到第二混合水;与第一混合水的制作过程类似，为了方便过滤，可以先将180-220份土豆用800-1200份水煮20-40min后过滤去除土豆得到土豆水，然后将180-220份木肩用布袋装好，再将用布袋装好的木肩放入800-1200份水中煮20-40min后取出并得到木肩水，然后将土豆水和木肩水混合后得到第二混合水。
[0033]再将18-22份葡萄糖，1.8-2.2份硫酸镁，2.8_3.2份磷酸二氢钾，4.8_5.2份蛋白胨，0.25-1份维生素BI加入第二混合水中并煮15-25min得到第二培养液;将第二培养液分装到摇瓶并进行加热灭菌处理，待第二培养液冷却至24-26°C，然后在无菌环境下接入母种，再将摇瓶放置于摇床，在24-26 0C下摇动培养3-6天后得到第一液体菌种。
[0034]现有的固体菌种的制作要经过从母种到原种再到栽培种三级制种过程，而且要更换培养基，手续繁杂。而本发明的液体菌种的制作，只要同一种培养基，培养出来的菌种，即克作为母种使用，也可作为原种，栽培的使用，减少了培养基的更换和培养环境的改变。
[0035]液体菌种发育快，每一个液体菌种的菌丝球都是一个生长中心，由于菌丝球数量多、分布均匀、接种后菌丝可迅速发育，短时间内完成营养生长期，避免污染的发生和危害。可提前发现菌球的生长情况至栽培种的菌丝缠绕强弱。此外，本发明的各种培养液总采用了最佳的碳氮比，采用本发明的松茸的液体菌种繁育方法，菌丝球龄一致、