一种暗褐网柄牛肝菌菌腔虫瘿的合成方法
【专利摘要】本发明涉及菌类仿生栽培领域，具体而言，涉及一种暗褐网柄牛肝菌菌腔虫瘿的合成方法。该菌腔虫瘿的合成方法，包括下列步骤：1)暗褐网柄牛肝菌固体原种，由云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物研究中心牛肝菌课题提供；2)从野外宿主树根上菌腔虫瘿里面挑取粉蚧，用南瓜饲养扩繁；3)培养宿主树的无菌苗；4)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种暗褐网柄牛肝菌固体菌种和粉蚧，保持基质湿润，维持温度为28℃±2℃，培养得到暗褐网柄牛肝菌菌腔虫瘿。本发明提供的合成方法可有效建立暗褐网柄牛肝菌与宿主树的共生关系，能够成功合成菌腔虫瘿，菌腔感染率高达83％?90％。
【专利说明】
一种暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法
技术领域
[0001]本发明涉及菌类仿生栽培领域，具体而言，涉及一种暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法。
【背景技术】
[0002]暗褐网柄牛肝菌Phlebopusportentosus(Berk.&Broome)Boedijn，又名巨型牛肝菌，俗名“黑牛肝菌”，属于牛肝菌目小牛肝菌科网脉柄牛肝菌属。分布于斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利亚，新西兰等地区，国内主要分布在云南，广西和海南也都有分布。其子实体硕大，肉肥厚，柄粗壮，营养丰富，富含蛋白质和钾、钙、镁、铁、锌等多种人体所需的矿质元素，其价格是普通食用菌的几倍、十几倍，具有很高的经济价值。
[0003]暗褐网柄牛肝菌幼嫩子实体肉质细腻，美味可口而深受广大消费者的喜爱，是老百姓餐桌上的美味佳肴。目前市场上供应的暗褐网柄牛肝菌以野生为主，十分抢手，随着大量无序的商业采收，以及天然生态环境的变化，资源逐渐枯竭，供不应求。仿生栽培是增加资源、保护生态环境，维持可持续发展的重要方向。而牛肝菌菌腔虫癭是暗褐网柄牛肝仿生栽培的第一步，但目前很难人工合成牛肝菌菌腔虫癭，或者人工合成时菌腔虫癭的感染率很低。
【发明内容】
[0004]本发明目的在于解决上述现有技术不足问题，提供一种暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法。其合成方法可以有效的建立暗褐网柄牛肝菌与宿主树的共生关系，能够成功的合成暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭，虫癭的感染率为83%-90%。
[0005]本发明暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法是通过下列具体步骤完成:
[0006](I)获得暗褐网柄牛肝菌的固体原种；
[0007](2)从野外宿主树根上的菌腔虫癭里面挑取粉蚧，用南瓜饲养扩繁；
[0008](3)培养寄主树的无菌苗；
[0009](4)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种暗褐网柄牛肝菌固体原种和粉蚧，保持基质湿润，维持温度为28°C±2°C，培养得到暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭。
[0010]步骤(2)中的粉蚁是大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)，选用咖啡树为宿主树种;采用从宿主树咖啡树根上的菌腔虫癭里面挑取，带回室内镜检后接种到南瓜上饲养扩繁，南瓜用75 %的酒精消毒表面，晾干后方可接粉蚧；
[0011]步骤(3)所述培养寄主树的无菌苗是将咖啡种子培养至萌发芽点，移栽入无菌苗培养基中培养，培养后得到无菌苗；
[0012]所述步骤(I)中的暗褐网柄牛肝菌固体原种，由云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物研究中心牛肝菌课题提供，其菌种编号:13013，培菌室培养时间为40-60d。
[0013]在步骤(2)中，大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)的培养温度为25°C ±2°C，南瓜表面用75%的酒精消毒，晾干后方可饲养粉蚧。
[0014]在步骤(3)中，无菌苗培养基包括下列组分，按体积计:草炭30-50份，蛭石20-40份，牛粪10-30份，珍珠岩40-60份，菜园土60-80份。
[0015]在步骤(3)中，无菌苗培养基的pH值4.0-6.0。
[0016]在步骤(4)中，接种的暗褐网柄牛肝菌固体菌种掰成3cm3-5cm3大小的块，每株树菌种的接种量为50g-100g。
[0017]在步骤(4)中，大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)的接种量为50-100头/株。
[0018]步骤(4)中，基质湿度保持在40%-60%，维持温度为28°C ±2°C。
[0019]在接种暗褐网柄牛肝菌固体菌种和大洋臀纹粉蚧之前，要对基质进行121°C灭菌I小时的灭菌处理，冷却后方可接种。
[0020]本发明通过单独培养暗褐网柄牛肝菌固体原种、大洋臀纹粉蚧和单独培养寄主树的无菌苗，并通过选择在无菌苗长出侧根时接入暗褐网柄牛肝菌固体原种和大洋臀纹粉蚧，保持基质湿润，维持温度为28°C±2°C，培养得到暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭。
[0021]本发明合成方法可以有效的建立暗褐网柄牛肝菌与宿主树的共生关系，能够成功的合成暗褐网柄牛肝菌的菌腔虫癭，菌腔虫癭的感染率为83%_90%。
【具体实施方式】
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[0022]本发明暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，包括下列步骤:
[0023](I)暗褐网柄牛肝菌固体原种，由云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物研究中心牛肝菌课题提供；
[0024](2)大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)，从咖啡树根上的菌腔虫癭里面挑取，用南瓜饲养扩繁。
[0025](3)将咖啡种子培养至萌发芽点，移栽入无菌苗培养基中培养得到无菌苗；
[0026](4)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种暗褐网柄牛肝菌固体原种和粉蚧，保持基质湿润，维持温度为28°C±2°C，培养得到暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭。
[0027]本发明选用的暗褐网柄牛肝菌的固体原种，由云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物研究中心牛肝菌课题提供，其菌种质量得到保证，合成菌腔虫癭的几率高。
[0028]本发明选择的大洋臀纹粉蚁(Planococcusminor)是从咖啡树根上的菌腔虫癭里面挑取，带回室内镜检后接种到南瓜上，南瓜用75%的酒精消毒表面，晾干后方可接粉蚧。
[0029]本发明选用咖啡树为宿主树种，通过单独培养暗褐网柄牛肝菌固体原种、大洋臀纹粉蚧和单独培养宿主树的无菌苗，并通过选择在无菌苗长出侧根时再接入暗褐网柄牛肝菌固体原种和大洋臀纹粉蚧，保持基质湿润，维持温度为28°C±2°C，培养得到暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭。
[0030]步骤(I)中选用的暗褐网柄牛肝菌固体原种的菌种编号为13013，培菌室培养时间为40-60d，接种时菌种掰成3cm3-5cm3大小的块，接种量为50g-100g/株树。
[0031]在饲养大洋臀纹粉蚧的过程中，发明人通过试验得出采用南瓜饲养大洋臀纹粉蚧的温度应控制在25°C±2°C，高于或低于这个温度范围均不利于粉蚧的繁殖。
[0032]本发明无菌苗培养基包括下列组分，按体积计:草炭30-50份，蛭石20-40份，牛粪10-30份，珍珠岩40-60份，菜园土60-80份。
[0033]发明人通过试验中发现，无菌苗培养基pH值为4.0-6.0，暗褐网柄牛肝菌的菌丝生长速度较快，而当pH值小于4.0或大于6.0时，菌丝的生长均受到抑制，所以在合成过程前需要及时调整无菌苗培养基的pH值为4.0-6.0。
[0034]为了消除无菌苗基质中的杂菌对合成菌腔虫癭的影响，在接种暗褐网柄牛肝菌固体原种和大洋臀纹粉蚧之前，要对无菌苗基质进行121°C灭菌I小时的灭菌处理，冷却后方可接种。
[0035]实施例1
[0036](I)暗褐网柄牛肝菌固体原种由云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物研究中心牛肝菌课题提供，菌种编号为:13013，培菌室培养时间为40d，接种前检查菌种质量，菌丝长满菌袋，黄褐色，浓密，粗壮，生长均匀，色泽一直，无干缩，紧贴菌袋的菌种为合格菌种；
[0037](2)在组培瓶底部平铺一层滤纸，用自来水浸湿，然后用包头纸系好，121°C灭菌30min，冷却待用；
[0038](3)精选咖啡成熟种子，用自来水冲洗30min，之后用3%H2O2浸泡5min，同时不断摇动，然后用无菌水冲洗三次。放入灭菌的组培瓶中，每瓶放入4粒成熟种子，置于27°C±3°C的环境中黑暗培养，每天检查2次，剔除污染杂菌的种子，至种子萌发出芽点；
[0039](4)大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)。从咖啡树根上的菌腔虫癭里面挑取，用南瓜饲养扩繁，培养温度为25°C±2°C，南瓜表面用75%的酒精消毒，晾干后方可饲养粉蚧。
[0040](5)按下列比例称取配置无菌苗培养基。按体积计，无菌苗培养基的各组分:草炭30kg，輕石20kg，牛奠I Okg，珍珠岩40kg，菜园土 60kg ；先将草炭、輕石、珍珠岩预湿，再加入菜园土、牛粪后混匀，调节pH值4.0，在121°C灭菌lh，冷却后待用；
[0041](6)直口玻璃瓶、石头用高锰酸钾消毒，在直口玻璃瓶中底部放3-4粒石块，而后将培养基装入直口玻璃瓶中，把萌发的种子移栽入玻璃瓶中，置于温室大棚中，保持基质湿润，在28 °C ± 2°C的温度下培养无菌苗；
[0042](7)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种牛肝菌固体原种，菌种量为50g/株，同时接入蚧虫，接虫量为50-100头/株，接种后瓶壁用黑色塑料布包裹玻璃瓶，尽量保持瓶内暗光条件，保持基质湿润，在温度为28°C±2°C的环境中培养3个月；
[0043]本实施例中菌腔虫癭的感染率为85.17%。
[0044]实施例2
[0045](I)暗褐网柄牛肝菌固体原种的编号为:13013，菌种由云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物研究中心牛肝菌课题提供，培菌室培养时间为50d，接种前检查菌种质量，菌丝长满菌袋，黄褐色，浓密，粗壮，生长均匀，色泽一直，无干缩，紧贴菌袋的菌种为合格菌种；
[0046](2)在组培瓶底部平铺一层滤纸，用自来水浸湿，然后用包头纸系好，121°C灭菌30min，冷却待用；
[0047](3)精选咖啡成熟种子，用自来水冲洗30min，之后用3%H2O2浸泡5min，同时不断摇动，然后用无菌水冲洗三次。放入灭菌的组培瓶中，每瓶放入4粒成熟种子，置于27°C±3°C的环境中黑暗培养，每天检查2次，剔除污染杂菌的种子，至种子萌发出芽点；
[0048](4)大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)，从咖啡树根上的菌腔虫癭里面挑取，用南瓜饲养扩繁，培养温度为25°C±2°C，南瓜表面用75%的酒精消毒，晾干后方可饲养粉蚧。
[0049](5)按下列比例称取配置无菌苗培养基，按体积计无菌苗培养基各组分:草炭50kg，輕石30kg，牛奠30kg，珍珠岩50kg，菜园土 70kg ；将草炭、輕石、珍珠岩预湿，再加入菜园土、牛粪混匀，调节pH值5.0，121°C灭菌Ih，冷却后待用；
[0050](6)直口玻璃瓶、石头用高锰酸钾消毒，在直口玻璃瓶中底部放3-4粒石块，而后将培养基装入直口玻璃瓶中，把萌发的种子移栽入玻璃瓶中，置于温室大棚中，保持基质湿润，在28 °C ± 2°C的温度下培养无菌苗；
[0051](7)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种牛肝菌固体原种，菌种量为50g/株，同时接入蚧虫，接虫量为50-100头/株，接种后瓶壁用黑色塑料布包裹玻璃瓶，尽量保持瓶内暗光条件，保持基质湿润，在温度为28°C±2°C的环境中培养3个月；
[0052]实例2菌腔虫癭的感染率为89.37%。
[0053]实施例3
[0054](I)暗褐网柄牛肝菌固体原种的编号为:13013，培菌室培养时间为60d，接种前检查菌种质量，菌丝长满菌袋，黄褐色，浓密，粗壮，生长均匀，色泽一直，无干缩，紧贴菌袋的菌种为合格菌种；
[0055](2)在组培瓶底部平铺一层滤纸，用自来水浸湿，然后用包头纸系好，121°C灭菌30min，冷却待用；
[0056](3)精选咖啡成熟种子，用自来水冲洗30min，之后用3%H2O2浸泡5min，同时不断摇动，然后用无菌水冲洗三次。放入灭菌的组培瓶中，每瓶放入4粒种子，置于27°C±3°C的环境中黑暗培养，每天检查2次，剔除污染杂菌的种子，至种子萌发出芽点；
[0057](4)大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)，从咖啡树根上的菌腔虫癭里面挑取，用南瓜饲养扩繁，培养温度为25°C±2°C，南瓜表面用75%的酒精消毒，晾干后方可饲养粉蚧。
[0058](5)按下列比例称取配置无菌苗培养基。按体积计，无菌苗培养基各组分:草炭40kg，輕石40kg，牛奠20kg，珍珠岩60kg，菜园土 80kg;将草炭、輕石、珍珠岩预湿，加入菜园土、牛粪混匀，调节pH值6.0，121°C灭菌I h，冷却后待用；
[0059](6)直口玻璃瓶、石头用高锰酸钾消毒，在直口玻璃瓶中底部放3-4粒石块，而后将培养基装入直口玻璃瓶中，把萌发的种子移栽入玻璃瓶中，置于温室大棚中，保持基质湿润，在28 °C ± 2°C的温度下培养无菌苗；
[0060](7)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种牛肝菌菌种，菌种量为50g/株，同时接入粉蚧，接虫量为50-100头/株，接种后瓶壁用黑色塑料布包裹玻璃瓶，尽量保持瓶内暗光条件，保持基质湿润，在温度为28°C±2°C的环境中培养3个月；
[0061 ]实例3菌腔虫癭的感染率为83.26%。
【主权项】
1.一种暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，步骤如下 (1)获得暗褐网柄牛肝菌的固体原种； (2)从野外宿主树根上菌腔虫癭里面挑取粉蚧，用南瓜饲养扩繁； (3)培养寄主树的无菌苗； (4)待无菌苗长出侧根时，在其根系接种暗褐网柄牛肝菌固体原种和粉蚧，保持基质湿润，维持温度为28°C±2°C，培养得到暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭。2.根据权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，步骤(2)中所述的粉蚁是大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)，选用咖啡树为宿主树种;采用从宿主树咖啡树根上的菌腔虫癭里面挑取，带回室内镜检后接种到南瓜上饲养扩繁，南瓜用75%的酒精消毒表面，晾干后方可接粉蚧； 步骤(3)所述培养寄主树的无菌苗是将咖啡种子培养至萌发出芽点，移栽入无菌苗培养基中培养，培养后得到无菌苗。3.根据权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)中的暗褐网柄牛肝菌固体原种，由云南省热带作物科学研究所植物保护与微生物研究中心牛肝菌课题提供，其菌种编号:13013，培菌室培养时间为40-60d。4.根据权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，在步骤(2)中，大洋臀纹粉蚁(Planococcusminor)的培养温度为25°C ±2°C，南瓜表面用75%的酒精消毒，晾干后方可饲养粉蚧。5.根据权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，在步骤(3)中，无菌苗培养基包括下列组分，按体积计:草炭30-50份，蛭石20-40份，牛粪10-30份，珍珠岩40-60份，菜园土60-80份。6.根据权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，在步骤(3)中，无菌苗培养基的pH值4.0-6.0。7.根据权利要求3所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，在步骤(4)中，接种的暗褐网柄牛肝菌固体原种掰成3cm3-5cm3大小的块，每株树菌种的接种量为50g_100go8.根据权利要求1或4所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，在步骤(4)中，大洋臀纹粉蚁(Planococcus minor)的接种量为50-100头/株。9.根据权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，在步骤(4)中，基质湿度保持在40%-60%,维持温度为28°C ±2°C。10.根据权利要求1所述的暗褐网柄牛肝菌菌腔虫癭的合成方法，其特征在于，在接种暗褐网柄牛肝菌固体原种和大洋臀纹粉蚧之前，对基质进行121°C灭菌I小时的灭菌处理，冷却后方可接种。
【文档编号】A01G1/04GK106069187SQ201610431882
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月17日
【发明人】刘静, 曹旸, 张春霞, 何明霞, 王文兵, 许欣景, 高锋, 方艺伟
【申请人】云南省热带作物科学研究所