富硒高虫草素含量的虫草子实体的培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种富硒高虫草素含量的虫草子实体的培养方法，依次包括菌种的活化、液体菌种的制备、制备大米培养基、灭菌、接种、菌丝体的培养、转色、子实体的培养、采收等步骤。本发明培养出的虫草子实体不仅硒元素的含量高，还能使培养出的虫草药用价值更高且安全性好。
【专利说明】
富砸高虫草素含量的虫草子实体的培养方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种虫草子实体的培养方法。
【背景技术】
[0002]现有技术中对虫草子实体的培养，一般采用亚砸酸钠为砸源，具有一定的不安全性。
[0003]白海参又名白玉参，是极为稀有的海参，是由刺参遗传变异而来，在自然界极为罕见。据检验其体内砸的含量高达630微克/100克，是普通海参的10倍，并且90%以上为有机砸。目前砸普遍被科学家称为人体微量元素中的“防癌之王”，因此白海参对肿瘤的生长有很好的抑制作用，能有效抗癌。另外，海参中钙、锌等各种元素含量也很高，蛋白质、各种氨基酸含量丰富，尤其是可以补充人体内各种必需氨基酸。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种培养出的虫草子实体不仅砸元素的含量高，还能使培养出的虫草药用价值更高且安全性好的富砸高虫草素含量的虫草子实体的培养方法。
[0005]本发明的技术解决方案是:
一种富砸高虫草素含量的虫草子实体的培养方法，其特征是:依次包括下列步骤:
(1)菌种的活化:将蛹虫草菌种接在以下组分的液体培养基中进行活化和优化:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，琼脂粉15-20克，加水至1000毫升;将上述液体培养基在121°C，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22°C黑暗条件下培养5-10天，菌落再转接到斜面培养基上，22°C黑暗条件下培养5-10天，所得菌种即所需虫草菌种；
(2)液体菌种的制备:
首先按下列配方配制营养液A:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3_5克，加水至1000毫升;将营养液A分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121°C，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入经步骤(I)活化的虫草菌种，再在130转/分钟，22 °C的摇床中震荡培养5-9天；
(3)制备大米培养基:
先按以下配方配置营养液B:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；
大米培养基的制备:用350毫升的广口培养瓶，每瓶按下列比例装入培养料:大米35-40克，营养液B 40?50毫升，用带通气孔的盖子盖紧或用聚乙烯塑料膜扎紧培养瓶瓶口 ；
(4)灭菌:将培养瓶放在121°C，0.1MPa条件下，灭菌30分钟；
(5)接种:在无菌条件下，每个培养瓶接入5毫升液体菌种，封口； (6)菌丝体的培养:将接种后的培养瓶移入黑暗条件下培养;开始温度保持16°C>18°C4?6天;待培养瓶表面长满白色菌丝后将温度升至20°C>24 °C条件下再培养4?6天，待菌丝吃透培养基后，将培养瓶移到光下培养；
(7 )转色:保持室内温度20 0C-22 °C,湿度60%?70%，光照强度800勒克斯，光照时间每天12?14小时；将培养瓶培养3?5天后可见菌丝由白色逐渐转为橘黄色，之后将夜间温度降至10°C~15°C保持昼夜有5?10°C的温差，待菌丝表面布满米粒大小的突起时，停止昼夜温差转为恒温培养；
(8)子实体的培养:保持室内温度200C-220C，湿度60%?70%，光照强度600?800勒克斯，光照时间每天12?14小时，待子实体长至1」3?4厘米后将室内湿度提高到75%?85%，温度和光照时间不变；
(9)采收:待子实体长到6?8厘米时，用镊子将子实体从培养瓶中夹出，放在通风干燥处自然风干或65°C烘箱中烘干，将干的子实体装在密闭的塑料袋中避光保存。
[0006]步骤(I)中菌落转接到斜面培养基上时，是选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落转接到斜面培养基上。
[0007]本发明用白海参作为砸源，避免了加亚砸酸钠的不安全性，培养出的虫草子实体不仅砸元素的含量高，还能使海参中丰富的蛋白质、氨基酸及其它微量元素作为虫草的营养源，使培养出的虫草药用价值更高。子实体粗壮，色泽鲜艳，砸含量可达到117微克/克，虫草素含量可达到4.3毫克/克。
[0008]下面结合实施例对本发明作进一步说明。
【具体实施方式】
[0009]—种富砸高虫草素含量的虫草子实体的培养方法，其特征是:依次包括下列步骤:
(1)菌种的活化:将蛹虫草菌种接在以下组分的液体培养基中进行活化和优化:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，琼脂粉15-20克，加水至1000毫升;将上述液体培养基在121°C，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22°C黑暗条件下培养5-10天，菌落再转接到斜面培养基上，22°C黑暗条件下培养5-10天，所得菌种即所需虫草菌种；
(2)液体菌种的制备:
首先按下列配方配制营养液A:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3_5克，加水至1000毫升;将营养液A分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121°C，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入经步骤(I)活化的虫草菌种，再在130转/分钟，22 °C的摇床中震荡培养5-9天;待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用。
[0010](3)制备大米培养基:
先按以下配方配置营养液B:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；
大米培养基的制备:用350毫升的广口培养瓶，每瓶按下列比例装入培养料:大米35-40克，营养液B 40~50毫升，用带通气孔的盖子盖紧或用聚乙烯塑料膜扎紧培养瓶瓶口 ； (4)灭菌:将培养瓶放在121°C，0.1MPa条件下，灭菌30分钟；
(5)接种:在无菌条件下，每个培养瓶接入5毫升液体菌种，封口；
(6)菌丝体的培养:将接种后的培养瓶移入黑暗条件下培养;开始温度保持16°C>18°C4?6天;待培养瓶表面长满白色菌丝后将温度升至20°C>24 °C条件下再培养4?6天，待菌丝吃透培养基后，将培养瓶移到光下培养；
(7 )转色:保持室内温度20 0C-22 °C,湿度60%?70%，光照强度800勒克斯，光照时间每天12?14小时；将培养瓶培养3?5天后可见菌丝由白色逐渐转为橘黄色，之后将夜间温度降至10°C~15°C保持昼夜有5?10°C的温差，待菌丝表面布满米粒大小的突起时，停止昼夜温差转为恒温培养；
(8)子实体的培养:保持室内温度200C-220C，湿度60%?70%，光照强度600?800勒克斯，光照时间每天12?14小时，待子实体长至1」3?4厘米后将室内湿度提高到75%?85%，温度和光照时间不变；
(9)采收:待子实体长到6?8厘米时，用镊子将子实体从培养瓶中夹出，放在通风干燥处自然风干或65°C烘箱中烘干，将干的子实体装在密闭的塑料袋中避光保存。
[0011 ]步骤(I)中菌落转接到斜面培养基上时，是选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落转接到斜面培养基上。
[0012]白海参研磨液的制作:将新鲜的白海参去除内脏或泡发好的白海参放入料理机中打成匀浆。
[0013]富砸的白海参虽然珍贵稀有，但目前已经能够规模化人工养殖，生产成本并不高。
【主权项】
1.一种富砸高虫草素含量的虫草子实体的培养方法，其特征是:依次包括下列步骤: (1)菌种的活化:将蛹虫草菌种接在以下组分的液体培养基中进行活化和优化:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，琼脂粉15-20克，加水至1000毫升;将上述液体培养基在121°C，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22°C黑暗条件下培养5-10天，菌落再转接到斜面培养基上，22°C黑暗条件下培养5-10天，所得菌种即所需虫草菌种； (2)液体菌种的制备: 首先按下列配方配制营养液A:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3_5克，加水至1000毫升;将营养液A分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121°C，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入经步骤(I)活化的虫草菌种，再在130转/分钟，22 °C的摇床中震荡培养5-9天； (3)制备大米培养基: 先按以下配方配置营养液B:葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素BI 0.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升； 大米培养基的制备:用350毫升的广口培养瓶，每瓶按下列比例装入培养料:大米35-40克，营养液B 40~50毫升，用带通气孔的盖子盖紧或用聚乙烯塑料膜扎紧培养瓶瓶口 ； (4)灭菌:将培养瓶放在121°C，0.1MPa条件下，灭菌30分钟； (5 )接种:在无菌条件下，每个培养瓶接入5毫升液体菌种，封口； (6)菌丝体的培养:将接种后的培养瓶移入黑暗条件下培养;开始温度保持16°C>18°C4?6天;待培养瓶表面长满白色菌丝后将温度升至20°C>24 °C条件下再培养4?6天，待菌丝吃透培养基后，将培养瓶移到光下培养； (7)转色:保持室内温度200C-220C，湿度60%?70%，光照强度800勒克斯，光照时间每天12?14小时；将培养瓶培养3?5天后可见菌丝由白色逐渐转为橘黄色，之后将夜间温度降至10°C~15°C保持昼夜有5?10°C的温差，待菌丝表面布满米粒大小的突起时，停止昼夜温差转为恒温培养； (8)子实体的培养:保持室内温度20°022°C，湿度60%?70%，光照强度600?800勒克斯，光照时间每天12?14小时，待子实体长至1」3?4厘米后将室内湿度提高到75%?85%，温度和光照时间不变； (9)采收:待子实体长到6?8厘米时，用镊子将子实体从培养瓶中夹出，放在通风干燥处自然风干或65°C烘箱中烘干，将干的子实体装在密闭的塑料袋中避光保存。2.根据权利要求1所述的富砸高虫草素含量的虫草子实体的培养方法，其特征是:步骤(I)中菌落转接到斜面培养基上时，是选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落转接到斜面培养基上。
【文档编号】C05G1/00GK106069177SQ201610404341
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月12日
【发明人】周美红, 程显好, 王仲礼
【申请人】鲁东大学