蝴蝶兰组培繁殖方法
【专利摘要】本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种蝴蝶兰组培繁殖方法，包括花梗芽的诱导、丛生芽的分化和增殖、壮苗生根、炼苗和移栽。诱导培养基中采用土豆泥、香蕉泥，用白砂糖替代蔗糖可以大大降低蝴蝶兰规模化增殖的生产成本且生长状况良好；分化增殖培养基中的椰子汁同样是增殖的关键因素之一，椰子汁含量为10％时增殖倍数、增殖时间、经济效益均为最佳。采用本发明技术方案的蝴蝶兰组培繁殖方法，以蝴蝶兰丛生芽途径开展组培快繁，具有诱导率高、诱导时间短、丛生芽增殖率高、技术难度低、遗传性能稳定的优点，可避免生产中发生大量变异，对大规模生产具有重要意义。
【专利说明】
蝴蝶兰组培繁殖方法
技术领域
[0001] 本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种蝴蝶兰组培繁殖方法。
【背景技术】
[0002] 蝴蝶兰(Pha 1 aenops i samabi 1 i s)别称蝶兰，被誉为"洋兰皇后"，是热带兰中的珍 品。蝴蝶兰花朵硕大、朵数多、开花期长、花色艳丽、色泽丰富，可盆栽放置于书房、客厅、臣卜 室等处，典雅大方并给人以美的享受，花朵可作新娘的捧花、襟花、胸花，同时是切花的好材 料。蝴蝶兰是兰科植物中栽培最广泛、普及程度最高的品种之一，深受各国人民喜爱。蝴蝶 兰是单茎性气生兰，植株极少发育侧枝，且种子极难萌发，实生苗变异严重，不适于大规模 商业种植。应用植物组培快繁技术可在短期内生产大量整齐一致的种苗，因此大规模商业 种植一般采用组织培养快繁的方法。关于蝴蝶兰组织培养的报道较多，多以蝴蝶兰的叶片、 茎尖、花梗腋芽、种子、根尖、花梗节间为外植体进行组织培养研究，而对以花梗为外植体的 研究常采用未开花、即将开花的花梗，这对母株伤害较大，将影响其观赏价值、经济价值。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于解决上述技术问题，提供一种蝴蝶兰组培繁殖方法，以蝴蝶兰 丛生芽途径开展组培快繁，具有诱导率高、诱导时间短、丛生芽增殖率高、技术难度低、遗传 性能稳定的优点，可避免生产中发生大量变异，对大规模生产具有重要意义。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明采用了一种蝴蝶兰组培繁殖方法，包括花梗芽的诱 导、丛生芽的分化和增殖、壮苗生根、炼苗和移栽，其中：
[0005] 所述花梗芽的诱导是指:将花梗段第2、3节位的腋芽在诱导培养基中诱导营养 芽；
[0006] 所述诱导培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA 3.0mg、1.0g花宝、柠檬酸30mg、 土豆泥100g-150g、白砂糖30g;或
[0007] 每升VW基本培养基中添加6-BA 3.0mg、1.0g花宝1号、柠檬酸30mg、香蕉泥100g-150g、白砂糖30g;
[0008] 所述丛生芽的分化和增殖是指:将营养芽从花梗节段基部切下，在分化培养基中 进行丛生芽的分化和增殖，25± 1°C、光照1500-2000LX;光照时间为10-12小时/天，培养至 分化出幼苗；
[0009] 所述分化培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA 5.0mg、NAA 0.5mg、10%椰子 汁、朽1檬酸30mg;
[0010] 所述壮苗生根是指:丛生芽生长至1.5cm时将其切下转入培养基中壮苗生根，2个 月后进行炼苗。
[0011]作为优选方案，所述炼苗和移栽是指:将试管苗密封置于温室3-4周进行炼苗;将 小苗从试管移出，于0.2%高锰酸钾溶液中浸泡3-5分钟后捞出，将消毒处理过的水苔用清 水浸泡，然后用脱水机脱去水苔中多余的水分至水苔手紧握无水滴产生，待用;移栽时将苗 的根系分开呈散射状，中间填充水苔，再用水苔包裹整个根系，放入穴盘中，日温22-30Γ， 夜温18-25°C，湿度65%-85%，光照度低于ΙΟΟΟΟΙχ。
[0012] 作为优选方案，移栽时挑选炼过苗的蝴蝶兰组培苗，要求其无污染、叶数3~5张、 叶宽1.5~2.5cm、叶子健壮、叶色翠绿、根数3条以上、根长0.8~3.0cm、根系粗壮有活力、单 轴茎较明显。
[0013] 本发明所具有的有益效果:本发明中诱导培养基采用土豆泥、香蕉泥，用白砂糖替 代蔗糖可以大大降低蝴蝶兰规模化增殖的生产成本且生长状况良好；分化增殖培养基中 的椰子汁同样是增殖的关键因素之一，椰子汁含量为10%时增殖倍数、增殖时间、经济效益 均为最佳;进行壮苗生根时，一般培养基只使用NAA或IBA进行生根，而本发明添加少量6 - BA可使小苗健壮生长并生根，提前进入炼苗阶段。小苗移栽时，用0.2 %高锰酸钾溶液浸泡 小苗3-5分钟，既能杀菌消毒，又可使小苗伤口快速氧化愈合，从而提高成活率。
【具体实施方式】
[0014] 下面对本发明作进一步的说明。
[0015] 以下实施例MS培养基配方：每升培养基中含KN〇3(1900mg/L)，NH4N03(1650mg/L)， MgS〇4 · 7H2〇(370mg/L)，KH2P〇4(170mg/L)，CaCl2(330mg/L)，KI(0.83mg/L)，H3B〇3(6.2mg/ L)，MnS〇4 · H20(16.9mg/L)，ZnS〇4 · 7H20(8.6mg/L)，CuS〇4 · 5H2〇(0.025mg/L)，CoCl2 · 6H2O (0.025mg/L)，Na2Mo〇4 · 2H20(0.25mg/L)，FeS〇4 · 7H2〇(27.85mg/L)，Na2EDTA(37.25mg/L)， 甘氨酸（2.0mg/L)，烟酸B3(0.5mg/L)，盐酸硫胺素 B1(0. lmg/L)，盐酸吡咳醇B6(0.5mg/L)， 肌醇（l〇〇mg/L)。
[0016] 表1不同培养基对花梗侧芽诱导情况对照表
[0017]
[0018]表1为不同培养基对花梗侧芽诱导的结果，使用相同基础培养基，同时使用6 - BA、 NAA时诱导率比单独使用6 - BA时低，且萌动出芽时间长。当6 - BA的浓度达到5.0mg/L时，诱 导率略下降且生长偏弱，表明此浓度或更高浓度并不适于蝴蝶兰花梗侧芽的诱导;单独使 用3.0mg/L浓度的6 - BA时，蝴蝶兰花梗侧芽诱导率较好。本试验中2号培养基外植体诱导表 现突出，出芽最早且出芽率达到90%，萌动仅需12d，形成营养芽需要2个月左右;VW培养基 加入100g/L香蕉泥、l.Og/l花宝1号后，大多数诱导出花芽，其中5号培养基的出芽率达到 80%，形成可诱导分化丛生芽的花葶需2~3个月。
[0019 ]表2不同质量浓度6-BA培养基中营养芽的分化养殖情况对照表
[0020]
[0021 ]表2为不同质量浓度6-BA培养基中营养芽的分化养殖结果，由表2可见，营养芽分 化增殖时MS培养基优于VW培养基。NAA浓度为0.5mg/L、6 - BA浓度为1.0~7. Omg/L时营养芽 分化的丛生芽增殖率逐渐提高；6 - BA浓度为5.OmgAJ寸诱导分化的平均出芽数较多，且生 长健壮;6 - BA浓度为7. Omg/L时诱导分化的平均出芽数最多，但有部分畸形。可见，6 - BA浓 度过高并不能达到良好效果，只有6 - BA、NAA在适宜浓度下配合使用，才能取得最好的营养 芽分化增殖效果。2号培养基最适于营养芽分化再增殖，其分化出的芽数多、生长快、健壮、 无畸形，且芽的生长均能成为小苗，最早1.5个月可见芽，但分化出增殖丛生芽需2个月左 右；分化出丛生芽后采用多芽增殖并仍使用2号培养基，可极大缩短增殖周期，仅需1.5个 月。
[0022] 实施例一
[0023]花梗芽的诱导:将花梗段第2、3节位的腋芽在诱导培养基中诱导营养芽；
[0024] 诱导培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA3. Omg、1. Og花宝1号、30mg柠檬酸、土 ?泥l〇〇g、白砂糖30g;
[0025]丛生芽的分化和增殖:将营养芽从花梗节段基部切下，在分化培养基中进行丛生 芽的分化和增殖，25± 1°C、光照1500Lx;光照时间为10小时/天，培养至分化出幼苗；
[0026] 分化培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA5. Omg、ΝΑΑ0.5mg、10 %椰子汁、柠檬 酸30mg;
[0027] 壮苗生根:丛生芽生长至1.5cm时将其切下转入培养基中壮苗生根，2个月后进行 炼苗。
[0028] 炼苗和移栽:将试管苗密封置于温室3周进行炼苗;将小苗从试管移出，于0.2 %高 锰酸钾溶液中浸泡3-5分钟后捞出，将消毒处理过的水苔用清水浸泡，然后用脱水机脱去水 苔中多余的水分至水苔手紧握无水滴产生，待用;移栽时将苗的根系分开呈散射状，中间填 充水苔，再用水苔包裹整个根系，放入穴盘中，日温22°C，夜温20°C，湿度65%，光照度低于 90001x〇
[0029] 实施例二
[0030] 花梗芽的诱导:将花梗段第2、3节位的腋芽在诱导培养基中诱导营养芽；
[0031] 诱导培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA3. Omg、1.0g花宝1号、30mg柠檬酸、土 豆泥150g、白砂糖30g;
[0032] 丛生芽的分化和增殖:将营养芽从花梗节段基部切下，在分化培养基中进行丛生 芽的分化和增殖，25 ± 1°C、光照2000Lx;光照时间为12小时/天，培养至分化出幼苗；
[0033] 分化培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA5. Omg、NAAO . 5mg、10 %椰子汁、柠檬 酸30mg;
[0034] 壮苗生根:丛生芽生长至1.5cm时将其切下转入培养基中壮苗生根，2个月后进行 炼苗。
[0035] 炼苗和移栽:将试管苗密封置于温室3周进行炼苗;将小苗从试管移出，于0.2 %高 锰酸钾溶液中浸泡3-5分钟后捞出，将消毒处理过的水苔用清水浸泡，然后用脱水机脱去水 苔中多余的水分至水苔手紧握无水滴产生，待用;移栽时将苗的根系分开呈散射状，中间填 充水苔，再用水苔包裹整个根系，放入穴盘中，日温25°C，夜温25°C，湿度75%，光照度低于 8〇ooix〇
[0036] 实施例三
[0037] 花梗芽的诱导:将花梗段第2、3节位的腋芽在诱导培养基中诱导营养芽；
[0038] 诱导培养基为每升VW基本培养基中添加6-ΒΑ3. Omg、1.0g花宝1号、柠檬酸30mg、香 蕉泥l〇〇g、白砂糖30g;
[0039] 丛生芽的分化和增殖:将营养芽从花梗节段基部切下，在分化培养基中进行丛生 芽的分化和增殖，25± 1°C、光照1800Lx;光照时间为10小时/天，培养至分化出幼苗；
[0040] 分化培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA5. Omg、ΝΑΑ0.5mg、10 %椰子汁、柠檬 酸30mg;
[0041] 壮苗生根:丛生芽生长至1.5cm时将其切下转入培养基中壮苗生根，2个月后进行 炼苗。
[0042]炼苗和移栽:将试管苗密封置于温室3-4周进行炼苗;将小苗从试管移出，于0.2% 高锰酸钾溶液中浸泡3-5分钟后捞出，将消毒处理过的水苔用清水浸泡，然后用脱水机脱去 水苔中多余的水分至水苔手紧握无水滴产生，待用;移栽时将苗的根系分开呈散射状，中间 填充水苔，再用水苔包裹整个根系，放入穴盘中，日温30°C，夜温18°C，湿度85%，光照度低 于50001x。
[0043] 实施例四
[0044] 花梗芽的诱导:将花梗段第2、3节位的腋芽在诱导培养基中诱导营养芽；
[0045]诱导培养基为每升VW基本培养基中添加6-BA3. Omg、1.0g花宝1号、柠檬酸30mg、香 蕉泥150g、白砂糖30g;
[0046]丛生芽的分化和增殖:将营养芽从花梗节段基部切下，在分化培养基中进行丛生 芽的分化和增殖，25 ± 1°C、光照2000Lx;光照时间为10小时/天，培养至分化出幼苗；
[0047] 分化培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA5. Omg、ΝΑΑ0.5mg、10 %椰子汁、柠檬 酸30mg;
[0048] 壮苗生根:丛生芽生长至1.5cm时将其切下转入培养基中壮苗生根，2个月后进行 炼苗。
[0049] 炼苗和移栽:将试管苗密封置于温室3周进行炼苗;将小苗从试管移出，于0.2 %高 锰酸钾溶液中浸泡3-5分钟后捞出，将消毒处理过的水苔用清水浸泡，然后用脱水机脱去水 苔中多余的水分至水苔手紧握无水滴产生，待用;移栽时将苗的根系分开呈散射状，中间填 充水苔，再用水苔包裹整个根系，放入穴盘中，日温25°C，夜温22°C，湿度75%，光照度低于 60001x〇
[0050] 移栽时挑选炼过苗的蝴蝶兰组培苗，要求其无污染、叶数3~5张、叶宽1 . 5~ 2.5cm、叶子健壮、叶色翠绿、根数3条以上、根长0.8~3.0cm、根系粗壮有活力、单轴茎较明 显。
[0051] 本发明的说明书被认为是说明性的而非限制性的，在本发明基础上，本领域技术 人员根据所公开的技术内容，不需要创造性的劳动就可以对其中一些技术特征做出一些替 换和变形，均在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 蝴蝶兰组培繁殖方法，包括花梗芽的诱导、丛生芽的分化和增殖、壮苗生根、炼苗和 移栽，其特征在于： 所述花梗芽的诱导是指:将花梗段第2、3节位的腋芽在诱导培养基中诱导营养芽； 所述诱导培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA 3. Omg、1. Og花宝、梓檬酸30mg、土豆 泥100g_150g、白砂糖30g;或 每升VW基本培养基中添加6-BA 3 .Omg、1 .Og花宝1号、梓檬酸30mg、香蕉泥100g-150g、 白砂糖30g; 所述丛生芽的分化和增殖是指:将营养芽从花梗节段基部切下，在分化培养基中进行 丛生芽的分化和增殖； 所述分化培养基为每升MS基本培养基中添加6-BA 5.0mg、NAA 0.5mg、10%椰子汁、柠 檬酸30mg; 所述壮苗生根是指：丛生芽生长至1.5cm时将其切下转入培养基中壮苗生根，2个月后 进行炼苗。2. 根据权利要求1所述的蝴蝶兰组培繁殖方法，其特征在于:所述炼苗和移栽是指:将 试管苗密封置于温室3-4周进行炼苗;将小苗从试管移出，于0.2 %高锰酸钾溶液中浸泡3-5 分钟后捞出，将消毒处理过的水苔用清水浸泡，然后用脱水机脱去水苔中多余的水分至水 苔手紧握无水滴产生，待用;移栽时将苗的根系分开呈散射状，中间填充水苔，再用水苔包 裹整个根系，放入穴盘中，日温22-30°(：，夜温18-25°(：，湿度65%-85%，光照度低于 ΙΟΟΟΟΙχο3. 根据权利要求2所述的蝴蝶兰组培繁殖方法，其特征在于:移栽时挑选炼过苗的蝴蝶 兰组培苗，要求其无污染、叶数3~5张、叶宽1.5~2.5cm、叶子健壮、叶色翠绿、根数3条以 上、根长0.8~3.Ocm、根系粗壮有活力、单轴茎较明显。
【文档编号】A01H4/00GK106069771SQ201610545425
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月12日
【发明人】宋林贵, 苟兴明
【申请人】成都东山兰韵农业有限公司