专利名称：通过金属催化的辅因子再生用氢气进行酶促还原的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及在含有一种金属盐或复合物，一种烟酰胺辅因子；和一种依赖烟酰胺辅因子的酶的催化剂的存在下使用H2作为不饱和有机化合物的还原剂以形成还原的有机产物的方法。
背景技术：
本发明涉及在含有酶的催化剂存在的条件下用H2作为还原剂还原有机化合物的催化方法。已知还原和/或氢化反应有很多人工催化剂，但已知的催化剂在存在另一官能团的情况下选择性地还原或氢化一个不饱和官能团的能力是很有限的。进而，大部分现有技术的催化剂和方法不能选择性地产生旋光产物，而旋光产物在用于人类或动物消费的组合物，如食品或药物，的生产中是非常合乎需要的。
与之相反，许多酶能够高度选择性地还原它们的天然底物。在一些情况下酶催化独特的转化，通过传统的合成方法这些转化需要很多步骤。并且，许多非天然底物，包括许多不饱和有机化合物，能够在温和的反应条件下进行高度化学选择性，区域选择性和/或对映体选择性的酶促还原。因此用酶促方法还原具有商业价值(commercialinterest)的不饱和化合物，特别是用于制备手性分子，是高度合乎需要的，如Simon等所述(Ang.Chem.Int.Ed.Engl.1985，24，539-53)。不幸的是，大多数能够催化这样的还原反应的酶都需要辅因子的存在，辅因子的功能是生物性还原剂。一个能够选择性地还原和/或氢化不饱和有机化合物的种类繁多的酶家族是烟酰胺依赖性的氧化还原酶，如Walsh所讨论(Enzymatic Reaction MechanismsFreeman & Co.，N.Y.，1979；311-521页)。
烟酰胺依赖性的氧化还原酶需要烟酰胺辅因子的存在。天然存在的烟酰胺辅因子(NAD+，NADP+，NADH和NADPH)的结构如下文所示， 还原型的烟酰胺辅因子(NADH或NADPH)与依赖烟酰胺辅因子的酶结合，并转移一个“氢阴离子(hydride)”(两个电子和一个氢原子核)以还原同样与上述酶结合的底物。在底物被还原后，该酶释放氧化形式的烟酰胺辅因子(NAD+或NADP+)。生物系统通常利用外部还原剂结合其它酶以回收被氧化的烟酰胺辅因子以再生还原型的烟酰胺辅因子。在这些烟酰胺辅因子中烟酰胺环(示意图如下)是活性基团。为了再生还原型的辅因子，外部的还原剂必须区域选择性地转移等当量的“氢阴离子”到氧化型的(吡啶鎓)辅因子以形成还原型的(1，4-二氢吡啶)辅因子。 尽管依赖烟酰胺辅因子的酶和烟酰胺辅因子以低浓度存在于所有的活的生物体中，它们在非生物条件下倾向于化学不稳定，并且纯化形式极其昂贵。由于它们的成本很高，因此寻求联合使用酶和烟酰胺辅因子的大多数工业方法必须提供再生烟酰胺辅因子的方法。
许多辅因子再生的方法是已知的，如Chenault和Whitesides所讨论(应用生物化学生物技术App.Biochem.Biotechnol.)1987，14，147-97)和在有机合成中的酶(Enzymes in Organic Synthesis)K.Drauz，H.Waldeman，编著；VCHWeinheim，1995；596-665页中所描述。最广泛使用的辅因子再生方法利用一种化学还原剂和第二种酶来还原烟酰胺辅因子。例如，用葡萄糖作为还原剂，葡萄糖氧化酶被证明能够成功地再生NADP+/NADPH高达4×104次循环(参见Wong和Whitesides有机化学杂志(J.Org.Chem.)1982，47，2816-18；Wong等，(美国化学学会会刊J.Am.Chem.Soc.)1985，107，4028-31；Obon等Biotech.Bioeng.1998，57，510-17)。Hummel等人(应用微生物生物技术App.Microbiol.Biotechnol.)1987，26，409-416)证明联合使用甲酸脱氢酶和甲酸盐能够从NAD+再生NADH，再生还原型辅因子的循环数高达6×105。在这些方法中，第二种酶将再生的NADH与底物还原偶联。如果两种分开的酶系统能够在体外实现活性而不需要过度的复杂性或成本，用化学还原剂和两种酶还原底物就是可行的辅因子再生方法。
现有技术试图通过电化学方法再生烟酰胺辅因子，避免对第二种酶的需要，但是直接的电化学方法显然没有达到足够的辅因子再生，主要是由于无活性的烟酰胺二聚体的形成。对电化学方法添加某些类型的电子转移催化剂或“介体”能够大大改善电化学再生，如Steckhan所公开(Topics in Current Chemistry，1994，170，83-111)。最成功的介体是Steckhan等人公开的铑复合物(Ang.Chem，1982，94，786；美国专利4,526,661和有机金属(Organometallics)1991 10，1568-77)。尽管这些基于电化学系统已经成功地与酶促还原反应偶联，目前为止辅因子循环数仍然过低，在商业上不可行。
有人报道在类似的铑电子转移催化剂存在的情况下，将NAD(P)+化学还原为NAD(P)H的光化学辅助方法成功地与酶偶联(Willner，等，in J.Am.Chem.Soc.，1984，106，5352-53，and J.Chem.Soc.，Perkin Trans.，2 1990，559-64；Franke和Steckhan于Angew.Chem.Intl.Ed.Engl.，1988，27，265；以及Aono和Okurain Inorg.Chim.Acta.1988，152，55-59)。尽管如此，在辅因子再生速率和效率上可以与酶促方法竞争的，在经济上具有竞争性和长寿命的光化学辅因子再生系统仍然是一个遥不可及的目标。
用非生物学的化学还原剂进行辅因子再生是一种简单的途径，但是大多数化学还原剂在产生辅因子烟酰胺环的1，4-二氢异构体的选择性上不合乎需要，如Ohnishi和Tanimoto所讨论(四面体快报(Tetrahedron Lett.)1977，1909-12)。在这点上连二亚硫酸盐(dithionite)是优选的还原剂，能够提供高达约102的烟酰胺辅因子循环，如Jones，等所描述(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，1972，856-57)。尽管如此，连二亚硫酸盐与许多酶不兼容，并且与许多底物直接反应，它昂贵，并产生不合乎需要的含硫废物，(如异丙醇)和一种源自T.brockii的乙醇脱氢酶，在一种“偶联底物”方法中还原某些有机底物。在上述“偶联底物”方法中一种酶同时催化(a)氢阴离子供体乙醇将NADP+还原为NADPH，以及(b)NADPH对酮底物如2-庚酮的还原。
氢气(H2)是一种高度合乎需要的化学还原剂。H2是一种强还原剂，并可以大量地，价格低廉地以高纯度生产和储存。H2通常对于酶和辅因子是无毒的，并且因为它通常在大多数还原反应中被完全消耗，它不会残留使得纯化复杂化，或生成化学废物。在过渡态金属催化剂存在(无酶或辅因子存在)的情况下用H2作为还原剂的许多例子是已知的。
但是，只有在H2与辅因子再生间接偶联的复杂多步骤或多组分催化剂系统中才能用氢气作为还原剂与酶联合使用。Wong等人(美国化学学会会刊)J.Am.Chem.Soc.)1981，103，6227-8)和Otsuka等人(分子催化杂志)J.Mol.Catal.)1989，51，35-9)报道了使用H2和氢化酶还原电子受体如联二-N-甲基吡啶(methylviologen)以生成自由基，其中上述氢化酶是空气敏感并不易获得的。上述自由基可以通过第二种酶(铁氧化还原蛋白还原酶)与NADH再生偶联。NADH通过第三种酶与底物还原偶联。
Abril和Whitesides(J.Am.Chem.Soc.1982，104，1552-54)报道了一种多组分的途径，在该途径中一种双齿的磷化氢配基(bidentate phosphine ligand)的水溶性铑复合物被用于激活H2，但是底物还原需要另外两种酶和高浓度的乳酸/丙酮酸氢载体中间产物。 Bhaduri等人最近的报道(J.Am.Chem.Soc.1998，120，12127-28)描述了通过“次级偶联”系统用H2将NAD+还原为NADH。H2在二氯甲烷相中与羰基铂簇(platinum carbonyl cluster)反应并还原一种氧化还原活性染料(番红精0)。还原后的染料扩散到水相，在水相中其还原NAD+以产生NADH。NADH然后联合乳酸脱氢酶将丙酮酸还原为乳酸。但是，上述羰基铂簇在水中不溶并且不稳定，使得氧化还原活性染料和两相溶剂系统的使用成为必要。乳酸脱氢酶以外的酶或丙酮酸以外的底物还未见报道。
尽管用H2作为还原剂再生烟酰胺辅因子具有潜在的优点，完成这一点的简单，有效和具有经济吸引力的方法尚未被实现。在本领域中，对于将低成本和合乎环保需要的H2作为还原剂和酶催化的高度选择性相结合的简单而有效的方法的需求尚未得到满足。本发明主要是针对这一合乎需要的目标。
发明概述本发明通过提供催化剂组合物和方法，在存在含有酶的催化剂的情况下利用H2作为不饱和有机化合物的还原剂，满足了本领域中未得到满足的需要。
根据本发明的这一(些)目的，如本文所包含和广泛地描述，因此本发明在一个方面上涉及还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括将不饱和有机化合物和H2在存在催化剂的情况下混合以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有a)至少一种金属盐或复合物，b)至少一种烟酰胺辅因子；和c)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物(rhodium phosphinecomplex)时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
在另一方面，本发明提供了还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括将不饱和有机化合物和H2在存在催化剂的情况下混合以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有a)pH在大约6.5到大约9.0之间的一种基本上水性的缓冲溶液，b)一种水溶性的金属盐或复合物，包括铁，钌，锇，钴，铑，铱，镍，钯或铜，c)一种烟酰胺辅因子，包括NAD+，NADH，NADP+，NADPH或它们的混合物；和d)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，其归类于EC系统1.x.1.y家族的酶，其中x是1，3，4，5或10。
在一个不同的方面，本发明提供了一种还原不饱和有机化合物的方法，包括a)接触H2和一种催化剂，以及b)将一种不饱和有机化合物与上述催化剂接触以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有i)至少一种金属盐或复合物，ii)至少一种烟酰胺辅因子；和iii)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，并且其中iv)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且v)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。在另一方面，本发明提供了还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括a) 将H2与至少一种金属盐或复合物，和至少一种烟酰胺辅因子接触以形成至少一些还原型的烟酰胺辅因子，并b)将上述还原型的烟酰胺辅因子与依赖烟酰胺辅因子的酶以及不饱和有机化合物在有效的条件下接触以形成至少一些还原的有机产物。其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物(platinum carbonylcluster complex)时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
本发明进一步涉及一种方法，包括使用一种催化剂混合物，向不饱和有机底物加入氢气H2，所述催化剂混合物含有一种酶，一种烟酰胺辅助因子，一种金属盐或复合物和任选地配体，其中所述金属盐或复合物的金属选自铁，钴，镍，铜，钌，钯，锇和铱。
本发明还涉及还原不饱和有机化合物的组合物，含有H2和一种催化剂，所述催化剂包括a)至少一种金属盐或复合物，至少一种烟酰胺辅助因子；和c)一种依赖烟酰胺辅助因子的酶，其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含有氧化还原染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅助因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
在另一实施方案中，本发明涉及稳定氧化还原酶活性的方法，该方法包括将膦与或亚磷酸盐(酯)与氧化还原酶混合。
本发明的其它优点部分将在下文的描述中列出，部分将通过描述而显而易见，或可以通过本发明的实践而得知。通过附后的特别指出的元素和化合物，本发明的优点将被认识到和实现。应当理解，上文的总体描述和下文详细描述仅仅是示例性的和解释性的，并不是对本发明的限制，而是如权利要求所要求的那样。
优选实施方案的描述通过参考下文对本发明优选实施方案和其中包括的实施例的详细描述，以及参考附图
和它们之前和之后的描述，本发明将更容易理解。还应当理解本文中所用的术语仅仅是为了描述特定的实施方案，并非是限制性的。
应当理解，在本发明的说明书和附后的权利要求中所使用的单数形式“一(a，an)”和“该(the)”包括复数的指示物(referent)，除非上下文明确地指出并非如此。因此，例如，提及“一种芳香化合物”时包括许多芳香化合物的混合物。
在本文中范围经常表达为“大约”某一特定值，和/或到“大约”另一特定值。当表达这样的范围时，另一实施方案包括从一个特定值和/或到另一特定值。类似地，通过前述的“大约”数值表达为近似值时，应当理解该特定的数值形成另一实施方案。应当进而理解每个范围的各个终点(endpoint)既与另一终点相关，也与另一终点无关。
在本说明书中和在随后的权利要求中将提及许多术语，这些术语应当被界定为以下含义除非特地指出相反的意思，一种组分的重量百分比是根据包含该组分的组合物或制剂的总重量。
在本说明书和总结性的权利要求中使用时，一种化学物质的残基是指在某一特定的反应方案或其后的制剂或化学产物中该部分是从该化学物质得到的产物，而不管该部分是否真正是从该化学物质得到的。因此，在聚酯中的乙二醇残基是指聚酯中一个或多个-OCH2CH2O-重复单元，而不论乙二醇是否用于制备该聚酯。类似地，聚酯中的癸二酸残基是指该聚酯中一个或多个-CO(CH2)8CO-部分，而不论该残基是否通过癸二酸或其酯反应来得到该聚酯。
“任选的”或“任选地”的意思为随后所描述的事件或情况可以发生也可以不发生，并且该描述包括了上述事件或情况发生的情形和不发生的情形。例如，短语“任选地取代的低级烷基”的意思为该低级烷基基团可以被取代也可以不被取代，并且该描述同时包括了未取代的低级烷基基团和存在取代的低级烷基基团。
在本文中使用时，术语化合物或性质的“有效量”是指这样的有效量能够执行该化合物的功能或者一种有效量所表现的特性。如下文所指出，所需要的精确的量将根据方法而不同，这依赖与已经认识到的变量如所使用的化合物和观察到的反应条件。因此，不可能指定一个精确的“有效量”。但是，本领域的普通技术人员仅仅通过常规实验就可以确定适当的有效量。
在一个方面，本发明提供了还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括将不饱和有机化合物和H2在存在催化剂的情况下混合以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有a)至少一种金属盐或复合物，b)至少一种烟酰胺辅因子；和c)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，以下的一项或多项对以上范围的进一步的排除和/或限制可能适用于本发明的另加实施方案a)上述催化剂含有一种并仅含一种酶，b)上述金属盐或复合物不合有羰基铂簇复合物，c)上述金属盐或复合物不含有膦铑复合物，和/或d)还原有机产物能够在无电化学或光化学来源的外来能量的情况下形成。
当声称上述催化剂含有“一种”酶时，其用意是指该催化剂中含有一种，并仅含一种酶。
羰基铂簇复合物是具有三个或多个铂原子的金属盐或复合物，其中每个铂原子与至少一个一氧化碳配基结合。常见的羰基铂簇复合物的例子包括但不限于[Pt9(CO)18]2-和[Pt12(CO)24]2-。
当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，以下一项或多项进一步的排除和/或限制可能适用a)上述催化剂不含有氧化还原活性染料，氧化还原活性染料包括但不限于番红精O，甲基viologen，亚甲基蓝，等等，b)上述不饱和有机底物不是丙酮酸盐(酯)，c)上述还原的有机产物不是乳酸盐(酯)，d)上述酶不含有乳酸脱氢酶，或e)上述方法不包括与水不能混溶的溶剂，包括但不限于二氯甲烷，氯仿等等。
膦铑复合物是具有与膦残基结合的铑原子的金属盐或复合物，上述膦残基具有分子式PR3，其中三个R基团独立地含有碳氢基团或残基。在另一实施方案中，上述金属盐或复合物不包括二膦铑(rhodiumbis(phosphine))复合物。二膦铑复合物含有与两个膦残基结合的铑原子以形成双齿膦配基，其中上述两个膦残基可能通过桥基彼此结合，也可能彼此不结合。在一些实施方案中，上述金属盐或复合物不包括水溶性的膦铑复合物。
当金属盐或复合物是膦铑复合物时，以下一项或多项对本发明的某些实施方案的范围的进一步的排除和/或限制可能适用a)上述依赖烟酰胺辅因子的酶不是乳酸脱氢酶，b)上述依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶，c)上述方法不包括乳酸盐(酯)或丙酮酸盐(酯)，和/或d)上述不饱和有机底物不包括环己酮或2-norbornanone。
在本发明方法的优选实施方案中，还原的有机产物能够在无电化学或光化学来源的外部能量的情况下形成。换句话说，本发明的优选的方法仅仅需要热能来成功地用H2还原不饱和有机化合物，并且它们不需要存在或提供可见或紫外光，也不需要存在或提供具有电势差的电极或表面以诱导还原的有机产物的形成。更特别地，本发明的优选实施方案不需要存在或提供光，也不需要存在或提供具有电势差的电极或表面来启动H2与催化剂的金属盐或复合物成分的反应。
H2，不饱和有机化合物，金属盐或复合物，烟酰胺辅因子和依赖烟酰胺辅因子的酶可以以任何次序混合或同时混合。
在一个优选的实施方案中，本发明提供了还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括将不饱和有机化合物和H2在存在催化剂的情况下混合以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有a)至少一种金属盐或复合物，b)至少一种烟酰胺辅因子；和c)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
本发明的不饱和有机化合物为含碳分子，它含有至少一个在该化合物的两个原子，X和Y，之间的多键。原子X和Y可以是元素周期表中能够形成多键的任何原子。优选地，X和Y原子独立地选自碳，氮，氧，硫和磷原子。优选地，X或Y原子中至少一个是碳原子，在很多优选的实施方案中，X或Y中至少一个原子是碳原子，并且另一个原子是碳，氧或氮原子。优选地，原子X和Y之间的多键是双键，或三键。不饱和有机化合物可以含有一个以上的多键，并且这些多键可以形成多键的共扼组合。
本发明的不饱和有机化合物类型的例子包括但不限于a)酮，醛，羧酸，羧酸酯或酰胺，b)酮，醛，羧酸，羧酸酯或酰胺的α-β不饱和衍生物，c)具有烯属不饱和基团的脂肪酸，甘油单酯，甘油二酯，或甘油三酯，d)烯烃，芳香化合物或杂环芳香化合物(heteroaromaticcompound)，e)亚胺或肟，f)糖，氨基酸，肽或蛋白，其中上述糖，氨基酸，肽或蛋白具有不饱和基团。
不饱和有机化合物的例子包括但不限于3-羟基-2-丁酮，1，1-二甲氧基丙酮，glycerone，苯乙酮，2-乙酰呋喃，羟基丙酮，6-甲基-5-庚烯-2-酮，5-降冰片烯-2-酮，2-庚酮，8-氧代-2-nananone，环丙基甲基酮，L-山梨糖，2，4，6/3，5-五羟基环己酮，醛醣，乙醛酸，丙酮酸，乙酰乙酸，4-氯乙酰乙酸乙酯，4-氧代-己酸乙酯，草酰乙酸盐(酯)，2，5-二酮-D-葡萄糖酸，D-葡萄糖酸-1，5-内酯，5α-雄(甾)烷-3，17-二酮，雄-4-烯-3，17-二酮，L-lactaldehyde，果糖，D-甘油醛，乳清酸(酯)，2-氧化戊二酸，3-羟基丙酮酸，乙醛酸和L赖氨酸。
本发明还原的有机化合物通常在结构上相应于被还原的起始的不饱和有机化合物，或相应于其一个残基，其中X和Y原子之间的多键在还原过程中被裂解。为了本公开内容的目的，还原被广泛地定义为添加一个或多个电子到上述多键，上述电子是由另一被称为还原剂的化合物提供的。在多键的还原时或还原后还可能发生官能团的重排和/或裂解。通常，多键的还原伴随着一个或多个氢与X和Y原子中的至少一个结合。
在优选的实施方案中，不饱和有机化合物含有一个碳原子，该碳原子与另一碳，氧或氮原子形成双键，还原剂是氢，并且还原后的有机化合物的结构相应于添加两个氢原子到上述双键，如下图所示，在这中情况下还原反应也可以被命名为氢化反应。 如果上式中的S1，S2基团和/或Y基团不同，还原和形成的新的碳氢键可能导致形成还原有机产物的两种对映异构体。本发明的含有酶的催化剂通常仅仅选择性地产生两种可能的对映异构体中的一种。
在存在催化剂的情况下实现的本发明的方法至少包括以下组分a)至少一种金属盐或复合物，b)至少一种烟酰胺辅因子；和c)一种依赖烟酰胺辅因子的酶。
只要上述组分能够以适当的方式相互作用，本发明的催化剂的组分并不需要，但却经常组成，单一的相或混合物。本发明的催化剂的组分可以溶于一种或多种溶剂，或可以分散于或结合于一种或多种支持相。在本发明优选的实施方案中，上述催化剂的三种组分组成一种混合物，该混合物分散于或基本上溶于液体基质中。优选地，上述液体基质组成均一的液相。上述液体基质可以含有有机溶剂，水或它们的混合物。优选地，上述液体基质组成一种实质上的水相。在许多优选的实施方案中，上述液体基质组成含水的缓冲溶液，其pH值在大约6.5到大约9.0，它通常使依赖烟酰胺辅因子的酶和烟酰胺辅因子的稳定性达到最大。更优选地，上述含水缓冲溶液的pH在大约7.0到大约8.5。含有磷酸盐的含水缓冲溶液是优选的含水缓冲溶液。
用于本发明的烟酰胺辅因子包括上文所述的天然存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，并进而包括能够与本发明的烟酰胺辅因子依赖型酶反应以还原不饱和有机化合物的它们的结构类似物。天然存在的辅助因子的结构类似物包括天然存在结构通过添加或除去一个或多个官能团而被修饰的化合物。优选地，本发明的烟酰胺辅因子为生物学上优选的辅因子NAD+，NADH，NADP+，NADPH或它们的混合物。众所周知，许多依赖烟酰胺辅因子的酶将优先结合和/或利用仅仅特异性磷酸化的辅因子(如NADP+，NADPH)，而其它的依赖烟酰胺辅因子的酶将优先结合和/或利用未磷酸化的辅因子(如NAD+，NADH)。
用于本发明的依赖烟酰胺辅因子的酶包括任何需要烟酰胺辅因子或其类似物的存在以还原或氧化有机底物的，天然存在的或经生物技术修饰或改造的酶。应当理解虽然许多依赖烟酰胺辅因子的酶在天然情况下催化氧化反应，但是毫无疑问它们经常可以用于催化本发明的还原过程。
国际生物化学和分子生物学联合会酶学委员会(“EC”)提议了一种著名的四位数系统按照酶所催化的反应类型对该酶进行分类。EC分类系统由Dixon，Webb，Thorne和Tipton描述(“Enzymes”，5章，207-230页，Academic Press，1979)，为了描述酶的分类以及酶的分类与酶所催化的反应的底物和产物之间的关系，该文在此全文引入作为参考。
酶分类系统(“EC”)的第一个数相应于六类酶中的一个。本发明的依赖烟酰胺辅因子的酶全部为氧化还原酶的成员，该类酶包括介导电子，H原子或氢负离子的转移的酶。所有氧化还原酶的EC分类的第一个数为“1”。
EC分类的第二个数涉及由第一个数所指定的酶的亚类。对于氧化还原酶，第二位数涉及该酶的底物和/或产物的一组20个亚类的官能团，即，底物或产物中发生氧化或还原的官能团的类别。EC分类的第三个数涉及另一系列的亚类。对于氧化还原酶，第三个数为“1”意味着一种需要烟酰胺辅因子存在的氧化还原酶。因此，本发明的依赖烟酰胺辅因子的酶都归类于EC系统的“1.x.1.y”类酶之下。EC分类系统的第四位数指定了该酶的一个序号，该序号经常涉及该酶的天然底物的特定特征。
本发明的优选实施方案利用依赖烟酰胺辅因子的酶，这些酶可以进一步通过EC酶分类系统中的x和y的数值加以定义。酶的EC分类系统的第二个数，即，x的数值，相应于该酶所氧化或还原的官能团的类别。本发明优选的酶的x值为1，3，4，5或10，相应于酮或醛的还原(x＝1)；烯烃的还原(x＝3)；亚胺的还原(x＝4或5)；和联苯酚或抗坏血酸的还原(x＝10)。因此，在本发明的优选的实施方案中，依赖烟酰胺辅因子的酶是归类于EC系统1.x.1.y类的酶，其中x是1，3，4，5，或10。目前已知超过340种酶属于这些优选的酶家族。
对于1.1.1.y家族的酶，下面表1将y的数值和酶及其天然底物的名称对应起来。表1，1.1.1.y家族的酶Y 酶的名称1 乙醇脱氢酶2 乙醇脱氢酶4 丁二醇脱氢酶5 双乙酰还原酶6 甘油脱氢酶7 甘油-3-磷酸脱氢酶14 L-艾杜糖醇2-脱氢酶18 肌醇2-脱氢酶21 醛醣还原酶22 UDP葡萄糖6-脱氢酶26 乙醛酸脱氢酶27 L-乳酸脱氢酶30 3-羟基丁酸脱氢酶37 苹果酸脱氢酶40 苹果酸脱氢酶41 异柠檬酸脱氢酶42 异柠檬酸脱氢酶44 磷酸葡萄糖酸脱氢酶47 葡萄糖1-脱氢酶48 半乳糖1-脱氢酶49 葡萄糖-6磷酸1-脱氢酶50 3a-羟基类固醇脱氢酶51 3(或17)b-羟基类固醇脱氢酶53 3a(或20b)-羟基类固醇脱氢酶55 Lactaldehyde还原酶67 甘露醇2-脱氢酶72 甘油脱氢酶83 D-苹果酸脱氢酶95 甘油脱氢酶119 葡萄糖1-脱氢酶122 D-苏-醛糖1-脱氢酶159 12a-羟基类固醇脱氢酶176 12a-羟基类固醇脱氢酶对于1.3.1.y酶家族的酶，酶1.3.1.14，即乳清酸还原酶，是优选的。(NADH)对于1.4.1.y家族的酶，下面表2将y的数值和酶和/或其天然底物的名称对应起来。表21.4.1.y家族的酶Y酶的名称1丙氨酸脱氢酶2谷氨酸脱氢酶3谷氨酸脱氢酶4谷氨酸脱氢酶5L-氨基酸脱氢酶7氨酸脱氢酶8缬氨酸脱氢酶9亮氨酸脱氢酶10 甘氨酸脱氢酶11 L-赤(erythro)-3，5-二氨基己酸脱氢酶12 2，4-二氨基戊酸脱氢酶13 谷氨酸合酶14 谷氨酸合酶15 赖氨酸脱氢酶16 二氨基庚二酸脱氢酶17N-甲基丙氨酸脱氢酶18赖氨酸6-脱氢酶19色氨酸脱氢酶20苯丙氨酸脱氢酶在本发明优选的实施方案中，依赖烟酰胺辅因子的酶是在EC系统中，一种归类于1.1.1.1，1.1.1.2，1.1.1.4，1.1.1.5，1.1.1.6，1.1.1.7，1.1.1.14，1.1.1.18，1.1.1.21，1.1.1.22，1.1.1.26，1.1.1.27，1.1.1.30，1.1.1.37，1.1.1.40，1.1.1.41，1.1.1.42，1.1.1.44，1.1.1.47，1.1.1.48，1.1.1.49，1.1.1.50，1.1.1.51，1.1.1.53，1.1.1.55，1.1.1.67，1.1.1.72，1.1.1.83，1.1.1.95，1.1.1.119，1.1.1.122，1.1.1.159，1.1.1.176，1.3.1.14，1.4.1.1，1.4.1.2，1. 4.1.3，1.4.1.4，1.4.1.5，1.4.1.7，1.4.1.8，1.4.1.9，1.4.1.10，1.4.1.11，1.4.1.12，1.4.1.13，1.4.1.14，1.4.1.15，1.4.1.16，1.4.1.17，1.4.1.18，1.4.1.19，或1.4.1.20家族的酶。
在本发明更优选的实施方案中，依赖烟酰胺辅因子的酶是在EC系统中归类于1.1.1.1，1.1.1.2，1.1.1.5，1.1.1.6，1.1.1.7，1.1.1.14，1.1.1.18，1.1.1.21，1.1.1.26，1.1.1.27，1.1.1.37，1.1.1.40，1.1.1.41，1.1.1.42，1.1.1.47，1.1.1.48，1.1.1.49，1.1.1.72，1.1.1.83，1.1.1.95，1.1.1.119，1.4.1.1，1.4.1.3，1.4.1.4，1.4.1.9，或1.4.1.20家族的酶。
在本发明的其它优选的实施方案中，依赖烟酰胺辅因子的酶是在EC系统中归类于1.1.1.1或1.1.1.2家族的酶。
在本发明中，EC分类对一种酶的规范并不一定严格地限制在本发明的方法中可以被该酶所还原的不饱和有机化合物，或该酶所产生的有机产物的类别或种类。在本发明的许多实施方案中，本发明的方法将还原非天然的不饱和有机化合物，以产生非天然的还原的有机产物，这些非天然的不饱和有机化合物和非天然的还原有机产物并不能为酶的EC分类系统所精确规定。
尽管如此，应当理解一种特定氧化还原酶的EC分类的第二位和/或第四位数字本质上确定了该酶可以催化的优选氧化和/或还原反应的类型，和/或相应的可能涉及的底物和产物的类别和/或种类。与本发明相关的氧化还原酶的名称，EC分类和相应的化学反应的列表可以在“Enzyme Nomenclature 1992-Recommendations of theNomenclature Committee of the International Union ofBiochemi stry and Molecular Biology on the Nomenclature andClassification of Enzymes(酶命名法1992-国际生物化学和分子生物学联合会命名委员会关于酶的命名和分类的建议)”1-154页，Academic Press，1992中找到，为了描述酶的分类以及酶的分类与酶所催化的反应的底物和产物之间的关系，该文在此全文引入作为参考。特别相关的是24-55页(1.1.1.y家族的酶)，65-67页(1.2.1.y家族的酶)，76-83页(1.3.1.y家族的酶)，87-89页(1.4.1.y家族的酶)93-96页(1.5.1.y家族的酶)和113(1.10.1.y家族的酶)。
例如，如果依赖烟酰胺辅因子的酶是乙醇脱氢酶[1.1.1.1]或[1.1.1.2]，一种优选的还原有机产物是一种醇。
类似地，下文确定了许多特定的EC酶分类的优选的还原有机产物的类别或种类。例如，如果依赖烟酰胺辅因子的酶是醛糖还原酶[1.1.1.21]，一种优选的还原有机产物是糖醇。如果依赖烟酰胺辅因子的酶为是乙醛酸还原酶[1.1.1.26]，一种优选的还原有机产物是乙醇酸盐(酯)或甘油酸盐(酯)。
关于特定酶的优选的还原有机产物种类的鉴定如果依赖烟酰胺辅因子的酶是双乙酰还原酶[1.1.1.5]，一种优选的还原有机产物是3-羟基-2-丁酮(acetoin)。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是甘油脱氢酶[1.1.1.6]，一种优选的还原有机产物是甘油。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是丙二醇-磷酸脱氢酶[1.1.1.7]，一种优选的还原有机产物是丙烷-1，2-二醇1-磷酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是L-乳酸脱氢酶[1.1.1.27]，一种优选的还原有机产物是(S)-乳酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是苹果酸脱氢酶[1.1.1.37]，一种优选的还原有机产物是(S)-苹果酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是苹果酸脱氢酶[1.1.1.40]，一种优选的还原有机产物是(S)-苹果酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是异柠檬酸脱氢酶[1.1.1.41]，一种优选的还原有机产物是异柠檬酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是异柠檬酸脱氢酶[1.1.1.42]，一种优选的还原有机产物是异柠檬酸。
进而，如果依赖烟酰胺辅因子的酶是葡萄糖1-脱氢酶[1.1.1.47]，一种优选的还原有机产物是β-D-葡萄糖。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是半乳糖1-脱氢酶[1.1.1.48]，一种优选的还原有机产物是D-半乳糖。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是葡萄糖6-磷酸1-脱氢酶[1.1.1.49]，一种优选的还原有机产物是D-葡萄糖6-磷酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是甘油脱氢酶(NADP)[1.1.1.72]，一种优选的还原有机产物是甘油。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是D-苹果酸脱氢酶[1.1.1.83]，一种优选的还原有机产物是(R)-苹果酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是磷酸甘油酸脱氢酶[1.1.1.95]，一种优选的还原有机产物是3-磷酸甘油酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是葡萄糖1-脱氢酶(NADP)[1.1.1.119，一种优选的还原有机产物是D-葡萄糖，D-甘露糖，2-脱氧-D-葡萄糖或2-氨基-2-脱氧-D-甘露糖。
此外，如果依赖烟酰胺辅因子的酶是丙氨酸脱氢酶[1.4.1.1]，一种优选的还原有机产物是L-丙氨酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是谷氨酸脱氢酶[1.4.1.3]，一种优选的还原有机产物是L-谷氨酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是谷氨酸脱氢酶[1.4.1.4]，一种优选的还原有机产物是L-谷氨酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是亮氨酸脱氢酶[1.4.1.9]，一种优选的还原有机产物是L-亮氨酸。如果依赖烟酰胺辅因子的酶是苯丙氨酸脱氢酶[1.4.1.20]，一种优选的还原有机产物是L-苯丙氨酸。
应当理解，在将优选酶的EC分类与它们的底物相关联先前描述中本发明进而提供了还原上述天然底物的人造结构类似物以产生非天然还原有机产物的方法。
已经发现，在存在某些稳定剂时酶的最佳活性的维持得以改善。因此，在优选的实施方案中，本发明的方法和组合物进而含有依赖烟酰胺辅因子的酶的稳定剂。优选地，上述稳定剂含有硫或磷化合物。优选的含硫稳定剂具有巯基基团，并包括化合物如二巯基苏糖醇(DTT)，巯基乙醇等等。优选的含磷稳定剂具有的磷原子带有可氧化的未共享电子对，如膦或亚磷酸盐，包括化合物如三(m-磺酰基苯基)膦(tris(m-sulfonatophenyl)phosphine)三钠盐(TPPTS)或1，3，5-三氮杂-7-磷杂金刚烷(PTA)。
大多数本发明的依赖烟酰胺辅因子的酶具有半胱氨酸残基。但是，本发明优选的依赖烟酰胺辅因子的酶不含有半胱氨酸残基，因为这样的酶不需要稳定剂的存在。在本发明的实践中优选的两个无半胱氨酸的酶是2，5-二酮-D-葡萄糖酸还原酶和葡萄糖-6-磷酸1-脱氢酶。
应当理解酶经常高度选择性地只产生还原有机产物的两种可能对映异构体中的一种。因此，在优选的实施方案中，本发明提供的方法中的还原有机产物是以实质上的对映异构体过量产生的。
本发明的催化剂还含有至少一种金属盐或复合物。上述金属盐或复合物可以包括含有元素周期表上至少一种过渡金属元素，镧系金属元素或锕系金属元素的任何化合物，组合物或相，前提是上述金属盐或复合物不是含有过渡金属元素，镧系金属元素或锕系金属元素作为其结构的一部分的依赖烟酰胺辅因子的酶。优选地，上述金属盐或复合物含有选自周期表上8，9，10或11族的过渡金属元素。来自8，9，10或11族的优选的元素包括铁，钌，锇，钴，铑，铱，镍，钯，铂或铜。在本发明高度优选的实施方案中，上述金属盐或复合物含有钌，铑，或钯。最优选的金属元素是钌。
金属盐的优选的氧化状态将根据金属盐的特性，方法变量如介质，H2压力和与金属结合的任何配基的性质而不同。应当理解，加入到混合物中的金属的氧化状态可能由于其它反应组分的存在而被改变。金属盐或复合物的种类的例子包括但不限于三氯化铁，二茂铁，五羰基铁，三氯化钌水合物，[Cl2Ru(TPPTS)2]2，四氧化锇，八羰基二钴，三氯化铑，[ClRh(P(C6H5)3)3]，[ClRh(TPPTS)3]，四羰基镍，乙酸镍，[Cl2Pd(P(C6H5)3)2]，Na2[PtCl6]，CuBr2等等。
在本发明的许多实施方案中，金属盐或复合物含有一个或多个配基。配基为任何能够与金属盐或复合物的金属原子配位地，配价地或共价地结合的任何有机或无机化合物。适当的配基的例子包括但不限于水，羟化物，氧化物，胺，酰胺，亚胺，肟，二酰亚胺，含氮的杂环，含氮的大环，腈，膦，磷化物，亚磷酸盐，醇，硫醇，醇化物，硫醇化物，含硫的杂环，含氧的杂环，醚，环醚，硫醚，酚，硫酚，酚盐(phenolate)，硫酚盐(thiophenolate)，卤化物，氢化物，硼氢化物，酮，醛，羧酸，酯，氨基酸，羧酸盐(酯)，丙酮酸盐(酯)(acetonate)，亚胺盐(酯)(iminate)，乙酰丙酮酸盐(酯)(acetylacetonate)，亚氨基丙酮酸盐(酯)(iminoacetonate)，亚氨基亚胺盐(酯)(iminoiminate)，烯烃，炔，二烯烃，烯丙基残基，二烯烃残基，环戊二烯基残基，茚基残基，芳烃，多环芳香残基，烃基残基，一氧化碳，氰化物，一氧化氮，H2，取代甲硅烷残基，硫酸盐，亚砜，砜，磺酸盐(酯)，磷酸盐，膦酸盐或含有一个以上的上述官能团或残基的任何配基。
在本发明优选的实施方案中，金属盐或复合物具有的配基含膦残基，亚磷酸盐残基，一氧化碳，环戊二烯残基，芳香残基，卤化物，或氢化物。膦残基含有三价磷原子残基，具有分子式PR1R2R3。亚磷酸盐残基含有三价的磷原子残基，并具有至少一个烷氧基取代膦的R1，R2，或R3。优选地，膦和/或亚磷酸盐的R1，R2，和R3残基独立地选自氢，烷基，烯烃，芳基或卤化物残基。
在本发明的其它优选的实施方案中，金属盐或复合物具有的配基含膦残基，亚磷酸盐残基，环戊二烯残基或芳香残基，其中上述配基含有一个或多个极性官能团。优选的极性官能团包括一个或多个羟基，羧基，胺，酰胺，酮，醛，硝基和有机化合物的其它类似的极性取代基团。优选的极性官能团还包括阴离子基团，阳离子基团或多聚(亚烷基二醇)基团。优选的阴离子极性官能团包括羧酸盐，硫酸盐，磺酸盐，磷酸盐，膦酸盐等等。优选的阳离子极性官能团包括铵基团，锍基团，磷鎓等等。优选的多聚(亚烷基二醇)官能团包括聚(乙二醇)基团，聚丙二醇基团，聚丁二醇基团等等。
尽管极性官能团可能起各种目的的作用，例如改变金属复合物的特性和反应性，但是在许多优选的实施方案中，极性官能团的作用是增加配基和/或得到的金属盐或复合物的水溶性。一类特别优选的配基是水溶性膦或亚磷酸盐配基，它们可以用作均相催化剂，如Kalck和Monteil所描述(Adv.Organomet.Chem.1992，34，219-284)。一类特别优选的水溶性的膦配基包括具有一个或多个阴离子磺酸基团的膦化合物。这样的化合物的众所周知的例子包括三(m-磺酰基苯基)膦的盐。另一种已知的水溶性膦配基是1，3，5-三氮杂-7-磷杂金刚烷，如Daigle等人所描述(无机合成(Inorg.Synth.)，1998，32，40-45)。
优选的金属盐或复合物在水中明显可溶。显著的水溶性允许金属盐或复合物与水相中的H2反应和/或激活水相中的H2，并快速地转移氢以还原水溶性的烟酰胺辅因子。如果金属盐或复合物中的金属在水中溶解的程度达到至少大约百万分之一份，该金属盐或复合物就是在水中明显可溶的。优选地，上述金属在水中的可溶性达到大于大约百万分之十份的程度。更优选地，上述金属在水中的可溶性达到大于大约百万分之一百份的程度。
H2，即，氢气，是本发明的方法中提供的还原剂。如上文所讨论，与其它化学还原剂相比，H2具有非常显著的实际和环境优点。从成本方面看H2在经济上也非常具有吸引力。下表列出了一系列相关的还原剂的相对成本。
表3一摩尔的各种“氢化物试剂”的成本还原剂 摩尔重量美元/摩尔H22 0.01a葡萄糖180 0.24bNa[CO2H] 68 3bNaBH438 32bNADH 709 26，781cNADPH 833 358，190c“化学试剂市场报告bAldrich试剂目录cSigma试剂目录H2可以于能够有效产生至少一些还原有机产物的任何压力下存在。能够产生至少一些还原有机产物的H2的压力将根据催化剂的组成，反应温度和其它反应条件和变量而不同。优选地，H2是在小于约100个大气压的压力下存在的。更优选地，H2存在于从约0.1大气压到约50大气压的压力下。甚至更优选地，H2存在于从约1大气压到约20大气压的压力下。
本发明的方法可以在诱导不饱和有机化合物的还原，而基本上不使烟酰胺酶的活性变性，或基本上不使烟酰胺辅因子失活的任何温度下进行。优选地，本发明的方法在从大约0℃到大约90℃的温度下进行。更优选地，本发明的方法在从大约0℃到大约45℃的温度下进行。
在一个优选的实施方案中，本发明提供了还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括将不饱和有机化合物和H2在存在催化剂的情况下混合以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有a)pH值在大约6.5到大约9.0之间的基本上水性的缓冲液，b)含有铁，钌，锇，钴，铑，铱，镍，钯或铜的水溶性金属盐或复合物，c)烟酰胺辅因子包括NAD+，NADH，NADP+，NADPH或它们的混合物；和d)在EC系统中归类为1.x.1.y家族的酶的一种烟酰胺辅因子依赖型酶，其中x是1，3，4，5或10。
在另一个优选的实施方案中，本发明提供了一种方法，该方法包括利用一种催化剂混合物将氢气，H2添加到不饱和有机底物中，其中上述催化剂混合物含有一种酶，一种烟酰胺辅因子，一种金属盐或复合物和任选地配基，其中上述金属盐或复合物选自铁，钴，镍，铜，钌，钯，锇，铱。在一个甚至更优选的实施方案中，金属盐或复合物的金属选自钌和钯。
显然在无催化剂时，上述反应的不饱和有机化合物通常不与H2反应，并不能被H2还原以形成本发明的还原有机产物。因此，本发明提供了一种还原不饱和有机化合物的优选的方法，该方法包括a)接触H2和催化剂，以及b)将一种不饱和有机化合物与上述催化剂接触以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有i)至少一种金属盐或复合物，ii)至少一种烟酰胺辅因子；和iii)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，并且其中iv)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且v)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
应当理解在紧接的上文中描述的本发明的实施方案中，H2，催化剂和不饱和有机化合物都可以存在于一种混合物或单一相中，但不饱和有机化合物不一定要和H2直接接触。在一些实施方案中，催化剂(或其某些组分)可以与H2在一个反应相或反应器中接触，而不饱和有机产物与催化剂在不同的相或反应器中接触。接触H2与催化剂，以及接触不饱和有机化合物和催化剂的步骤可以同时发生，也可以依次发生。
进而，在一个替代但类似的实施方案中，本发明提供了一种还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括a)接触H2，至少一种金属盐或复合物，以及至少一种烟酰胺辅因子以形成至少一些还原型的烟酰胺辅因子，并b)在有效形成至少一些还原的有机产物的条件下接触上述还原型的烟酰胺辅因子，依赖烟酰胺辅因子的酶和不饱和有机化合物，其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
在上述实施方案中，所述接触步骤可以同时或依次进行；反应步骤也可以在相同相或反应器中发生。或者，金属盐或复合物，和烟酰胺辅助因子可以在一个反应相或反应器中与H2接触；同时不饱和的有机产物在不同的相或反应器中与酶和还原的有机辅助因子接触。
在上述方法步骤a)的优选实施方案中，H2与金属盐或复合物反应形成至少一些金属氢复合物，该金属氢复合物直接与烟酰胺辅助因子反应将氢从金属氢复合物转移给烟酰胺辅助因子。
在另一方面，本发明提供了还原不饱和有机化合物的组合物，其中含有H2和一种催化剂，所述催化剂含有a)至少一种金属盐或复合物；b)至少一种烟酰胺辅助因子；和c)一种烟酰胺辅助因子依赖型酶，其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，所述催化剂不含氧化还原活性染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
如本文先前所描述，上文所述的许多用H2还原不饱和有机化合物的方法的实施方案利用了氧化还原酶，这些氧化还原酶的活性在存在某些稳定剂时得以增强或维持。在本领域中已知使用某些含硫的稳定剂，特别是本领域中已知使用具有巯基基团的稳定剂，这些稳定剂的例子如二巯基苏糖醇(DTT)，巯基乙醇，等等。
出乎意料地，发现某些含磷的化合物也能够稳定氧化还原酶。酶的稳定性与H2，或上文描述的方法中所使用的不饱和有机化合物是否存在无关。特别是，出乎意料地发现在许多方法中膦或亚磷酸盐能够稳定氧化还原酶。
因此，在本法的一个方面提供了一种稳定氧化还原酶活性的方法，包括将氧化还原酶与膦或亚磷酸盐混合。在本发明优选的实施方案中，氧化还原酶与膦或亚磷酸盐的混合在液体基质中发生。所述液体基质可以包括水，有机溶剂或它们的混合物。优选地，所述液体基质包括实质上含水的缓冲溶液。
优选地，膦或亚磷酸盐与氧化还原酶的混合物与没有膦或亚磷酸盐存在下氧化还原酶的活性的损耗的速率相比，有效减缓氧化还原酶活性的损耗。在不希望被理论所束缚的同时，相信上述膦或亚磷酸盐化合物是作为上述酶的某些氧化敏感组分，包括酶中所含有的半胱氨酸残基，的还原剂。
优选地，上述膦或亚磷酸盐包括磷衍生物PRn(O-R)3-n，其中n是从0到3的整数。优选地，上述R基团含有从1到大约10个碳原子。R基团(不论是与磷或氧结合)独立地选择，并且可以是相同或不同的。优选地，R基团是烃基，或取代烃基基团，包括烷基，环烷基，芳香和杂芳基。
优选地，一个或多个R基团被一个或多个极性基团取代。优选的极性基团包括阴离子基团的盐如磺酸盐和羧酸盐基团；阳离子基团的盐如烷基铵基团或极性但电荷中性的基团如羟基，氨基，醇或多聚亚烷基二醇基团。聚乙二醇基团是优选的多聚亚烷基二醇基团。极性基团被认为是有利于提高膦或亚磷酸盐稳定剂的效力，因为极性基团倾向于提高膦或亚磷酸盐的水溶性，以便它们能够更有效地与同样是水溶性的氧化还原酶相互作用。
实验发表以下实施例以便为本领域的具有普通技术的人员提供关于上述化合物和相关的过程和方法是如何产生、使用和评测的完整的公开内容和描述，其意图仅仅是对本发明进行示范，而不是用来限制发明者所认为的他们的发明的范围。尽管在数字方面努力保证准确性(例如，数量，温度等等)，但是应该考虑到一些错误和偏离。除非另外说明，含量是重量上的含量，温度是℃(摄氏度)，或是环境的温度，压力是处于或接近于大气压。
材料和方法三(m-磺酰基苯基)膦三钠盐(TPPTS)购自Strem Chemical，二苯基膦基苯-3-磺酰钠(TPPMS)购自TCI America。Thermanaerobium brockii的乙醇脱氢酶(TBADH，EC 1.1.1.2)，β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)，β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)和它们相应的还原形式购自Sigma Chemical并储存于冰箱中(-10℃)。TBADH的制备如美国专利号4,352,885中所述。RuCl3-水合物(38.4％Ru)购自Colonial Metals，Inc。1，3，5-三氮杂-7-磷杂金刚烷(PTA)是按照Daigle等人的方法制备(无机合成(Inorg.Synth.)1998，32，40-45)。[Cl2Ru(TPPTS)2]2按照Hernandez和Kalck的方法制备(J.Mol.Catal.AChem，1993，116，117-130)。Cl2Ru(PTA)4按照Darensborg等人的方法制备(Inorg.Chem.1994，33，200-08)。磷酸缓冲液用KHPO4制备。用异丙醇再生NADP还原2-庚酮的方法改造自Keinan等人的方法(美国化学学会会刊(J.Am.Chem.Soc.)1986，108，162)。1H和13C的NMR谱图是在Varian Gemini-300分光计上记录。NAD+，NADH，NADP+和NADPH的参照样品溶于D2O中，并且报告它们相对于3-(三甲基硅烷基)丙酸钠(TMSP)的化学位移(chemical shift)(δ)。化学位移的测定按照Ragg等人(生物化学生物物理杂志年报(J.Biochim.Biophys.Acta)1991，1076，49)和Oppenheimer(美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)1971，68，3200)的方法进行。GLC在HP6890气相色谱上用30’DB-FFAP毛细管柱和火焰电离探测进行。(R)-(-)-2-庚醇(95％)和(S)-(+)-2-庚醇(99％，97％ee)购自Aldrich Chemical。通过标准化的三氟乙酸酐处理，将样品转化为它们的三氟乙酸酯对样品进行分析。利用Cyclodex-B层析柱(30m×0.25，0.25μ薄膜)在40℃通过与(R)-和(S)-2-庚醇标准的比较，测定由酶促还原产生的对映异构体过量的(S)-2-庚醇。在这些条件下(R)-2-庚醇和(S)-2-庚醇的三氟乙酸酯的沸留时间分别为28.15分钟和28.77分钟。
实施例1实施例1表明在存在含有钌复合物，TBADH和NADP+的催化剂的条件下，H2可以被用于将2-丁酮转化成2-丁醇。NADP+(28.0mg，36.6μmol)被置于2ml的0.1M的磷酸缓冲液中，并用NaOH将pH值调到8.1。在该溶液中加入TBADH(1.2mg，8.8单位)并置于80ml的Fisher-Porter瓶中。抽空Fisher-Porter瓶并重新用氩气充满三次，然后在氩气流下加入[Cl2Ru(TPPTS)2]2(6.4mg，5.0μmol)和2-丁酮(5μl)。抽空Fisher-Porter瓶并充入70psi的H2，然后加热到40℃两小时。将气体从瓶中释放，对液体样品的GLC分析表明产生了9.5μmol的2-丁醇。
比较实施例1a比较实施例1a表明没有酶(TBADH)时在实施例1中所应用的条件不产生反应。
NADP+(39.0mg，51.5μmol)被置于2ml的0.1M的磷酸缓冲液中，并用NaOH将该溶液的pH值调到8.1并置于80ml的Fisher-Porter瓶中。抽空Fisher-Porter瓶并重新用氩气充满三次，然后在氩气流下加入[Cl2Ru(TPPTS)2]2(8.8mg，6.9μmol)和2-丁酮(10μl)。抽空Fisher-Porter瓶并充入70psi的H2，然后加热到40℃两小时。将气体从瓶中释放，对液体样品的GLC分析表明未产生2-丁醇。在减压下将上述反应溶液汽提至干燥，并将残余物溶解于D2O中。1H NMR分析表明仅仅残留有痕量的NADP+，而NADPH是主要的残留物。
实施例2实施例2表明在含有钌复合物，TBADH和NADP+的催化剂存在的条件下，H2能以显著的对称异构性将2-庚酮转化成2-庚醇。
在氩气流下，在一个带有微量液体取样管的80ml Fisher-Porter瓶中充入20ml的0.1M的磷酸缓冲液(pH7.0)，2-庚酮(100μl，718μmol)，TPPTS(74mg，130.7μmol)，NADP+(10mg，13.1μmol)和TBADH(2.7mg，19.8单位)。最后加入钌催化剂[Cl2Ru(TPPTS)2]2(17mg，6.5μmol)并密封Fisher-Porter瓶，抽空，充入70psiH2。重复两次抽空和充入H2，然后用油浴将上述装置加热到60℃。10小时后通过上述液体取样器取出的微量样品的GC分析表明产生了227.8μmol的2-庚醇。继续4小时后另外积累了13.0μmol(240.8μmol)。从上述瓶中释放压力，并通过手性GC表明2-庚醇为70.5％(S)和29.5％(R)(41.0％ee)。催化剂组分的循环数NADP+To＝18.4。
实施例3实施例3表明钌催化剂[Cl2Ru(TPPTS)2]2是通过H2还原NAD(P)+的催化剂前体。
NADP+(36.0mg，47.0μmol)被置于2ml的0.1M的磷酸缓冲液中。用NaOH将该溶液的pH值调到8.3并置于80ml的Fisher-Porter瓶中。抽空Fisher-Porter瓶并重新用氩气充满三次，然后在氩气流下加入[Cl2Ru(TPPTS)2]2(9.7mg，3.7μmol)。抽空Fisher-Porter瓶并充入70psi的H2，然后加热到40℃两小时。在减压下将挥发性气体除去，并将样品溶于D2O中。往上述样品中加入20μl三甲基甲硅烷基丙酸标准溶液。1H NMR积分表明在这样的条件下产生了29.0μmol的NADPH。NADP+1H(D2O)δ9.35(s)N2，9.17(d，0.6Hz)N6，8.84(d，1.0)N4，8.42(s)A2，8.21(t，0.7)N5，8.11(s)A8，6.10(d，5.2Hz)N1’，6.02(d，)A1’，4.77(t，)A2’，4.77(t，)A2’，4.56(br s)，4.51(br s)，4.45(br s)，4.40(br s)，4.26(br s).NADPH1H(D2O)δ8.48(s)A8，8.21(s)A2，6.94(s)N6，6.13(d，)A1’，5.98(d，0.7)N1’，8.11(s)A8，6.10(d，5.2Hz)N1’，6.02(d，)A1’，4.78(t，)A2’，4.71(t，)A2’，4.51(t，)，4.39(br s)，4.22(br m)，4.09(br s)，2.71(dd，)P4实施例4实施例4表明钌催化剂[Cl2Ru(TPPTS)2]2是通过H2还原NAD+的催化剂前体。
NAD+(34.0mg，38.0μmol)被置于2ml的0.1M的磷酸缓冲液中。用NaOH将该溶液的pH值调到8.1并置于80ml的Fisher-Porter瓶中。抽空Fisher-Porter瓶并重新用氩气充满三次，然后在氩气流下加入[Cl2Ru(TPPTS)2]2(6.9mg，2.6μmol)。抽空Fisher-Porter瓶并充入70psi的H2，并在23℃搅拌17.0小时。在减压下将挥发性气体除去，并将样品溶于D2O中。往上述样品中加入20μl三甲基甲硅烷基丙酸标准溶液。1H NMR积分表明在这样的条件下产生了9.2μmol的NADH。NAD+1H(D2O)δ9.35(s)N2，9.17(d，0.6Hz)N6，8.84(d，1.0)N4，8.42(s)A2，8.21(t，0.7)N5，8.11(s)A8，6.10(d，5.2Hz)N1’，6.02(d，)A1’，4.77(t，)A2’，4.56(brs)，4.51(br s)，4.45(br s)，4.40(br s)，4.26(br s).NADH1H(D2O)δ8.48(s)A8，8.21(s)A2，6.94(s)N6，6.13(d，)A1’， 5.98(d，0.7)N1’，8.11(s)A8，6.10(d，5.2Hz)N1’，6.02(d，)A1’，4.78(t，)A2’，4.71(t，)A2’，4.51(t，)，4.39(br s)，4.22(br m)，4.09(br s)，2.71(dd，)P4.
实施例5实施例5表明碘化物不是衍生自钌复合物[Cl2Ru(TPPTS)2]2的催化剂的毒物。
NAD+(34.0mg，38.0μmol)被置于2ml含有0.07M碘化钠的0.1M的磷酸缓冲液中。用NaOH将该溶液的pH值调到8.1并置于80ml的Fisher-Porter瓶中。抽空Fisher-Porter瓶并重新用氩气充满三次，然后在氩气流下加入[Cl2Ru(TPPTS)2]2(7.7mg，2.9μmol)。抽空Fisher-Porter瓶并充入70psi的H2，并搅拌至23℃ 13.0小时。在减压下将挥发性气体除去，并将样品溶于D2O中。往上述样品中加入20μl三甲基甲硅烷基丙酸标准溶液。1H NMR积分表明在这样的条件下产生了7.4μmol的NADH。
实施例6实施例6表明其它水溶性的钌复合物是用H2再生辅因子的催化剂。
用与上述实施例4相同的方法Cl2Ru(PTA)4(4.8mg，6.0μmol)和NAD+(33.0mg，50.0μmol)在70psi和40℃反应15.5小时。1H NMR检测表明在这样的条件下产生了11.0μmol的NADH。
实施例7实施例7表明在上述实施例中的钌复合物中使用的膦配基对于产生辅因子再生的催化剂是必须的。
用与上述实施例4相同的方法RuCl3-水合物(1.6mg，38.4％Ru，6.0μmol)和NAD+(33.0mg，50.0μmol)在70psi和40℃反应2.5小时。1H NMR检测表明在这样的条件下未产生NADH。
实施例8实施例8表明用于上述实施例的钌复合物对于用氢气再生辅因子是必须的。
按照实施例4的方法，但是不包括钌催化剂，NAD+(33.0mg，50.0μmol)被置于Fisher-Porter瓶中的2ml含有0.07M碘化钠的0.1M(aq)KHPO4中并用NaOH将该溶液的pH值调到8.15。在建立H2-环境(70psig)并加热到40℃ 2.5小时后1H NMR分析表明未产生NADH。
实施例9实施例9表明氢气对于以上实施例中所描述的辅因子的再生是必要的。
按照实施例4的方法，[Cl2Ru(TPPTS)2]2(7.9mg，6.0μmol)和NAD+(33.0mg，50.0μmol)被置于2ml含有0.07M碘化钠的0.1M(aq)KHPO4中，并且反应溶液之上的气体环境为氩气而不是H2。在加热到40℃ 2.5小时后，1H NMR分析表明并无NADH。用H2代替氩气环境后产生NADH并且没有明显的催化剂失活。
实施例10实施例10表明TPPTS可以被用作TBADH的稳定剂。
在氩气下磷酸缓冲液(10ml，0.1M，pH＝7.0)被置于100ml的Schlenk管中。然后在氩气流下加入2-庚酮(4.92g，43.1mmol)，异丙醇(1.57g 26.1mmol)，十七烷(41.0μl)，TPPTS(23mg，40.0μmol)，NADP+(0.4mg，0.5μmol)和TBADH(2.7mg，19.8单位)。在抽气和重新充满氩气三次后将上述装置用油浴加热到38℃。每5小时进行的GC分析表明在最初的20小时连续产生2-庚醇，产生的速率相应于～210循环的NADP+每小时(在21小时中总共产生了2.17mmoles的2-庚醇)。继续24小时后2-庚醇的产量并未改变。最终的2-庚醇产量相当于4,343循环的NADP+。
比较实施例10a比较实施例10a显示无稳定剂时TBADH的生产率。
加入除了水溶性膦(TPPTS)外的，同样量的用异丙醇还原2-庚酮的所有试剂(实施例10)，用油浴加热到38℃ 23小时。2-庚醇的产量为0.13mmol，相当于总共271循环的NADP+。
比较实施例10b比较实施例10b显示用二巯基苏糖醇(DTT)作为稳定剂时TBADH的生产率。
用比较实施例10a中所述的方法，加入除了两倍量的2-庚酮(9.84，86.2mmol)和用DTT(6mg，40μmol)代替TPPTS作为稳定剂外的同样量的所有试剂，异丙醇对2-庚酮的还原在38℃进行19小时，产生2.51mmol的2-庚醇，相当于总共5,021循环的NADP+。
比较实施例10c比较实施例10c显示用巯基乙醇作为稳定剂时TBADH的生产率。
用实施例10中所述的方法，加入同样量的所有试剂，但用巯基乙醇作为稳定剂(2.8μl，40μmol)代替DTT，异丙醇对2-庚酮的还原在38℃进行22小时，产生2.56mmol的2-庚醇，相当于总共5,121循环的NADP+。
实施例11实施例11表明三苯基膦(TPP)可以用作TBADH的稳定剂。
用实施例10中所述的方法，加入同样量的所有试剂，但用三苯基膦作为稳定剂(10mg，40μmol)代替TPPTS，异丙醇对2-庚酮的还原在37℃进行19小时，产生2.15mmol的2-庚醇，相当于总共4,301循环的NADP+。
实施例12实施例12表明“单磺酰化三苯基膦”(TPPMS)可以被用作TBADH的稳定剂。
用实施例10中所述的方法，加入同样量的所有试剂，但用三苯基膦作为稳定剂(15mg，40μmol)代替TPPTS，异丙醇对2-庚酮的还原在38℃进行16小时，产生1.93mmol的2-庚醇，相当于总共3,859循环的NADP+。
通过本申请，参考了各种出版物。这些出版物的公开内容全文在本申请中全文引入作为参考。
对本发明可以进行各种变化和改造而不偏离本发明的范围和精神，这对于本领域的技术人员将是显而易见的。通过对在此公布的本发明的说明书和实践的思考，本发明的其它实施方案对于本领域的技术人员将是显而易见的。上述说明书和实施例仅仅是示例性的，本发明的真正范围和精神在下文的权利要求书中指出。
权利要求
1.一种还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括将不饱和的有机化合物和H2在存在催化剂的情况下混合以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有a)至少一种金属盐或复合物，b)至少一种烟酰胺辅因子；和c)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
2.权利要求1中的方法，其中上述金属盐或复合物含有元素周期表第8，9，10或11族的金属。
3.权利要求1中的方法，其中上述金属盐或复合物含有铁，钌，锇，钴，铑，铱，镍，钯，铂或铜。
4.权利要求1中的方法，其中上述金属盐或复合物含有钌，铑或钯。
5.权利要求1中的方法，其中上述金属盐或复合物含有钌。
6.权利要求1中的方法，其中上述催化剂分散于液体介质中。
7.权利要求6中的方法，其中液体基质含有pH在大约6.5到大约9.0之间的缓冲水溶液。
8.权利要求1中的方法，其中上述金属盐或复合物含有一种或多种配基。
9.权利要求8中的方法，其中上述配基包括膦残基，亚磷酸盐残基，一氧化碳，环戊二烯残基，芳香残基，卤化物或氢化物。
10.权利要求8中的方法，其中上述配基包括膦残基，亚磷酸盐残基，环戊二烯残基或芳香残基，其中上述配基具有极性官能团。
11.权利要求10中的方法，其中上述极性官能团是阴离子基团，阳离子基团或多聚(亚烷基二醇)基团。
12.权利要求8中的方法，其中上述配基包括1，3，5-三氮杂-7-磷杂金刚烷或三(m-磺酰苯基)膦的盐。
13.权利要求1中的方法，其中上述烟酰胺辅因子包括NAD+，NADP+，NADH，NADPH或它们的混合物。
14.权利要求1中的方法，其中不饱和有机化合物包括a)酮，醛，羧酸，羧酸酯或酰胺，b)酮，醛，羧酸，羧酸酯或酰胺的α-B不饱和衍生物，c)具有烯属不饱和基团的脂肪酸，甘油单酯，甘油二酯，或甘油三酯，d)烯烃，芳香化合物或杂芳香化合物(heteroaromatic compound)，e)亚胺或肟，或者f)糖，氨基酸，肽或蛋白，其中上述糖，氨基酸，肽或蛋白具有不饱和基团。
15.权利要求1中的方法，仅仅具有一种依赖烟酰胺辅因子的酶。
16.权利要求1中的方法，其中依赖烟酰胺辅因子的酶是在EC分类系统中归类于1.x.1.y家族的酶，其中x是1，3，4，5或10。
17.权利要求1中的方法，其中依赖烟酰胺辅因子的酶是在EC分类系统中归类于1.1.1.1，1.1.1.2，1.1.1.4，1.1.1.5，1.1.1.6，1.1.1.7，1.1.1.14，1.1.1.18，1.1.1.21，1.1.1.22，1.1.1.26，1.1.1.27，1.1.1.30，1.1.1.37，1.1.1.40，1.1.1.41，1.1.1.42，1.1.1.47，1.1.1.48，1.1.1.49，1.1.1.50，1.1.1.51，1.1.1.53，1.1.1.55，1.1.1.67，1.1.1.72，1.1.1.83，1.1.1.95，1.1.1.119，1.1.1.122，1.1.1.159，1.1.1.176，1.3.1.14，1.4.1.1，1.4.1.2，1.4.1.3，1.4.1.4，1.4.1.5，1.4.1.6，1.4.1.7，1.4.1.8，1.4.1.9，1.4.1.10，1.4.1.11，1.4.1.12，1.4.1.13，1.4.1.14，1.4.1.15，1.4.1.16，1.4.1.17，1.4.1.18，1.4.1.19，或1.4.1.20家族的酶。
18.权利要求1中的方法，其中依赖烟酰胺辅因子的酶是在EC分类系统中归类于1.1.1.1，1.1.1.2，1.1.1.5，1.1.1.6，1.1.1.7，1.1.1.14，1.1.1.18，1.1.1.21，1.1.1.26，1.1.1.27，1.1.1.37，1.1.1.40，1.1.1.41，1.1.1.42，1.1.1.47，1.1.1.48，1.1.1.49，1.1.1.72，1.1.1.83，1.1.1.95，1.1.1.119，14，1.4.1.1，1.4.1.3，1.4.1.4，1.4.1.9，或1.4.1.20家族的酶。
19.权利要求1中的方法，其中依赖烟酰胺辅因子的酶是在EC分类系统中归类于1.1.1.1或1.1.1.2家族的酶。
20.权利要求1中的方法，其中依赖烟酰胺辅因子的酶不含有半胱氨酸氨基酸残基。
21.权利要求20中的方法，其中依赖烟酰胺辅因子的酶包括2，5-二酮-D-葡萄糖酸还原酶或葡萄糖-6-磷酸和1-脱氢酶。
22.权利要求1中的方法，进而含有依赖烟酰胺辅因子的酶的稳定剂。
23.权利要求22中的方法，其中上述稳定剂包括膦或亚磷酸盐。
24.权利要求1中的方法，其中还原的有机产物是以大量的对映异构体过量产生的。
25.一种还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括将不饱和有机化合物和H2在存在催化剂的情况下混合以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有a)pH在大约6.5到大约9.0之间的一种基本上水性的缓冲溶液，b)一种水溶性的金属盐或复合物，包括铁，钌，锇，钴，铑，铱，镍，钯或铜，c)一种烟酰胺辅因子，包括NAD+，UNADH，NADP+，NADPH或它们的混合物；和d)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，其归类于EC系统1.x.1.y家族的酶，其中x是1，3，4，5或10。
26.一种还原不饱和有机化合物的方法，包括a)接触H2和催化剂，以及b)将一种不饱和有机化合物与上述催化剂接触以形成还原的有机产物，其中上述催化剂含有i)至少一种金属盐或复合物，ii)至少一种烟酰胺辅因子；和iii)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，并且其中iv)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且v)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
27.还原不饱和有机化合物的方法，该方法包括a)将H2与至少一种金属盐或复合物，和至少一种烟酰胺辅因子接触以形成至少一些还原型的烟酰胺辅因子，并b)将上述还原型的烟酰胺辅因子与依赖烟酰胺辅因子的酶以及不饱和有机化合物在有效的条件下接触以形成至少一些还原的有机产物，其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
28.权利要求27中的方法，其中a)H2与金属盐或复合物反应以形成至少一些金属氢复合物，并且b)上述金属氢复合物直接与烟酰胺辅因子反应以便将氢从金属氢复合物转移到上述烟酰胺辅因子。
29.一种方法，包括利用一种催化剂混合物将氢气，H2，加入到不饱和有机底物的方法，其中上述催化剂含有酶，烟酰胺辅因子，金属盐或复合物和任选地配基，其中上述金属盐或复合物的金属选自铁，钴，镍，铜，钌，钯，锇和铱。
30.权利要求29中的方法，其中金属盐或复合物的金属选自钌和钯。
31.一种用于还原不饱和有机化合物的组合物，含有H2和一种催化剂，上述催化剂含有a)至少一种金属盐或复合物，b)至少一种烟酰胺辅因子；和c)一种依赖烟酰胺辅因子的酶，其中i)当金属盐或复合物是羰基铂簇复合物时，上述催化剂不含氧化还原活性染料；并且ii)当金属盐或复合物是一种膦铑复合物时，依赖烟酰胺辅因子的酶不是马肝乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的混合物。
32.一种稳定氧化还原酶活性的方法，包括将膦或亚磷酸盐与氧化还原酶混合。
33.权利要求32中的方法，其中膦或亚磷酸盐包括磷衍生物PRn(O-R)3-n，其中n是从0到3的整数，R基团可以相同或不同，并且R基团包括烃基，取代烃基，芳香或杂芳香基团。
34.权利要求33中的方法，其中一个或多个R基团被一个或多个极性基团取代。
35.权利要求34中的方法，其中上述极性基团包括磺酸盐(酯)，羧酸盐(酯)，氨基，烷基铵，羟基或聚亚烷基二醇基团。
36.权利要求32中的方法，其中上述混合在液体基质中发生。
全文摘要
本发明提供了一种还原不饱和有机化合物的方法,该方法包括在存在一种催化剂的条件下将不饱和有机化合物与H
文档编号C12P21/00GK1352681SQ00807455
公开日2002年6月5日 申请日期2000年3月10日 优先权日1999年3月11日
发明者R·T·赫姆布雷, P·S·瓦根克内希特, J·M·彭尼 申请人:伊斯曼化学公司