用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试剂盒的制作方法

专利名称：：用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试剂盒的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用于检测支原体的组合物和试剂盒，更具体地，本发明涉及用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试剂盒。
背景技术：
：解脲支原体(Ureaplasmaurealyticum,UU)、人型支原体(Mycoplasmahominis,MH)及生殖器支原体(Mycoplasmagenitalium,MG)是引起人群泌尿生殖系统感染的常见寄生菌。人泌尿生殖道支原体感染不仅可引起泌尿生殖器官发生病变，如前列腺炎、附睾炎、阴道炎、宫颈炎等，还可侵犯泌尿生殖器官所属的淋巴结，并通过血行播散侵犯全身各重要组织和器官，引起新生儿脑膜炎、先天性肺炎、不孕、流产、早产、死胎、低体重儿等各类现象。因此，人泌尿生殖道支原体感染导致的一系列病变，严重危害患者的身心健康，已经成为世界性的严重社会问题和公共卫生问题，被认为是当今危害人群健康的重要疾病之ο目前对于解脲支原体、人型支原体以及生殖器支原体的检测方法主要有涂片检查、细菌和细胞培养、血清学实验和聚合酶链式反应(PCR)法。其中最准确的且可以同时定性定量的方法为实时荧光定量PCR法。所述实时荧光定量PCR法是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的累积实时监测整个PCR过程，最后通过标准曲线对待测模板进行定量分析的方法。此外，由于解脲支原体、人型支原体以及生殖器支原体引起的疾病症状类似，但是在临床上需要分别进行针对性治疗；然而所述三种支原体存在一定的序列相似性，因此在合并感染的患者中得到的混合样本进行PCR扩增时会产生相互干扰，继而很容易产生错误的诊断结果，延误最佳的针对性治疗时机。因此一般对疑似症状的病人只能通过逐一检测致病微生物解脲支原体、人型支原体以及生殖器支原体来尽量确诊，造成操作过程费时费力、成本高并且准确率低，还不利于实现对混合感染(两种以上支原体感染)的高效准确的检测。综上亟需能够实现同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试齐U盒。
发明内容本发明的目的是克服现有检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试剂盒存在所述三种支原体相互干扰，不能准确同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的缺点，提供一种用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物，使用该组合物可以实现在同一反应体系中同时准确检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体，并且不存在相互干扰的缺陷，减少操作人员的操作时间，降低检测成本。本发明的第二个目的是提供包括所述组合物的用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的试剂盒。本发明提供了一种用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物，其中，所述组合物包括以下序列1)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；2)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；3)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；4)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者C)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；5)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者C)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；6)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者C)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；7)长度为15-45个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列；8)长度为15-45个核苷酸的与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo8所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列；9)长度为15-45个核苷酸的与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo9所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或C)具有至多5个核苷酸差异的序列；其中，7)_9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且在除5'端外的任意一个位置上带有淬灭基团。本发明还提供了一种用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的试剂盒，该试剂盒含有聚合酶链式反应液、耐热DNA聚合酶及阴性对照品，其中，所述试剂盒还含有本发明的组合物。本发明的用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试剂盒可以在一个反应体系内同时检测三种不同的支原体，不仅提高了泌尿生殖系统感染性疾病的早期检出率，而且减少了操作人员的操作时间，降低了检测成本，还减轻了病人经济负担。图1为本发明实施例1在PCR引物扩增解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体靶核酸序列后所得PCR产物的电泳照片；图2为本发明实施例1同时检测尿液样品中解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的荧光定量PCR图；图3为本发明实施例2同时检测尿液样品中解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的荧光定量PCR图；图4为本发明实施例3同时检测前列腺液样品中解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的荧光定量PCR图；图5为本发明实施例4同时检测宫颈分泌物样品中解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的荧光定量PCR图；图6为IO3拷贝/毫升、IO4拷贝/毫升、IO5拷贝/毫升和IO6拷贝/毫升的解脲支原体阳性对照品的荧光定量PCR叠加图；图7为IO3拷贝/毫升、IO4拷贝/毫升、IO5拷贝/毫升和IO6拷贝/毫升的人型支原体阳性对照品的荧光定量PCR叠加图；图8为IO3拷贝/毫升、IO4拷贝/毫升、IO5拷贝/毫升和IO6拷贝/毫升的生殖器支原体阳性对照品的荧光定量PCR叠加图。具体实施例方式本发明提供了一种用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物，其中，所述组合物包括以下序列1)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；2)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者C)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；3)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者C)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；4)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者C)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；5)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者C)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；6)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；7)长度为15-45个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列；8)长度为15-45个核苷酸的与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo8所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列；9)长度为15-45个核苷酸的与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo9所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列；其中，7)_9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且在除5'端外的任意一个位置上带有淬灭基团。在本发明中，“引物”可以是天然的、合成的或者是二者嵌合的寡核苷酸。引物可以作为在一定条件下诱发DNA复制的起始点。在上述条件下可以诱发与靶核酸链互补的引物扩增产物，即在四种不同的三磷酸脱氧核糖核苷及一种聚合试剂(DNA聚合酶或逆转录酶)存在下，在一种合适的缓冲液中，在合适的温度下进行上述扩增。优选的引物是单链寡脱氧核糖核苷酸。引物的合适长度取决于该引物的设计用途，但一般在15-30个核苷酸之间，较短的引物分子通常需要较低的温度，从而与模板形成充分稳定的杂交复合物。引物不必反映模板的准确序列，但必须充分互补，以与模板杂交并引发DNA合成。在本发明中，术语“探针”是指能识别特异核苷酸序列的带标记的一段单链DNA或RNA分子，它只与被检测的特定核苷酸序列结合。探针位置尽可能地靠近上游引物。为保证结合特异性，探针的合适长度一般在15-45个核苷酸之间。此外，本领域技术人员公知，引物和探针上少数核苷酸残基的变化，尤其是引物和探针在5’端出现的少数核苷酸的改变，只能造成该核苷酸的错配，但不会造成整个DNA复制合成过程无法进行，进而不会引起PCR产物产量的明显波动。因此由上述“与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列”以及“与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列”也可以得到正确的足够的PCR荧光信号，因此所述序列也应该包括在本发明中。另外，对本发明的引物/探针可以实施本领域常规的修饰以提高其稳定性，例如，硫化(磷酸骨架上的非桥氧原子被硫原子代替)、甲基化、形成肽核酸、以及在核糖的2'位置引入如甲基和/或氟等的取代基等。优选地，本发明所述组合物包括以下序列1)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；2)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；3)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；4)长度为22-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；5)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；6)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；7)长度为25-45个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为25-75%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多3个核苷酸差异的序列；8)长度为25-45个核苷酸的与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为25-75%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:8所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多3个核苷酸差异的序列；9)长度为25-45个核苷酸的与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为25-75%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:9所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多3个核苷酸差异的序列；其中，7)_9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且除5'端外的任意一个位置上带有淬灭基团。更优选地，本发明所述组合物包括以下序列1)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；2)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；3)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；4)长度为22-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；5)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；6)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；7)长度为25-45个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo7所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段；或者d)与a)或b)或c)具有一个或两个核苷酸差异的序列；8)长度为25-45个核苷酸的与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo8所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段；或者d)与a)或b)或c)具有一个或两个核苷酸差异的序列；9)长度为25-45个核苷酸的与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo9所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段；或者d)与a)或b)或c)具有一个或两个核苷酸差异的序列；其中，7)_9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且除5'端外的任意一个的位置上带有淬灭基团。进一步优选地，本发明所述组合物包括以下序列1)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:1所示的序列，或者b)SEQIDNo1所示的序列的至少18个核苷酸连续的片段；2)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:2所示的序列，或者b)SEQIDNo2所示的序列的至少16个核苷酸连续的片段；3)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:3所示的序列，或者b)SEQIDNo3所示的序列的至少18个核苷酸连续的片段；4)长度为22-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo4所示的序列，或者b)SEQIDNo4所示的序列的至少18个核苷酸连续的片段；5)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:5所示的序列，或者b)SEQIDNo5所示的序列的至少18个核苷酸连续的片段；6)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，或者b)SEQIDNo6所示的序列的至少16个核苷酸连续的片段；7)长度为25-45个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少18个核苷酸连续的片段，或者c)SEQIDNo7所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段；8)长度为25-45个核苷酸的与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少18个核苷酸连续的片段，或者c)SEQIDNo8所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段；9)长度为25-45个核苷酸的与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互补序列，或者b)SEQIDNo9所示的序列的至少18个核苷酸连续的片段，或者c)SEQIDNo9所示序列的互补序列的至少18个核苷酸连续的片段；其中，7)_9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且除5'端外的任意一个的位置上带有淬灭基团。进一步优选地，本发明所述组合物由以下序列组成1)用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的序列为如SEQIDNo1所示的序列；2)用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的序列为如SEQIDNo2所示的序列；3)用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的序列为如SEQIDNo3所示的序列；4)用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的序列为如SEQIDNo4所示的序列；5)用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的序列为如SEQIDNo5所示的序列；6)用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的序列为如SEQIDNo6所示的序列；7)与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的序列为如SEQIDNo7所示的序列或其互补序列；8)与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的序列为如SEQIDNo8所示的序列或其互补序列；9)与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的序列为如SEQIDNo9所示的序列或其互补序列；其中，7)_9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且在在3’端带有淬灭基团。引物和探针的GC含量与解链温度密切相关，在保证PCR荧光定量的准确性方面起重要作用，本发明所述引物和探针的GC含量还可以更进一步优选35-65%。本发明的组合物中探针上所带有的所述荧光报告基团和所述淬灭基团可以为本领域常用的用作荧光报告基团和淬灭基团的物质。只要满足所述荧光报告基因在所述淬灭基团的上游，且所述荧光报告基团的发射波长小于所述淬灭基团的吸收波长。所述荧光报告基团和所述淬灭基团按照上述原则可以选自由6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,FAM)、四氣_6_幾基焚光素(tetrachloro-6-carboxyfluorescein,TET)、六氯-6-甲基荧光素(Hexachloro-6-methylfluorescein，HEX)、6_羧基四甲基罗丹明(6-carboxytetramethylrhodamine，TAMRA)、磺酰罗丹明(Sulforhodamine101，TexasRed)、羧基_X_罗丹明(Carboxy-x-rhodamine，R0X)、花菁3(cyanine3，Cy3)、花菁3.5(cyanine3.5，Cy3.5)、花菁5(cyanine5,Cy5)、花菁5.5(cyanine5.5，Cy5.5)、黑洞淬灭剂1(BlackHoleQuencher1，BHQ1)、黑洞淬灭剂2(BlackHoleQuencher2，BHQ2)、黑洞淬灭剂3(BlackHoleQuencher3，BHQ3)、4_(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸(4-(4，-dimethylaminophenylazo)benzoicacid,DABCYL)、6-羧基-4，，5，-二氯_2，，7，-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯(6-CarboXy-4，，5，-dichloro-2，，7，-dimethoxyfluorescein，JOE)和VIC荧光染料(美国应用生物系统公司，AppliedBiosystems.Inc，可商购)所组成的组中。优选地，所述荧光报告基团选自由6_羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、VIC荧光染料、四氯-6-羧基荧光素、羧基-X-罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、磺酰罗丹明、6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁5和花菁5.5所组成的组中；所述淬灭基团选自由6-羧基四甲基罗丹明、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、BHQ1、BHQ2和BHQ3所组成的组中。更优选地，按照下表1所示来选择荧光报告基团和淬灭基团。黑洞淬灭剂(BHQ)可以从例如生物搜索技术公司(BiosearchTechnologies,Inc)等公司商购。表1常见淬灭基团以及与之相匹配的荧光报告基团<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>可以通过要求完成引物合成的公司在合成引物和探针的同时，添加所述荧光报告基团和淬灭基团作为标记。所述引物合成公司包括但不限于，例如，柏业贸易(上海)有限公司(Bioneer)、上海生工生物工程技术服务有限公司、宝生物工程(大连)有限公司、上海英骏生物技术有限公司(Irwitrogen)等。可以采用本领域常用的荧光定量PCR仪完成本发明的荧光PCR定性和定量过程。所述荧光定量PCR仪包括但不限于，例如，美国应用生物系统公司(AppliedBiosystems)的ABI7000型、7300型、7500型、7700型、7900型和St印One型荧光定量PCR仪等；德国艾本德股份公司(EppendorfAG)的Mastercyclereprealplex等；瑞士罗氏公司(RocheGroup)的=LightCycler2.0、LightCycler480禾口Rotor—Gene3000等；美国Stratagene公司的Mx3005P、Mx3000P、Mx4000等；中山大学达安基因股份有限公司的DA7600等；杭州博日科技有限公司的LineGeneI、LineGeneII、LineGeneK、LineGene3310/3320和LineGene9600等；以及上海宏石医疗科技有限公司的SLAN等。本发明还提供了一种用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的试剂盒，该试剂盒含有聚合酶链式反应液、耐热DNA聚合酶及阴性对照品，其中，所述试剂盒还含有本发明的组合物。本发明的试剂盒除了使用本发明的组合物作为引物和探针外，试剂盒的其他组成成分可以使用本领域常用的检测支原体PCR检测法所用到的成分。比如可以使用本领域常用的聚合酶链式反应液、耐热DNA聚合酶及阴性对照品。本发明的试剂盒既可以对待测样品中的解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体进行同时的定性检测，也可以对待测样品中的解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体进行同时的定量检测。此外，由于本发明试剂盒的特异性和灵敏度高。即使不使用阳性对照品，如果待测生物样品产生了PCR荧光信号，确诊患者患有一种、两种或三种相应支原体的准确率也可以达到90%以上。因此本发明的试剂盒可以不含有阳性对照品。当然，本发明试剂盒可以包括本领域常用的阳性对照品，比如三种支原体(解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体)的总DNA、三种支原体核糖体16SrRNA完整基因(如SEQIDNo13-15所示，分别来自GenBank:L08642.UGenBank:Μ96660·1和GenBankΧ77334.1)等。所述阳性对照品的浓度达到能产生足够的荧光信号即可。在进行定性检测时，每种支原体仅需要使用一个浓度的阳性对照品，并将待测样品得到的荧光信号与阳性对照品得到的荧光信号比较即可；在进行定量检测时，每种支原体需要使用一系列梯度浓度的阳性对照品，在得到它们标准曲线后，将待测样品得到的荧光信号按照同样的方法和条件量化进行比较即可。优选地，所述阳性对照品为IO3-IO8拷贝/毫升的解脲支原体质粒DNA溶液、IO3-IO8拷贝/毫升的人型支原体质粒DNA溶液和IO3-IO8拷贝/毫升的生殖器支原体质粒DNA溶液。它们可以形成从IO3拷贝/毫升到IO8拷贝/毫升的浓度梯度，每两个相邻的梯度之间浓度相差10倍。更优选所述阳性对照品为IO3-IO6拷贝/毫升支原体质粒DNA溶液，每两个相邻的梯度之间浓度相差10倍。将DNA片段连接在质粒上，有利于DNA片段的稳定保存。本发明所述支原体质粒DNA由支原体DNA片段和连接该片段的质粒载体组成。优选地，所述支原体质粒DNA由支原体DNA片段和质粒载体组成，所述解脲支原体DNA片段为如SEQIDNo:10所示的解脲支原体核糖体16SrRNA基因扩增产物，由SEQIDNo:1和由SEQIDNo:2从前文所述样品的核酸提取液中扩增而来，所述人型支原体DNA片段为如SEQIDNo:11所示的人型支原体核糖体16SrRNA基因扩增产物，由SEQIDNo:3和由SEQIDNo:4从前文所述样品的核酸提取液中扩增而来，所述生殖器支原体DNA片段为如SEQIDNo12所示的生殖器支原体核糖体16SrRNA基因扩增产物由SEQIDNo:5和由SEQIDNo:6从前文所述样品的核酸提取液中扩增而来(如图1所示)。所述质粒载体可以为粘末端克隆载体，也可以为钝末端克隆载体。所述质粒载体非限制性的例子包括PKK质粒(Clonetech)、pUC质粒、pET质粒、pTriex质粒(Novagen,Inc.，Madison,WI)、pRSET、pREP质粒(InVitrogen,SanDiego,CA)，pMAL质粒(NewEnglandBiolabs，Beverly，ΜΑ)，以及pEASY-BluntCloningVector和pEASY_T3CloningVector(以上两种同属北京全式金生物技术有限公司的T质粒系列)。可以采用本领域常规的方法来制备质粒DNA溶液，将DNA片段(三种支原体核糖体16SrRNA完整基因、或者SEQIDNo10-12所示的序列等)连接在质粒上。例如将DNA片段(可以在平头末端加上合成的接头以产生粘性末端)经两种核酸内切酶双酶切后，插入到采用同样的双酶处理过的粘末端质粒载体上或者将DNA片段(三种支原体核糖体16SrRNA完整基因、或者SEQIDNo10-12所示的序列等)通过T4噬菌体DNA连接酶直接连接到pEASY-BluntCloningVector质粒(钝末端克隆载体)上。所述核酸内切酶可以使用本领域常用的核酸内切酶，例如AatII、AccI、Acc11(FnuDII)、AccIII(BspMII)、AfaI(RsaI)、AflII、AluI、Aorl3HI(BspMII，AccIII)、Aor51HI(Eco47III)、ApaI、ApaLI、BalI、BamHI、BanII(HgiJII)、BciT130I(EcoRII)、BcnI(CauII)、BglI、BglII、BinI(AvrII)、BmeTllOI(AvaI)、BmgT120I(Asul，Cfr131)、Bpull02I(EspI)、Bspl286I(SduI)、Bspl407I、BspT104I(AsuII，NspV)、BspT1071(HgiCI),BssHII(BsePI)、Bstll07I(SnaI)、BstPI(BstEII，Eco065I)、BstXI、Cfr101、ClaI、CpoI(RsrII)、DraI(AhaIII)、EaeI(CfrI)、Eamll05I、Eco52I(XmaIII)、Eco81I(SauI)、EcoO1091(DraII)、Eco065I(BstEII，BstPI)、EcoRI、EcoRV、EcoT14I(StyI)、EcoT22I(AvaIII),FbaI(BelI),FokI,HaeII,HaeIII,HapII(HpaII，MspI),HhaI,HinlI(AcyI,BbiII)、HincII(HindII)、HindIII、HinfI、HpaI、KpnI、MboI(Sau3AI)、MboII、MflI(XhoII)、MluI、MspI(HpaII，HapII)、MunI(MfeI)、NaeI、NcoI、NdeI、NheI、NotI、NruI、NsbI(AviII，MstI)、PmaCI、PshAI、PshBI(VspI)、Pspl406I(AclI)、PstI、PvuI、PvuII、SacI、SacII、SalI、Sau3AI(MboI)、ScaI、SfiI、SmaI、SmiI(SwaI)、SnaBI、SpeI、SphI、Sse8387I、SspI、StuI、TaqI(TthHB8I)、Tthllll、Van91I(PflMI)、VpaKllBI(AvaII)、XbaI、XhoI禾口XspI(BfaI，MaeI)。本发明试剂盒的所述阴性对照品可以是本领域常用的各种阴性对照品，只要不产生干扰性的荧光信号即可。所述阴性对照品通常为水，优选选自由蒸馏水、去离子水、注射用水、重蒸水和超纯水所组成的组中。本发明的试剂盒还可以包括试剂盒的使用说明书。所述试剂盒的使用说明书所记载的使用方法可以是本领域常规试剂盒的使用方法。优选地，所述试剂盒的使用说明书记载了配合具有不同长度和GC含量的引物和探针的PCR方法。例如，以下实施例中所记载的不同的PCR条件。本发明的所述试剂盒可以用于检测的样品选自由尿液、精液、前列腺液、尿道分泌物、宫颈分泌物和白带所组成的组中。所述待测样品可以使用泌尿生殖道常用的获取样本的方法取得，例如泌尿生殖道拭子、尿液、前列腺液和精液等。具体地取样及样品处理方法操作例如(1)拭子将灭菌白金耳或无菌拭子深入泌尿生殖道(女性为子宫颈管，男性为尿道)1厘米左右，转动数圈，停留约30秒，取出后置于含生理盐水的无菌管中，充分挤压，震荡后弃去拭子，保留含有标本的洗液即可。(2)尿液收集一次全尿后，2000rpm离心20分钟，收集沉渣，转移至含生理盐水的无菌管中即可。(3)精液、前列腺液直接将标本留取于带有生理盐水的无菌管中即可。可以按照本领域常规的方法和条件提取待测样本中的总DNA，以该总DNA为模板，加入本发明的组合物，完成PCR扩增过程。例如“李金明，实时荧光PCR技术，人民军医出版社，2007”中所记载的方法。本发明所涉及的引物/探针通常可以用PCR扩增法、重组法、或人工合成的方法获得。例如，本领域技术人员根据本发明所涉及的引物/探针的核苷酸序列，可以很容易利用PCR进行扩增获得有关序列。序列较长时，可以进行两次或多次PCR扩增，然后将所得片段按正确次序拼接。此外，还可用公知的人工化学合成的方法来合成有关核苷酸序列。例如，引物合成可以采用固相亚磷酸三酯法，被合成引物的纯化方法为聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳。引物在使用前经稀释后，使用紫外分光光度计进行检测，重新定量，确保其A260/A280>1.7。探针的合成可以采用固相亚磷酸三酯法，并将荧光报告基团(Reporter)和淬灭基团(Quencher)连接上去。探针纯化方法采用的是聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳基础上的变性高效液相色谱(dHPLC)纯化，第一步为在连接淬灭基团之前，用PAGE电泳去除大部分杂质，特别是会与淬灭基团连接的杂质，以提高淬灭基团的连接和纯化工作的效率。第二步是在连接了淬灭基团之后再用PAGE电泳在一定条件下将其他杂质去除，以获得纯度较高的产品。第三步将探针通过dHPLC进行纯化，并检验纯化后产品的其出峰位置及纯度，再用紫外分光光度计在260nm波长下定量。探针在使用前经稀释后，使用紫外分光光度计进行检测，重新定量，确保其A260/A280>1.7。下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常参照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(NewYorkCoIdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非特别说明，本发明使用的各种试剂均可以商购，也可以采用本领域常用的方法制备。制备例1男性患者，35岁，发生尿道口痂膜，尿痛，前列腺炎及附睾炎症状，无其他疾病并发。经患者知情同意，取得以下样品(1)尿液样品收集一次全尿10ml，在2000rpm下离心20分钟，弃去上清，收集沉渣。将沉渣转移至含500μ1生理盐水的1.5ml无菌管中备用。(2)前列腺液样品取前列腺液10μ1留取于已装有500μ1生理盐水的1.5ml无菌管中备用。按照“李金明，实时荧光PCR技术，人民军医出版社，2007”中第4章第四节第73-74页所记载的方法分别提取上述两种样品的总DNA，得到两种总DNA溶液每种各20μ1。^M"Yoshida,Τ.，S.Maeda,Τ.Deguchi,andH.Ishiko.2002.Phylogeny-basedrapididentificationofmycoplasmasandureaplasmasfromurethritispatients.J.Clin.Microbiol.40:105_110”记载的方法，通过测序鉴定上述所得样品中含有解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的病原体。并且所述三种支原体的核糖体16SrRNA基因序列片段分别与Genbank公开相应三种支原体核酸的序列一致。其中解脲支原体与基因库登录号(GenbankAccession)L08642.1的序列(SEQIDNo13)一致；人型支原体与基因库登录号(GenbankAccession)M96660.1的序列(SEQIDNo14)一致；生殖器支原体与基因库登录号(GenbankAccession)X77334.1(SEQIDNo15)的序列一致。制备例2女性患者，27岁，发生阴道炎及宫颈炎症状，无其他疾病并发。经患者知情同意，取得以下宫颈分泌物样品将无菌拭子深入子宫颈管1厘米左右，转动10圈，停留约30秒，取出后拭子置于含500μ1生理盐水的1.5ml无菌管中，充分挤压，震荡后弃去拭子，保留含有标本的洗液500μ1。按照“李金明，实时荧光PCR技术，人民军医出版社，2007”中第4章第四节第73-74页所记载的方法提取上述样品的总DNA，得到其总DNA溶液20μ1。^M"Yoshida,Τ.，S.Maeda,Τ.Deguchi，andH.Ishiko.2002.Phylogeny-basedrapididentificationofmycoplasmasandureaplasmasfromurethritispatients.J.Clin.Microbiol.40:105_110”记载的方法，通过测序鉴定上述所得样品中含有解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的病原体。并且所述三种支原体的核糖体16SrRNA基因序列片段分别与Genbank公开相应三种支原体核酸的序列一致。其中解脲支原体与基因库登录号(GenbankAccession)L08642.1的序列(SEQIDNo13)一致；人型支原体与基因库登录号(GenbankAccession)M96660.1的序列(SEQIDNo14)一致；生殖器支原体与基因库登录号(GenbankAccession)X77334.1(SEQIDNo15)的序列一致。制备例3采用固相亚磷酸三酯法分别合成解脲支原体核糖体16SrRNA基因(GenbankAccession:L08642.1)、人型支原体核糖体16SrRNA基因(GenbankAccession:M96660.1)以及生殖器支原体核糖体16SrRNA基因(GenbankAccession:X77334.1)。将所得三种的DNA序列分别通过T4噬菌体DNA连接酶直接连接到pEASY-BluntCloningVector质粒(钝末端克隆载体)上，转化大肠杆菌，大量培养，提取质粒，制成IO6拷贝/毫升的三种模拟待测样品备用。实施例1(1)采用固相亚磷酸三酯法合成表2所列举的序列表2<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>(2)PCR反应扩增靶序列，制备阳性对照品取3个反应管，分别加入1种DNA模板和对应的两种PCR引物；DNA模板制备例3制备的模拟待测样品，每种各3μ1；表2所示的六种引物各0.25μmol/L；北京全式金生物技术有限公司的PCR预混液(2XEasyTaqPCRSuperMix),20μ1以纯化水补充至40μ1。94°C，5分钟，1个循环，94"C，30秒，55°C，30秒，72°C，30秒，35个循环，72°C,10分钟，1个循环。对得到的DNA扩增产物，在80V，50分钟的条件下，进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳，电泳结果见图1。图1中从左至右四个泳道分别为生殖器支原体、解脲支原体、人型支原体靶核酸序列的PCR产物以及DNA分子量标记(marker)。DNAmarker为宝生物(Takara)公司的DL2000，从上至下的条带依次为2000bp、IOOObp、750bp、500bp、250bp、IOObp。将PCR产物切胶纯化后(使用德国快而精(Qiagen)有限公司的琼脂糖凝胶回收试剂盒，MinEluteGelExtractionKit)，将三个单一条带回收后，分别与T质粒(使用北京全式金生物技术有限公司的T质粒试剂盒，pEASY-T3CloningKit)相连，转化大肠杆菌(使用北京全式金生物技术有限公司的TranS5αChemicallyCompetentCell)，筛选阳性克隆后提取质粒(使用天根生化科技(北京)有限公司的高纯度质粒小提试剂盒，TIANpureMiniPlasmidKit)，并以紫外分光光度计进行检测和定量。对三种质粒的一部分扩增产物进行测序，证明所述扩增得到的DNA片段具有SEQIDNo:10_12所示的序列。对三种质粒的剩余的部分逐级稀释，每种分别依次得到ΙΟ6、ΙΟ5、104、、IO3拷贝/毫升的浓度梯度，得到阳性对照品。以上涉及的操作按照《分子克隆实验指南》(第三版，科学出版社2002[美]J.萨姆布鲁克D.W拉塞尔著，黄培堂等译)中记载的方法完成。(3)多重荧光PCR检测待测样本DNA模板制备例1得到的尿液样品总DNA溶液，3μ1或步骤(2)的阳性对照品，3μ1(浓度梯度溶液)表2所示的六种引物各0.25μmol/L；表2所示的三种探针各0.25μmol/L;美国应用生物系统公司(AppliedBiosystems)的TaqMan基因表达预混液(TaqManGeneExpressionMasterMix),20μ1以纯化水补充至40μ1。37°C，2分钟，94°C，3分钟，1个循环，95°C，15秒，50°C，35秒，40个循环。采用的PCR仪为ABIPRISM7500PCR荧光检测仪，选定检测荧光为FAM、HEX、ROX通道，并在PCR循环50°C(第2-41个循环的第二步)时，开始实时收集荧光信号。检测结果如图2所示。将解脲支原体的四个浓度梯度的阳性对照品所得的荧光强度相对循环数的曲线叠加，得到图6(图中4条曲线是从FAM—个信号通道的信号，其他两个信号通道下没有信号)；将人型支原体的四个浓度梯度的阳性对照品所得的荧光强度相对循环数的曲线叠力口，得到图7(图中4条曲线是从HEX—个信号通道的信号，其他两个信号通道下没有信号)；将生殖器支原体的四个浓度梯度的阳性对照品所得的荧光强度相对循环数的曲线叠力口，得到图8(图中4条曲线是从ROX—个信号通道得到的信号，其他两个信号通道下没有信号)。从图2可以看出，通过与阳性对照品所得的曲线进行比较，待测样品中三个信号通道的荧光强度曲线均有跳动(图2中3条曲线分别是三个信号通道的信号)，表明被检测的标本中3种支原体均有存在。实施例2(1)采用固相亚磷酸三酯法合成表3所列举的序列表3<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>(2)多重荧光PCR检测待测样本DNA模板制备例1得到的尿液样品总DNA溶液，3μ1或实施例1步骤(2)的阳性对照品，3μ1(浓度梯度溶液)表3所示的六种引物各0.25μmol/L；表3所示的三种探针各0.25μmol/L;美国应用生物系统公司(AppliedBiosystems)的TaqMan基因表达预混液(TaqManGeneExpressionMasterMix),20μ1以纯化水补充至40μ1。37°C，2分钟，94°C，3分钟，1个循环，95°C，15秒，65°C，35秒，40个循环。采用的PCR仪为ABIPRISM7500PCR荧光检测仪，选定检测荧光为FAM、HEX、ROX通道，并在PCR循环65°C(第2-41个循环的第二步)时，开始实时收集荧光信号。检测结果如图3所示。从图3可以看出，待测样品中三个信号通道的荧光强度曲线均有跳动，表明被检测的标本中3种支原体均有存在。本实施例的引物/探针与实施例1不同，但在检测与实施例1相同的待测样品时，二者的检测结果一致。实施例3(1)采用固相亚磷酸三酯法合成表4所列举的序列表4<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>(2)多重荧光PCR检测待测样本DNA模板制备例1得到的前列腺液样品总DNA溶液，3μ1或实施例1步骤(2)的阳性对照品，3μ1(浓度梯度溶液)表4所示的六种引物各0.25ymol/L；表4所示的三种探针各0.25ymol/L；美国应用生物系统公司(AppliedBiosystems)的TaqMan基因表达预混液(TaqManGeneExpressionMasterMix),20μ1以纯化水补充至40μ1。37°C，2分钟，94°C，3分钟，1个循环，95°C，15秒，55"C，35秒，40个循环。采用的PCR仪为ABIPRISM7500PCR荧光检测仪，选定检测荧光为FAM、HEX、ROX通道，并在PCR循环55°C(第2-41个循环的第二步)时，开始实时收集荧光信号。检测结果如图4所示。从图4可以看出，待测样品中三个信号通道的荧光强度曲线均有跳动，表明被检测的标本中3种支原体均有存在。本实施例的引物/探针与实施例1不同，待测样品与实施例1的待测样品也不相同；但是所述两种不同的待测样品来源于同一个体，并且最终二者的检测结果一致。实施例4(1)采用固相亚磷酸三酯法合成表5所列举的序列表5<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>(2)多重荧光PCR检测待测样本DNA模板制备例2得到的宫颈分泌物样品总DNA溶液，3μ1或实施例1步骤(2)的阳性对照品，3μ1(浓度梯度溶液)表5所示的六种引物各0.25μmol/L；表5所示的三种探针各0.25μmol/L;美国应用生物系统公司(AppliedBiosystems)的TaqMan基因表达预混液(TaqManGeneExpressionMasterMix),20μ1以纯化水补充至40μ1。37°C，2分钟，94°C，3分钟，1个循环，95°C，15秒，60°C，35秒，40个循环。采用的PCR仪为ABIPRISM7500PCR荧光检测仪，选定检测荧光为FAM、HEX、ROX通道，并在PCR循环60°C(第2-41个循环的第二步)时，开始实时收集荧光信号。检测结果如图5所示。从图5可以看出，待测样品中三个信号通道的荧光强度曲线均有跳动，表明被检测的标本中3种支原体均有存在。本实施例证明，本发明的组合物和试剂盒既适用于男性患者，也适用于女性患者。实施例5分别取制备例3的IO5拷贝/毫升的三种模拟待测样品按照下表6的拷贝数百分比进行混合，模拟从合并感染患者体内可能获得的各种样品。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>待测样品分别取3μ1表6所示的混合样品1-6，按照实施例4的条件进行检测所得的结果如下表7所示，证明了本发明的组合物和试剂盒能够检测到混合待测样本中微量的支原体。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>实施例6对57例临床检测送检标本，使用文献“Yoshida，Τ.，S.Maeda，Τ.Deguchi，andH.Ishiko.2002.Phylogeny-basedrapididentificationofmycoplasmasandureaplasmasfromurethritispatients.J.Clin.Microbiol.40105-110"idiSc^Tj法(方法一)对三种支原体分别进行检测；使用本发明实施例4所述方法(方法二)同时对三种支原体进行检测。此处将文献记载的方法一视为“金标准”。得到以下表8-10所示的结果。表8解脲支原体测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>灵敏度(真阳性率)=49/(49+0)=100%特异度(真阴性率)=7/(1+7)=87.5%阳性预测率=49/(49+1)=98%阴性预测率=7/(0+7)=100%准确度=(49+7)/(49+1+0+7)=98.2%表9人型支原体测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>灵敏度(真阳性率)=38/(38+2)=95%特异度(真阴性率)=17/(0+17)=100%阳性预测率=38/(38+0)=100%阴性预测率=17/(2+17)=89.5%准确度=(38+17)/(38+0+2+17)=96.5%表10生殖器支原体测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>灵敏度(真阳性率)=15/(15+0)=100%特异度(真阴性率)=42/(0+42)=100%阳性预测率=15/(15+0)=100%阴性预测率=42/(0+42)=100%准确度=(15+42)/(15+0+0+42)=100%以上表8-10的结果说明本发明的组合物和试剂盒在临床上普遍适用，必其现有的方法，使用本发明的组合物和试剂盒的方法准确率高，并且省时省力。SEQUENCELISTING<110>北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司<120>用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试剂盒<130>0ICN0931124<160>15<170>PatentInversion3.4<210>1<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸引物序列<400>1atcagatagttggtgaggtaatggc25<210>2<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸引物序列<400>2atcgttcacgcggcattg18<210>3<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸引物序列<400>3cattaaatgatccgcctgagtagta25<210>4<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸引物序列<400>4ttgcgaaggatgtcaagagtgg22<210>5<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸引物序列<400>5aacaccagtggcgaaggc18<210>6<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸引物序列<400>6tctatcgtttacggtgtggactact25<210>7<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸探针序列<400>7tggctcaccaagtcaatgacgcgta25<210>8<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸探针序列<400>8atccgcctgagtagtatgctcgcaa25<210>9<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成的寡核苷酸探针序列<400>9aggccattactgacgcttaggcttg25<210>10<211>170<212>DNA<213>解脲支原体(Ureaplasmaurealyticum)<400>10atcagatagttggtgaggtaatggctcaccaagtcaatgacgcgtagctgtactgagagg60tagaacagccacaatgggactgagacacggcccatactcctacgggaggcagcagtaggg120aatttttcacaatgggcgcaagccttatgaagcaatgccgcgtgaacgat170<21D>11<211>135<212>DNA<213>人型支原体(Mycoplasmahominis)<220><221>misc_feature<222>(61)..(62)<223>nisa,c,g,ort<220><221>misc_feature<222>(72)..(72)<223>nisa,c,g,ort<400>11cattaaatgatccgcctgagtagtatgctcgcaagagtgaaacttaaaggaattgacggg60nnacgcacaagnggagcatgtggtttaatttgaagatacacggaaaaccttacccactct120tgacatccttcgcaa135<210>12<211>109<212>DNA<213>生殖器支原体(Mycoplasmagenitalium)<400>12aacaccagtggcgaaggcgaaaacttaggccattactgacgcttaggcttgaaagtgtgg60ggagcaaataggattagataccctagtagtccacaccgtaaacgataga109<210>13<211>1585<212>DNA<213>解脲支原体(Ureaplasmaurealyticum)<400>13tagaatccgtcaatttttaaagagtttgatcctggctcaggattaacgctggcggcatgc60ctaatacatgcaaatcgaacgaagccttttaggcttagtggtgaacgggtgagtaacacg120tatccaatctacccttaagttggggataactagtcgaaagattagctaataccgaataat180aacatcaatatcgcatgagaagatgtagaaagtcgctctttgtggcgacgcttttggatg240agggtgcgacgtatcagatagttggtgaggtaatggctcaccaagtcaatgacgcgtagc300tgtactgagaggtagaacagccacaatgggactgagacacggcccatactcctacgggag360gcagcagtagggaatttttcacaatgggcgcaagccttatgaagcaatgccgcgtgaacg420atgaaggtcttatagattgtaaagttcttttatatgggaagaaacgctaagataggaaat480gattttagtttgactgtaccatttgaataagtatcggctaactatgtgccagcagccgcg540gtaatacataggatgcaagcgttatccggatttactgggcgtaaaacgagcgcaggcggg600ccggaattattgggcgtaaagcgttcgtaggctgtttgttaagtctggagttaaatcccg600gggctcaaccccgctcgctttggatactagcaaactagagttagatagaggtaagcggaa660ttccatgtgaagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccaaaggcgaaggcagct720tactgggtctatactgacgctgggacgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccct780ggtagtccacgccgtaaacgatgatcattagtcggtggagaatcactgacgcagctaacg840cattaaatgatccgcctgagtagtatgctcgcaagagtgaaacttaaaggaattgacggg900nnacgcacaagnggagcatgtggtttaatttgaagatacacggaaaaccttacccactct960tgacatccttcgcaaagctatagagatatagtggaggttatcggagtgacagatggtgca1020tggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgtttggtcaagtcctgcaacgagcgcaacccc1080tatctttagttactaacattaagttgaggactctagagatactgcctgggtaactgggag1140gaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgcctcttacgagtggggccacacacgtgctac1200aatggtcggtacaaagagaagcaatatggcgacactgagcaaatctcaaaaagccgatct1260cagttcggattggagtctgcaattcgactccatgaagtcggaatcgctagtaatcgcaga1320tcagctatgctgcggtgaatacgttctcgggtcttgtacacaccgcccgtcacaccatgg1380gagctggtaatacccaaagtcggtttgctaacctcggaggcgaccgcctaaggtaggact1440ggtgactggg1450<210>15<211>1490<212>DNA〈213〉生殖器支原体(Mycoplasmagenitalium)<400>15agagtttgatcctggctcaggattaacgctggcggcatgcctaatacatgcaagtcgatc60ggaagtagcaatactttagaggcgaacgggtgagtaacacgtatccaatctaccttataa120tgggggataactagttgaaaaactagctaataccgcataagaactttagttcgcatgaat180taaagttgaaaggacctgcaagggttcgttatttgatgagggtgcgccatatcagctagt240tggtagggtaatggcctaccaaggcaatgacgtgtagctatgctgagaagtagaatagcc300acaatgggactgagacacggcccatactcctacgggaggcagcagtagggaatttttcac360aatgagcgaaagcttgatggagcaatgccgcgtgaacgatgaaggtctttttgattgtaa420agttcttttatttgggaagaatgactctagcaggcaatggctggagtttgactgtaccac480tttgaataagtgacgactaactatgtgccagcagtcgcggtaatacataggtcgcaagcg540ttatccggatttattgggcgtaaagcaagcgcaggcggattgaaaagtctggtgttaaag600gcagctgcttaacagttgtatgcattggaaactatcagtctagagtgtggtagggagttt660tggaatttcatgtggagcggtgaaatgcgtagatatatgaaggaacaccagtggcgaagg720cgaaaacttaggccattactgacgcttaggcttgaaagtgtggggagcaaataggattag780ataccctagtagtccacaccgtaaacgatagatactagctgtcggagcgatcccttcggt840agtgaagttaacacattaagtatctcgcctgggtagtacattcgcaagaatgaaactcaa900acggaattgacggggacccgcacaagtggtggagcatgttgcttaattcgacggtacacg960aaaaaccttacctagacttgacatccttggcaaagttatggaaacataatggaggttaac1020cgagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcc108033cgcaacgagcgcaacccttatcgttagttacattgtttaacgagactgctaatgtaaatt1140ggaggaaggaagggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgtctagggctgcaaacgtg1200ctacaatggccaatacaaacagtagccaacttgtaaaagtgagcaaatctgaaaagttgg1260tctcagttcggattgagggctgcaattcgtcctcatgaagctggaatcactagtaatcgc1320gaatcagctatgtcgcggtgaatacgttctcgggtcttgtacacaccgcccgtcaaacta1380tgaaagctggtaatatttaaaaacgtgttgctaacctttattggaagcgcatgtcaagga1440tagcaccggtgattggagttaagtcgtaacaaggtacccctacgagaacg1490权利要求用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下序列1)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80％，该引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；2)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80％，该引物的序列包括a)SEQIDNo2所示的序列，b)SEQIDNo2所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；3)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80％，该引物的序列包括a)SEQIDNo3所示的序列，b)SEQIDNo3所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；4)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80％，该引物的序列包括a)SEQIDNo4所示的序列，b)SEQIDNo4所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；5)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为20-80％，该引物的序列包括a)SEQIDNo5所示的序列，b)SEQIDNo5所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；6)长度为15-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为20-80％，该引物的序列包括a)SEQIDNo6所示的序列，b)SEQIDNo6所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列；7)长度为15-45个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80％，该探针的序列包括a)SEQIDNo7所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo7所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo7所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列；8)长度为15-45个核苷酸的与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80％，该探针的序列包括a)SEQIDNo8所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo8所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo8所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列；9)长度为15-45个核苷酸的与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为20-80％，该探针的序列包括a)SEQIDNo9所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo9所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo9所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列；其中，7)-9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且在除5′端外的任意一个位置上带有淬灭基团。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下序列1)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；2)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo2所示的序列，b)SEQIDNo:2所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；3)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo3所示的序列，b)SEQIDNo:3所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；4)长度为22-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:4所示的序列，b)SEQIDNo:4所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；5)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo5所示的序列，b)SEQIDNo:5所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；6)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为25-75%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo:6所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有至多3个核苷酸差异的序列；7)长度为25-45个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为25-75%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo:7所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多3个核苷酸差异的序列；8)长度为25-45个核苷酸的与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为25-75%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo:8所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:8所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多3个核苷酸差异的序列；9)长度为25-45个核苷酸的与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为25-75%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo:9所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:9所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有至多3个核苷酸差异的序列；其中，7)-9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且除5'端外的任意一个位置上带有淬灭基团。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下序列1)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo1所示的序列，b)SEQIDNo1所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；2)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo2所示的序列，b)SEQIDNo:2所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；3)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo3所示的序列，b)SEQIDNo:3所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；4)长度为22-30个核苷酸的用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:4所示的序列，b)SEQIDNo:4所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；5)长度为25-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo5所示的序列，b)SEQIDNo:5所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；6)长度为18-30个核苷酸的用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的GC含量为30-70%，该引物的序列包括a)SEQIDNo:6所示的序列，b)SEQIDNo:6所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者c)与a)或b)具有一个或两个核苷酸差异的序列；7)长度为25-45个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:7所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo:7所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:7所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有一个或两个核苷酸差异的序列；8)长度为25-45个核苷酸的与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:8所示的序列或其互补序列，b)SEQIDNo:8所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:8所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有一个或两个核苷酸差异的序列；9)长度为25-45个核苷酸的与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的GC含量为30-70%，该探针的序列包括a)SEQIDNo:9所示的序列或其互补序列，或者b)SEQIDNo:9所示的序列的至少15个核苷酸连续的片段，c)SEQIDNo:9所示序列的互补序列的至少15个核苷酸连续的片段，或者d)与a)或b)或c)具有一个或两个核苷酸差异的序列；其中，7)-9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且除5'端外的任意一个的位置上带有淬灭基团。4.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物由以下序列组成1)用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的序列为如SEQIDNo=I所示的序列；2)用于PCR扩增解脲支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的序列为如SEQIDNo2所示的序列；3)用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的序列为如SEQIDNo3所示的序列；4)用于PCR扩增人型支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的序列为如SEQIDNo4所示的序列；5)用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第一引物，该引物的序列为如SEQIDNo5所示的序列；6)用于PCR扩增生殖器支原体靶核酸序列的第二引物，该引物的序列为如SEQIDNo6所示的序列；7)与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的序列为如SEQIDNo7所示的序列或其互补序列；8)与3)和4)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的序列为如SEQIDNo8所示的序列或其互补序列；9)与5)和6)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的序列为如SEQIDNo9所示的序列或其互补序列；其中，7)-9)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且在3’端带有淬灭基团。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的组合物，其中，所述荧光报告基团的发射波长小于所述淬灭基团的吸收波长；并且所述荧光报告基团和所述淬灭基团选自由6-羧基荧光素、四氯-6-羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、6-羧基四甲基罗丹明、磺酰罗丹明、羧基-X-罗丹明、花菁3、花菁3.5、花菁5、花菁5.5、BHQl、BHQ2、BHQ3、4-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、6-羧基-4’，5’-二氯_2’，7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯和VIC荧光染料所组成的组中。6.根据权利要求5所述的组合物，其中，所述荧光报告基团选自由6-羧基荧光素、六氯-6-甲基荧光素、VIC荧光染料、四氯-6-羧基荧光素、羧基-X-罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、磺酰罗丹明、6-羧基_4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素琥珀酰亚胺酯、花菁3、花菁5和花菁5.5所组成的组中；所述淬灭基团选自由6-羧基四甲基罗丹明、4-(4_二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、BHQ1、BHQ2和BHQ3所组成的组中。7.用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的试剂盒，该试剂盒含有聚合酶链式反应液、耐热DNA聚合酶及阴性对照品，其特征在于，所述试剂盒还含有权利要求1-6中任意一项所述的组合物。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括阳性对照品，所述阳性对照品为IO3-IO8拷贝/毫升的解脲支原体质粒DNA溶液、IO3-IO8拷贝/毫升的人型支原体质粒DNA溶液和IO3-IO8拷贝/毫升的生殖器支原体质粒DNA溶液，其中，所述支原体质粒DNA由支原体DNA片段和质粒载体组成，所述解脲支原体DNA片段为如SEQIDNo:10所示的解脲支原体核糖体16SrRNA基因扩增产物，所述人型支原体DNA片段为如SEQIDNo:ll所示的人型支原体核糖体16SrRNA基因扩增产物，所述生殖器支原体DNA片段为如SEQIDNo12所示的生殖器支原体核糖体16SrRNA基因扩增产物；所述阴性对照品为水。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其中，所述阴性对照品选自由蒸馏水、去离子水、注射用水、重蒸水和超纯水所组成的组中。10.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述试剂盒检测的样品选自由尿液、精液、前列腺液、尿道分泌物、宫颈分泌物和白带所组成的组中。全文摘要本发明公开了用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试剂盒，它们均包括有关SEQIDNo1-6所示序列或其至少15个核苷酸连续的片段、或与它们存在具有至多5个核苷酸差异的序列的特异性引物；以及SEQIDNo7-9所示的序列或其互补序列或它们的至少15个核苷酸连续的片段、或与它们存在具有至多5个核苷酸差异的序列的特异性探针。本发明的用于同时检测解脲支原体、人型支原体和生殖器支原体的组合物和试剂盒可以在一个反应体系内同时检测三种不同的支原体，不仅提高了泌尿生殖系统感染性疾病的早期检出率，而且减少了操作人员的操作时间，降低了检测成本，还减轻了病人经济负担。文档编号C12Q1/68GK101824471SQ200910253189公开日2010年9月8日申请日期2009年12月14日优先权日2009年12月14日发明者叶锋,赵洪斌申请人:北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司