用于三聚氰胺分析的核酸传感器、分析装置和分析方法

用于三聚氰胺分析的核酸传感器、分析装置和分析方法
【专利摘要】本发明提供一种用于检测三聚氰胺的新传感器。本发明的用于该三聚氰胺分析的核酸传感器的特征在于含有：下述多核苷酸(x1)，其具有产生催化功能的催化核酸分子(D)和结合三聚氰胺的结合核酸分子(A)。上述多核苷酸(x1)包含来自序列号1至14中的一个碱基序列，并且n和m为正整数。由于催化核酸分子(D)的催化功能在不存在三聚氰胺时被抑制，而催化核酸分子(D)的催化功能在存在三聚氰胺时产生，所述核酸传感器可以通过检测所述催化功能来分析三聚氰胺。
【专利说明】用于三聚氰胺分析的核酸传感器、分析装置和分析方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于三聚氰胺分析的核酸传感器、用于三聚氰胺分析的装置、和 用于三聚氰胺分析的方法。

【背景技术】
[0002] 三聚氰胺是具有高氮含量的有机氮化合物。近年来，出现为了提高表观蛋白量而 在例如牛奶、奶粉等的加工产品中混入三聚氰胺的问题，这导致婴儿肾衰竭的高发生率。为 了防止摄取和散布这种含三聚氰胺的食物，非常重要的是分析食物中的三聚氰胺。尽管根 据日本卫生部的三聚氰胺浓度的指导值为0. 5ppm，实际上，如果约500ppm的三聚氰胺浓度 可被检测出，则对人体等的影响而言是可接受的。
[0003]目前，傅里叶变换红外光谱（FTIR)用于分析三聚氰胺。但是，由于FTIR分析仪是 非常昂贵的大型设备，例如，存在的问题是对于食品的进口商、经销商、零售商和消费者而 言不容易使用该分析仪，且他们不得不求助于拥有该分析仪的检验机构来进行所述分析。
[0004] 因此，作为一种新的检测方法，正在开发使用结合三聚氰胺的核酸分子（所谓的 适配子）的方法（非专利文献1)。具体地，提出了这样一种方法，其使用其上固定了核酸分 子的胶体金纳米颗粒来分析催化共振散射光谱。根据这种方法，当三聚氰胺结合到固定在 胶体颗粒上的核酸分子之间时，胶体颗粒的催化能力被去活化。因此，认为通过催化共振散 射光谱来分析催化能力的存在或不存在和降低，可以分析样品中三聚氰胺的存在或不存在 和其量。但是，这种方法同样需要专用设备，因此绝不是简单的分析。
[0005] 引文列表
[0006] 非专利文献
[0007]非专利文献 1:AHighlySensitiveAptamer-NanogoldCatalytic ResonanceScatteringSpectralAssayforMelamine.AihuiLiang,J Fluoresc(2011)21:1907-1912
[0008] 发明简述
[0009] 本发明需要解决的问题
[0010] 因此，本发明旨在提供一种用于三聚氰胺分析的新传感器。
[0011] 解决问题的手段
[0012] 本发明提供一种用于三聚氰胺分析的核酸传感器，其包括下列多核苷酸（XI)、 (x2)、（x3)或（x4)，所述多核苷酸包含激活催化功能的催化核酸分子（D)和结合三聚氰胺 的结合核酸分子（A):
[0013] (xl)具有SEQIDNO: 1至14的碱基序列中的任一个的多核苷酸，其中，n和m为 正整数；
[0014] (x2)具有通过在多核苷酸（xl)的碱基序列中替换、删除、添加和/或插入一个或 多个碱基而获得的碱基序列的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三 聚氰胺时被抑制，并且催化核酸分子0)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活；
[0015] (x3)具有与多核苷酸（xl)的任意碱基序列具有至少80%同一性的碱基序列的多 核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰胺时被抑制，并且催化核酸分 子（D)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活；以及
[0016] (x4)具有与具有多核苷酸（xl)的任意碱基序列的多核苷酸在严格条件下杂交的 多核苷酸互补的碱基序列的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺时被抑制，并且催化核酸分子0)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活。
[0017] 本发明还提供一种用于三聚氰胺分析的装置，其包括：基质材料；核酸传感器；和 检测单元，其中，将所述核酸传感器和所述检测单元布置在所述基质材料上，所述核酸传感 器为根据本发明的核酸传感器，以及所述检测单元为检测所述核酸传感器中催化核酸分子 (D)的催化功能的检测单元。
[0018] 本发明还提供一种用于分析的试剂盒，其包括：容器；以及核酸传感器，其中，所 述核酸传感器为根据本发明的核酸传感器。
[0019] 本发明还提供一种用于三聚氰胺分析的方法，其包括：使样品与根据本发明的用 于三聚氰胺分析的核酸传感器接触的接触步骤；以及检测所述核酸传感器中催化核酸分子 (D)的催化功能从而检测所述样品中三聚氰胺的检测步骤。
[0020] 本发明还提供一种用于三聚氰胺分析的方法，其包括：使样品与根据本发明的用 于分析的装置接触的接触步骤；以及检测所述用于分析的装置中核酸传感器的催化核酸分 子（D)的催化功能从而检测所述样品中三聚氰胺的检测步骤。
[0021] 本发明效果
[0022] 根据本发明的核酸传感器，可以根据结合核酸分子（A)是否结合三聚氰胺而开 启-关闭催化核酸分子0)的催化功能。因此，通过检测催化核酸分子（D)的催化功能，能 够毫无困难地检测三聚氰胺是否存在或者三聚氰胺的量。此外，由于本发明的分析装置使 用如上所述的核酸传感器，例如，可以实现装置的小型化和装置的精简化，并且即使对于多 个试样也能够实现简便分析。因此，本发明可以是在例如三聚氰胺分析中非常有用的技术。 在本发明中，"分析"是包括例如定量分析、半定量分析和定性分析的概念。

【专利附图】

【附图说明】
[0023] [图1]图1显示本发明实施例1中核酸传感器的结构的示意图。
[0024] [图2]图2为显示本发明实施例1中吸光度测量结果的图。
[0025] [图3]图3显示本发明实施例2中核酸传感器的结构的示意图。
[0026] [图4]图4为显示本发明实施例2中吸光度测量结果的图。
[0027] [图5]图5为显示本发明实施例3中RLU测量结果的图。
[0028] [图6]图6显示本发明实施例4中核酸传感器的结构的示意图。
[0029] [图7]图7为显示本发明实施例4中RLU测量结果的图。
[0030] [图8]图8显示本发明实施例5中核酸传感器的结构的示意图。
[0031] [图9]图9为显示本发明实施例5中RLU测量结果的图。
[0032] [图10]图10显示本发明实施例6中核酸传感器的结构的示意图。
[0033] [图11]图11为显示本发明实施例6中RLU测量结果的图。
[0034] [图12]图12显示本发明实施例7中核酸传感器的结构的示意图。
[0035][图13]图13为显示本发明实施例7中RLU测量结果的图。
[0036][图14]图14显示本发明实施例8中核酸传感器的结构的示意图。
[0037][图15]图15为显示本发明实施例8中RLU测量结果的图。
[0038][图16]图16为显示本发明实施例9中比色法结果的照片。

【具体实施方式】
[0039](核酸传感器和使用该核酸传感器的分析方法）
[0040] 如上所述，根据本发明的用于三聚氰胺分析的核酸传感器包括下列多核苷酸 (xl)、（x2)、（x3)或（x4)，所述多核苷酸包含激活催化功能的催化核酸分子（D)和结合三聚 氰胺的结合核酸分子（A):
[0041] (xl)具有SEQIDNO: 1至14的碱基序列中的任一个的多核苷酸，其中，n和m为 正整数；
[0042] (x2)具有通过在多核苷酸（xl)的碱基序列中替换、删除、添加和/或插入一个或 多个碱基而获得的碱基序列的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三 聚氰胺时被抑制，并且催化核酸分子0)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活；
[0043] (x3)具有与多核苷酸（xl)的任意碱基序列具有至少80%同一性的碱基序列的多 核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰胺时被抑制，并且催化核酸分 子（D)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活；以及
[0044] (x4)具有与具有多核苷酸（xl)的任意碱基序列的多核苷酸在严格条件下杂交的 多核苷酸互补的碱基序列的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺时被抑制，并且催化核酸分子0)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活。
[0045]SEQIDNO:lGGGTGGGAGGGTCGGGccctCGC(T)"GCG
[0046]SEQIDNO:2GGGTGGGAGGGTCGGGccctcCGC(T)"GCG
[0047]SEQIDNO:3GGGTGGGAGGGTCGGGccctttCGC(T)"GCG
[0048]SEQIDNO:4GGGTGGGAGGGTCGGGcaccctCGC(T)"GCG
[0049]SEQIDNO:5GGGTGGGAGGGTCGGGccctccCGC(T)"GCG
[0050]SEQIDNO:6GGGTGGGAGGGTCGGGccctccCGC(T)"GCGg
[0051]SEQIDNO:7GGGTGGGAGGGTCGGGcccGCGCG(T)XGCGC
[0052]SEQIDNO: 8GGGTGGGAGGGTCGGGacccGCGCG(T)XGCGC
[0053]SEQIDNO: 9GGGTGGGAGGGTCGGGcacccGCGCG(T)XGCGC
[0054]SEQIDNO: 10GCGCG(T)XGCGCcgcgcGGGTGGGAGGGTCGGG
[0055]SEQIDNO: 11GCGCG(T)XGCGCacgcgcGGGTGGGAGGGTCGGG
[0056]SEQIDNO:12GGGTGGGAGGGTCGGGccctcCGC(T)mGGC(T)nGCC(T)mGCG
[0057]SEQIDNO: 13GGGTGGGAGGGTCGGGccctcCGC(T)JVGGC(T)"GCC(T)』CG
[0058]SEQIDNO: 14AGGGACGGGAAGAACGC(T)XCGAAAATGTGGAGGGT
[0059] 在SEQIDNO: 1至13的碱基序列中，带下划线的部分是指结合核酸分子（A)和 催化核酸分子0>)。具体地，在SEQIDNO: 1至9、12和13的碱基序列中，例如，5'侧的下 划线部分是指催化核酸分子（D)，和3'侧的下划线部分是指结合核酸分子（A)。在SEQID NO: 10和11中，例如，5'侧的下划线部分是指结合核酸分子（A)，和3'侧的下划线部分是指 催化核酸分子（D)。在SEQIDNO: 14的碱基序列中，下划线部分是指结合核酸分子（A)，和 在下划线部分两侧上的序列是指双链催化核酸分子（D)。
[0060] 本发明的核酸传感器可进一步包括，例如，连接结合核酸分子（A)与催化核酸分 子（D)的接头序列（L)。接头序列（L)的长度为例如0至14个碱基，优选0至10个碱基， 更优选0至7个碱基。在SEQIDNO: 1至13的各个碱基序列中，例如，下划线区域之间的 序列为接头序列（U，并且SEQIDNO: 1至13的碱基序列中的每一个均可具有另外的接头 序列（L)。
[0061] 结合核酸分子（A)可为任意核酸分子，只要它结合三聚氰胺。优选地，结合核酸分 子（A)在其分子内结合三聚氰胺。在下文中，结合核酸分子（A)也被称作三聚氰胺适配子。 结合核酸分子（A)由例如莖形成（stem-forming)区域SA、环区域（loopregion)和莖形成 区域SA，形成。茎形成区域SA和茎形成区域SA，具有彼此互补的序列，并且例如，在三聚氰胺 的存在下通过自退火来形成茎。
[0062] 茎形成区域SA和茎形成区域SA，各自具有如下的长度，例如，1至10个碱基、优选 2至7个碱基，更优选3至5个碱基。茎形成区域SA的长度可以与茎形成区域SA，的长度相 同或不同，优选的是两者相同。更优选地，这些区域具有彼此完全互补的序列。
[0063] 环区域为，例如，脱氧胸苷三磷酸（dTTP)的多核苷酸（下文称为：多聚dT)，并且 可由（^^来表示。n为正整数。n为例如，3至100,优选6至70,更优选6至60或10至 60,并且更加优选6至48或12至48。
[0064] 结合核酸分子（A)除了具有例如包含多聚dT的环区域之外也可以具有包含多聚 dT的内部环区域。这种类型的结合核酸分子（A)也被称为，例如，串联型。
[0065] 不特别限定结合核酸分子（A)的长度，并且所述长度，例如为9至120个碱基，优 选20至70个碱基，并且更优选18至54个碱基。
[0066] 结合核酸分子（A)的序列的具体实例如下：
[0067]CGC(T)nGCG(SEQIDNO:57)
[0068] MelOln = 7
[0069]Mel02n = 8
[0070]Mel03n = 9
[0071]Mel04n = 10
[0072]Mel05n = 11
[0073]Mel06n = 12
[0074]GCGCG(T)nCGCGCG(SEQIDNO:58)
[0075]Mel07n = 7
[0076]Mel08n = 8
[0077]Mel09n = 9
[0078]MellOn = 10
[0079]Mellln = 11
[0080]Mell2n = 12
[0081] 催化核酸分子（D)可为任意核酸分子，只要其激活催化功能。所述催化功能为，例 如，氧化还原反应的催化功能。所述氧化还原反应可为例如任意反应，只要其在从底物制备 产物的过程中引起两种底物之间的电子转移。不特别限制氧化还原反应的类型。所述氧化 还原反应的催化功能的实例包括与酶的那些催化功能类似的活性，其具体实例包括与过氧 化物酶的催化功能类似的活性（下文称为"过氧化物酶样活性"）。所述过氧化物酶样活性 的实例包括辣根过氧化物酶（HRP)活性。催化核酸分子（D)在下文将描述的DNA中可被称 为DNA酶或DNAzyme，而在下文将描述的RNA中可被称为RNA酶或RNAzyme。
[0082] 催化核酸分子（D)优选为形成G-四分体（G-quartet)(或者也被称为G-四联体 (G-tetrad))结构的核酸，并且更优选的是形成鸟嘌呤四链体（或者也被称为G-四链体 (G-quadruplex))结构的核酸。G-四联体为，例如，由四个鸟嘌呤碱基形成的平面结构，而 G-四链体为，例如，其中多个G-四联体在彼此的顶部堆叠的结构。G-四联体和G-四链体 在重复地包括例如G-富含的结构基序的核酸中形成。G-四联体包括，例如，平行类型和反 平行类型，优选的是平行类型。
[0083] 催化核酸分子（D)优选为可结合卟啉的核酸。具体地，催化核酸分子（D)优选为 形成G-四联体并且可结合卟啉的核酸。已知形成G-四联体的核酸通过例如结合卟啉而形 成复合物从而激活上述氧化还原反应的催化功能。在核酸传感器中，优选的是，当在三聚氰 胺未与结合核酸分子（A)结合的状态下催化核酸分子（D)与接头序列（L)或结合核酸分子 (A)之间形成茎时，抑制催化核酸分子（D)与卟啉结合；而当例如三聚氰胺与结合核酸分子 (A)结合并因此茎的形成被解除时，允许催化核酸分子（D)结合卟啉。具体地，在核酸传感 器中，优选的是，在三聚氰胺未与结合核酸分子（A)结合的情况下，抑制催化核酸分子（D) 形成G-四联体并因此抑制其结合卟啉，而当例如三聚氰胺与结合核酸分子（A)结合时，允 许催化核酸分子（D)形成G-四联体并结合卟啉。
[0084] 不特别限制卟啉，其实例包括未取代的卟啉及其衍生物。所述衍生物的实例包括 取代的卟啉以及通过与金属元素形成复合物而获得的金属卟啉。取代的卟啉的实例包括N-甲基内消旋卟啉。金属卟啉的实例包括氯化血红素，其为铁复合物。例如，所述卟啉优选 金属卟啉，并且更优选氯化血红素。
[0085] 催化核酸分子（D)可为，例如，单链核酸分子或双链核酸分子。在核酸传感器中， 在催化核酸分子（D)为单链核酸分子的情况下，例如，当在三聚氰胺未与结合核酸分子（A) 结合的状态下催化核酸分子（D)与接头序列（L)或结合核酸分子（A)之间形成茎时，抑制 催化核酸分子（D)与形成G-四联体；而当三聚氰胺与结合核酸分子（A)结合并因此茎的形 成被解除时，允许催化核酸分子（D)形成G-四联体。此外，在核酸传感器中，在催化核酸分 子（D)为双链核酸分子的情况下，例如，在三聚氰胺未与结合核酸分子（A)结合的情况下， 抑制催化核酸分子（D)形成G-四联体，这是因为结合核酸分子（A)的结构振动；而当三聚 氰胺与结合核酸分子（A)结合时，允许催化核酸分子（D)形成G-四联体。在催化核酸分子 (D)为单链核酸分子的情况下，其长度为，例如，15至30个碱基，优选15至24个碱基，并且 更优选15至18个碱基。在催化核酸分子（D)为双链核酸分子的情况下，每条链的长度为， 例如，7至21个碱基，优选7至17个碱基，并且更优选7至14个碱基。
[0086] 所述双链催化核酸分子〇))的实例包括下列序列的组合。
[0087] 5,-AGGGACGGGAAGAA-3'（SEQIDN0:59)
[0088] 3,-TGGGAGGTGTAAAA-5，（SEQIDN0:60)
[0089] 所述单链催化核酸分子（D)的实例包括下列序列。
[0090]neco0584(SEQIDNO:61)
[0091] 5, -GGGTGGGAGGGTCGGG-3，
[0092] 如上所述，优选的是，当不存在三聚氰胺、三聚氰胺未与结合核酸分子（A)结合的 状态下催化核酸分子（D)与接头序列（L)之间形成茎时，抑制催化核酸分子（D)激活催化 功能；而当例如三聚氰胺与结合核酸分子（A)结合并因此茎的形成被解除时，允许催化核 酸分子（D)激活催化功能。因此，如上所述，优选地，所述核酸传感器进一步包括在催化核 酸分子（D)与结合核酸分子（A)之间的接头序列（L)以连接它们。可以根据例如所述催化 核酸分子的序列来设置接头序列（L)的碱基序列。
[0093] 如上所述，根据本发明的核酸传感器包括包含催化核酸分子（D)和结合核酸分子 (A)的多核苷酸（xl)、（x2)、（x3)或（x4)。多核苷酸（xl)、（x2)、（x3)或（x4)为其中当不 存在三聚氰胺时催化核酸分子（D)的催化功能被抑制而当存在三聚氰胺时催化核酸分子 (D)的催化功能被激活的多核苷酸。
[0094] 多核苷酸（xl)具有SEQIDNO: 1至14的碱基序列中的任一个，并且n和m为正 整数。n的例子包括上述数值并且n优选为6至48。在SEQIDN0:12和13的核苷酸中， 由于两个（T)m形成内部环，各个m为，例如，2至31，优选2至24，更优选3至17，并且更加 优选4至10。
[0095]多核苷酸（x2)具有通过在多核苷酸（xl)的碱基序列中替换、删除、添加和/或 插入一个或多个碱基而获得的碱基序列。在多核苷酸（x2)中，对"一个或多个"没有限定。 在多核苷酸（xl)的碱基序列中替换的碱基数量为，例如，1至5个，优选1至4个，更优选1 至3个，更加优选1个或2个，并且特别优选1个。在多核苷酸（xl)的碱基序列中添加或 插入的碱基数量为，例如，1至5个，优选1至4个，更优选1至3个，更加优选1个或2个， 并且特别优选1个。在多核苷酸（xl)的碱基序列中删除的碱基数量为，例如，1至5个，优 选1至4个，更优选1至3个，更加优选2个或1个，并且特别优选1个。
[0096] 多核苷酸（x3)具有与多核苷酸（xl)的任意碱基序列具有至少80%同一'丨生的碱基 序列。在多核苷酸（x3)中，与多核苷酸（xl)的碱基序列的同一丨生为，例如，至少70%，优选 至少80%或至少85%，更加优选至少90%，仍更加优选至少95%、至少96%、至少97%或 者至少98%，并且特别优选至少99%。例如，可在默认条件下使用BLAST等计算同一性。
[0097] 多核苷酸（x4)具有与具有多核苷酸（xl)的任意碱基序列的多核苷酸在严格条件 下杂交的多核苷酸互补的碱基序列。在多核苷酸（x4)中，"在严格条件下杂交"是指例如本 领域技术人员公知的杂交实验条件。具体地，"严格条件"是指其中碱基序列可以例如通过 在0. 7至lmol/L的NaCl存在下在60至68°C下杂交然后使用0. 1至2XSSC溶液在65至 68°C下洗涤而鉴别的条件。1XSSC含有150mmol/L的NaCl和15mmol/L的柠檬酸钠。
[0098] 所述核酸传感器可为，例如，具有多核苷酸（xl)至（x4)中任一个的传感器或者包 括多核苷酸（xl)至（x4)中的任一个的传感器。在后一种情况中，例如，所述传感器可进一 步包括与所述多核苷酸的5'端连接的5'端-附加序列、或者与所述多核苷酸的3'端连接 的3'端-附加序列、或者既包括5'端-附加序列又包括3'端-附加序列。所述5'端-附 加序列具有的长度例如为〇至22个碱基，优选0至18个碱基，并且更优选0至14个碱基， 和所述3'端-附加序列具有的长度例如为0至18个碱基，优选0至10个碱基，并且更优 选为0至7个碱基。如将在下文描述的，当在固定状态下使用核酸传感器时，例如，所述核 酸传感器可进一步包括5'端-附加序列或3'端-附加序列作为用于固定的接头序列。所 述用于固定的接头序列的实例包括多聚dT。不特别限定用于固定的接头序列的长度，该长 度为，例如，0至120个碱基并且优选6至80个碱基。
[0099] 核酸传感器的具体实例包括分别包括多核苷酸（XI)、（X2)、（X3)和（X4)的传感 器。在这些多核苷酸中，例如，当三聚氰胺不存在时，催化核酸分子（D)的催化功能被抑制， 而当存在三聚氰胺时，催化核酸分子（D)的催化功能被激活。
[0100] 多核苷酸（XI)包括多核苷酸（xl)的碱基序列并且具有SEQIDN0:15至56的碱 基序列中的任一个。这些序列显示在表1至4中。
[0101] [表 1]

【权利要求】
1. 用于三聚氰胺分析的核酸传感器，其包含：下列多核苷酸（Xl)、（X2)、（X3)或（X4)，所述多核苷酸包含激活催化功能的催化核酸 分子（D)和结合三聚氰胺的结合核酸分子（A):(xl)由SEQ ID N0:1至14的碱基序列中的任一个构成的多核苷酸，其中，n和m为正 整数；(x2)由通过在多核苷酸（xl)的碱基序列中替换、删除、添加和/或插入一个或多个碱 基而获得的碱基序列构成的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺时被抑制，并且催化核酸分子（D)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活；(x3)由与多核苷酸（xl)的任意碱基序列具有至少80%同一性的碱基序列构成的多核 苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰胺时被抑制，并且催化核酸分子(D)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活；以及(x4)由与多核苷酸（xl)的任意碱基序列所构成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核 苷酸互补的碱基序列构成的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺时被抑制，并且催化核酸分子（D)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活。
2. 根据权利要求1所述的核酸传感器，其中， 在SEQ ID NO: 1至14的碱基序列的任一个中，⑴"的n为6至48,并且⑴m为2 至31。
3. 根据权利要求1或2所述的核酸传感器，其进一步包括： 接头序列，其连接催化核酸分子（D)与结合核酸分子（A)。
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的核酸传感器，其进一步包括： 与多核苷酸（xl)、（x2)、（x3)或（x4)的5'端连接的5'端附加序列。
5. 根据权利要求4所述的核酸传感器，其中， 所述5'端附加序列的长度为0至22个碱基。
6. 根据权利要求1至5中任一项所述的核酸传感器，其进一步包括： 与多核苷酸（xl)、（x2)、（x3)或（x4)的3'端连接的3'端附加序列。
7. 根据权利要求6所述的核酸传感器，其中， 所述3'端附加序列的长度为7至18个碱基。
8. 根据权利要求1至7中任一项所述的核酸传感器，其中，所述核酸传感器包含下列多 核苷酸（XI)、（X2)、（X3)或（X4): (XI)由SEQ ID NO: 15至56的碱基序列中的任一个构成的多核苷酸；(X2)由通过在多核苷酸（XI)的碱基序列中替换、删除、添加和/或插入一个或多个碱 基而获得的碱基序列构成的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚 氰胺时被抑制，并且催化核酸分子（D)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活；(X3)由与多核苷酸（XI)的任意碱基序列具有至少80%同一性的碱基序列构成的多核 苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰胺时被抑制，并且催化核酸分子(D)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活；以及(X4)由与多核苷酸（XI)的任意碱基序列构成的多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷 酸互补的碱基序列构成的多核苷酸，其中，催化核酸分子（D)的催化功能在不存在三聚氰 胺时被抑制，并且催化核酸分子（D)的催化功能在存在三聚氰胺时被激活。
9. 一种用于三聚氰胺分析的装置，其包含： 基质材料；核酸传感器；和 检测单元，其中，将所述核酸传感器和所述检测单元布置在所述基质材料上，所述核酸传感器为根据权利要求1至8中任一项所述的核酸传感器，以及 所述检测单元为检测所述核酸传感器中催化核酸分子（D)的催化功能的检测单元。
10. 根据权利要求9所述的装置，其中， 所述核酸传感器通过接头与所述基质材料连接。
11. 根据权利要求9或10所述的装置，其中， 将所述核酸传感器布置在所述检测单元内。
12. 根据权利要求9至11中任一项所述的装置，其中， 所述检测单元检测由所述催化核酸分子（D)的催化功能产生的信号。
13. 根据权利要求12所述的装置，其中， 所述信号为光学信号或电化学信号。
14. 根据权利要求9至13中任一项所述的装置，其进一步包含： 试剂单元，其中，所述试剂单元包含用于所述催化核酸分子（D)的催化功能的底物。
15. 用于三聚氰胺分析的试剂，其包含： 根据权利要求1至8中任一项所述的核酸传感器。
16. 根据权利要求15所述的试剂，其进一步包含： 用于所述催化核酸分子（D)的催化功能的底物。
17. 用于三聚氰胺分析的方法，其包括： 使样品与根据权利要求1至8中任一项所述的用于三聚氰胺分析的核酸传感器接触的 接触步骤；以及检测所述核酸传感器中催化核酸分子（D)的催化功能从而检测所述样品中的三聚氰 胺的检测步骤。
18. 根据权利要求17所述的方法，其中，所述检测步骤在用于所述催化核酸分子（D)的 催化功能的底物存在下进行。
19. 用于三聚氰胺分析的方法，其包括： 使样品与根据权利要求9至14中任一项所述的用于分析的装置接触的接触步骤；以及 检测所述检测单元中催化核酸分子（D)的催化功能从而检测所述样品中三聚氰胺的 检测步骤。
20. 根据权利要求19所述的方法，其中，所述检测步骤在用于所述催化核酸分子（D)的 催化功能的底物存在下进行。
【文档编号】C12N15/115GK104508148SQ201380039964
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2013年7月23日 优先权日:2012年7月27日
【发明者】堀井克纪, 金子直人, 秋富穣, 加藤信太郎, 古市真木雄, 和贺岩 申请人:日本电气方案创新株式会社