一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用的制作方法

本发明涉及真菌内生细菌领域，尤其涉及一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用。

背景技术：

1、内生菌是一定阶段或全部阶段生活于植物的组织和器官内部的真菌或细菌，普遍存在于高等植物中，木本、草本植物，单子叶植物和双子叶植物内均有内生细菌，已成为生物防治中有潜力的微生物农药、增产菌或作为潜在的生防载体菌而加以利用。

2、生物肥料发展过程中遇到的主要问题之一是缺少高效菌种资源挖掘，生物肥料企业亟待更新高效菌种，菌种的挖掘一般来源为植物内生菌等，以密歇根克雷伯氏菌为例，在唐菖蒲，玉米，石竹等玉米等植物体内，牙膏架，污水等特殊来源均有报道，分离到的一株密歇根克雷伯氏菌yzumf202001被保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：cctcc m2022708，玉米黑粉菌虽然作为一种致病菌引起玉米瘤黑粉病在玉米的各个部位侵染形成瘤状物，但是它也可以作为一种美食，在墨西哥它被叫做huitlacoche，在中国北方叫做乌米，所以其对人无害，应用：关于密歇根克雷伯氏菌的应用领域方面，绝大多数应用于对植物的促生，例如玉米，水稻都有其成功应用的先例，本创新性的将固氮细菌克雷伯氏菌yzumf202001应用于饲料发酵领域，将饲料中的蛋白质含量显著提高，是对密歇根克雷伯氏菌应用领域方面的又一重要补充。

3、因此，有必要提供一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用解决上述技术问题。

技术实现思路

1、本发明提供一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用，解决了密歇根克雷伯氏菌应用领域方面的问题。

2、为解决上述技术问题，本发明提供的一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用，包括以下步骤：

3、s1、玉米黑粉菌内生细菌的分离；

4、s11、将玉米黑粉菌接种于yepsl液体培养基中放置在28℃恒温摇床培养2天，取1ml发酵液转接至新鲜的yepsl液体培养基中在相同条件下培养12h，取50ml发酵液7000rpm离心10min收集新鲜菌体，弃废液，加入10ml的nacl重悬菌体并7000rpm离心10min收集菌体，重复此步骤一次，加入20ml裂解液置于28℃孵育3h，然后4000rpm离心10min收集原生质体，并用10mlstc溶液洗涤两次，最后重悬于2mlstc溶液中保存备用；

5、s12、将玉米黑粉菌的原生质体加入无菌研钵中，加入适量石英砂，研磨至匀浆状，使用移液枪吸取100μl匀浆涂布在无氮培养基上，放置在28℃培养箱中，待菌落长出后，挑取单菌落纯化培养，保种在15％甘油中备用；

6、s2、将s1中的玉米黑粉菌内生细菌应用于饲料中得到真菌内生密歇根克雷伯氏菌。

7、优选的，所述真菌内生密歇根克雷伯氏菌，已于2022年5月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：cctcc m 2022708。

8、与相关技术相比较，本发明提供的一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用具有如下有益效果：

9、本发明提供一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用，密歇根克雷伯氏菌能够将豆粕的蛋白含量从28％提高到36％左右，具有显著提高蛋白的作用，其他两种固氮菌也能增加蛋白含量。

技术特征：

1.一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用，其特征在于，所述真菌内生密歇根克雷伯氏菌，已于2022年5月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：cctcc m 2022708。

技术总结
本发明提供一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用，将玉米黑粉菌的原生质体加入无菌研钵中，加入适量石英砂，研磨至匀浆状，使用移液枪吸取100μL匀浆涂布在无氮培养基上，放置在28℃培养箱中，待菌落长出后，挑取单菌落纯化培养，保种在15％甘油中备用；将S1中的玉米黑粉菌内生细菌应用于饲料中得到真菌内生密歇根克雷伯氏菌。本发明提供的一种真菌内生密歇根克雷伯氏菌在饲料中的应用，密歇根克雷伯氏菌能够将豆粕的蛋白含量从28％提高到36％左右，具有显著提高蛋白的作用，其他两种固氮菌也能增加蛋白含量。

技术研发人员：周燚,梁卫军
受保护的技术使用者：湖南良平生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/11/11