一种发酵粘液乳杆菌IOB802发酵后生元粉的制备方法及其应用与流程

本发明涉及微生物，尤其是一种发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉及其在儿童青少年骨骼增长方面的应用。

背景技术：

1、身高的发育状况是判断儿童身体是否健康的一个标准，其影响着儿童成长过程及成年后的方方面面。因此，在儿童生长发育的关键时期，增强体质、调节免疫、改善骨骼生长发育状况是家长十分关心的问题，也是全社会重点关注的焦点；此外，长久以来骨骼伤由于其病程长、恢复周期长而给患者带来较大的痛苦折磨，而传统药物在长期服用过程中带来了较大的代谢压力和身体损伤，因此亟需对于骨骼生产促进、生病恢复，且对身体代谢压力较小的产品。

2、领域内公知，骨骼生长需要多种营养的配合支持，有研究表明，肠道微生物可以影响宿主的生长发育，通过诱导胰岛素生长因子（igf-1）促进骨骼的生长和重塑，目前igf-1已被证明是一种对骨骼生长有作用的激素，随着肠道有益菌定殖的增加，血清中igf-1的含量显著增高，另外，微生物代谢产物短链脂肪酸（scfa）可诱导igf-1，从而影响青少年以及成人骨伤患者的骨骼生长发育和健康。然而，领域内缺少优质的食品和药品，能够具备菌群调节和促进儿童骨骼发育的多重功效。

3、因此，开发出一种既能促进儿童骨骼和骨伤患者的骨骼生长发育，又能调节肠道菌群，增强体质的益生菌后生元粉，对社会具有重要意义。

技术实现思路

1、发酵粘液乳杆菌（ limosilactobacillus fermentum）iob802，菌株已于2021年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称cgmcc，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号为cgmcc no.23120。

2、第一方面，本发明提出一种发酵粘液乳杆菌iob802后生元粉的制备方法，具体步骤为：

3、（1）菌种活化；

4、（2）发酵参数的确定和发酵完成；

5、（3）将发酵物进行烘干，烘干水分含量控制在≤10%，得到发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉；

6、（4）后生元粉活性成分测定；

7、（5）后生元粉功能验证。

8、进一步地，所述步骤（1）中，菌种活化操作中斜面种子的培养时间为14-28h，活化种子的种龄为0-24h。

9、进一步地，所述步骤（1）中，菌种活化操作中斜面种子的培养时间为26h，活化种子的种龄为24h。

10、进一步地，所述步骤（2）中，发酵原料可以为大豆粉或胚芽米粉。

11、进一步地，所述步骤（2）中，发酵原料为大豆粉时的发酵条件参数为：料水比为1：1-1：2，接种量为1×106-5×107cfu/ml，培养时间为24-40h。

12、进一步地，所述步骤（2）中，发酵原料为大豆粉时的发酵条件参数为：料水比为1：2，接种量为5×107cfu/ml，培养时间为32h。

13、进一步地，所述步骤（2）中，发酵原料为胚芽米粉时的发酵条件参数为：料水比为1：0.5-1.1.25，接种量为1×106-5×107cfu/ml，培养时间为24-36h。

14、进一步地，所述步骤（2）中，发酵原料为胚芽米粉时的发酵条件参数为：料水比为1：0.75，接种量为5×107cfu/ml，培养时间为28h。

15、进一步地，所述步骤（4）中，具体检测方法苯酚-硫酸法检测多糖。

16、进一步地，所述步骤（5）中，具体的实验步骤为：

17、（a）取1月龄、体重25±2g的spf级昆明雄鼠若干只，随机分成4组：空白组、实验1组、实验2组、实验3组，每组10只；

18、（b）鼠房控制温度（22 ± 2) ℃，相对湿度40% -60% ，照明时间12 h，分笼饲养，自由饮水，定期清洗鼠笼，适应5天后开始实验，5天后空白组、实验组分别对小鼠进行灌胃，每日一次，持续灌胃4周；

19、（c）空白组灌胃生理盐水，实验1组灌胃发酵粘液乳杆菌iob802发酵大豆粉后生元粉，实验2组灌胃发酵粘液乳杆菌iob802发酵胚芽米粉后生元粉；

20、（d）4周后对小鼠进行相关指标检测。

21、进一步地，所述步骤（4）中，所述相关指标为：小鼠的体重、毛色、粪便、关节、体长、骨密度情况，小鼠血清胰岛素生长因子（igf-1）水平、小鼠骨钙素（ocn）水平。

22、第二方面，本发明提供一种根据上述发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉的制备方法所得到的发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉。

23、第三发面，本发明提供一种发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉在骨骼增长相关药物制备中的应用。

24、有益效果：

25、（1）本发明通过实验得到发酵粘液乳杆菌iob802菌种活化的最佳参数，得到其发酵大豆粉和胚芽米的分别最佳发酵参数，为本领域内发酵粘液乳杆菌iob802菌种的潜在功能研究提供了创造性的发酵条件控制思路和方法。

26、（2）本发明所得发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉，经动物实验验证，显著促进了细胞因子igf-1表达水平上升，促进骨骼的生长和重塑，使血清中ocn表达水平上升，促进成骨细胞活性和骨更新率增加，进而促进骨骼的生长，增加骨密度，增强骨骼强度，因此，该发酵所得后生元粉具有微生物本身带来的营养消化吸收促进以及骨骼生长发育、再生增强的双重功效，有望成为不带来身体负担的骨骼促生长优质产品，极具市场机制。

技术特征：

1.一种发酵粘液乳杆菌iob802后生元粉的制备方法，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，菌种活化操作中斜面种子的培养时间为14-28h，活化种子的种龄为0-24h。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，菌种活化操作中斜面种子的培养时间为26h，活化种子的种龄为24h。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，发酵原料为大豆粉或胚芽米粉。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，发酵原料为大豆粉时的发酵条件参数为：料水比为1：1-1：2，接种量为1×106-5×107cfu/ml，培养时间为24-40h。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，发酵原料为大豆粉时的发酵条件参数为：料水比为1：2，接种量为5×107cfu/ml，培养时间为32h。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，发酵原料为胚芽米粉时的发酵条件参数为：料水比为1：0.5-1.1.25，接种量为1×106-5×107cfu/ml，培养时间为24-36h。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，发酵原料为胚芽米粉时的发酵条件参数为：料水比为1：0.75，接种量为5×107cfu/ml，培养时间为28h。

9.根据前述权利要求任一项所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，具体检测方法苯酚-硫酸法检测多糖。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（5）中，具体的实验步骤为：

11.根据权利要求10所述的制备方法，所述步骤（4）中，所述相关指标为：小鼠的体重、毛色、粪便、关节、体长、骨密度情况，小鼠血清胰岛素生长因子（igf-1）水平、小鼠骨钙素（ocn）水平。

12.一种根据权利要求1-11任一项发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉的制备方法所得到的发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉。

13.一种发酵粘液乳杆菌iob802发酵后生元粉在促进骨骼增长相关药物制备中的应用。

技术总结
本发明提出一种发酵粘液乳杆菌IOB802发酵后生元粉的制备方法及其应用，发酵粘液乳杆菌IOB802发酵后生元粉能增加小鼠成骨细胞活性和骨更新率、促进小鼠骨骼生长，增强骨骼强度，同时可以改善小鼠免疫力的相关指标，为改善机体免疫力、增强体质提供了一定的药理学依据，同时为开发发酵粘液乳杆菌IOB802发酵后生元粉的新产品提供了思路。

技术研发人员：梁武,付田民,王海宽,韩雪梅,刘成琪
受保护的技术使用者：天津创源生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12