专利名称：一种烟叶人工醇化方法
技术领域：
本发明涉及烟叶发酵，特别涉及一种人工烟叶发酵方法。
背景技术：
烟叶收割烘烤后，为了去掉烟叶的青杂味和改善香吃味等品质，按要求对烟叶必须进行醇化。烟叶醇化方法较多，有人工醇化、自然醇化等。将调制后的原烟进行包装并存放在特点的场所在自然气候条件下进行I 3年的醇化，随着季节和环境的变化烟叶的内在成分发生变化，品质中的优点得到显现，品质将逐渐得到改善，这个过程称作烟叶的自然醇化。自然醇化也称为“自然发酵”、“陈化”，是一种缓慢的发酵方法。
烟叶发酵机理从国内外研究结果来看，研究者对烟叶发酵机理结论颇不一致，大致可分三种观点微生物作用原理、酶催化原理和氧化化学变化原理。但究竟哪种作用在发酵中起着关键作用，以及三种作用间关系如何，目前仍不清楚，也尚无定论。Koller首先对烟草发酵机理进行了探索，指出烟叶发酵在某些方面类似于乙醇发酵。Suchsland首先对雪茄烟中的微生物区系进行了研究，提出发酵是由微生物活动引起的。而后，Reid也发现在雪茄烟发酵过程中，微生物数量增加了 10 100倍，且与一些酶的活性变化呈正相关，因而认为发酵是由微生物引起的。Jesen的研究也表明，烟叶发酵过程中微生物数量增加，因而认为微生物在烟叶发酵中起重要作用。Johnson则认为微生物的作用只是增加了烟叶中酶的含量，对发酵未起关键性作用。目前，自然醇化的不足主要有一是因烟叶富含营养物质以及长期与外部环境密切接触，烟叶很容易生虫；二是在春夏秋冬四季变化过程中，因为温度、湿度变化大，烟叶很容易产生霉变；三是因烟叶长期与过量空气接触，烟叶颜色很容易变褐、变深，所以自然醇化时间不能过长，一般不能超过3年。自然醇化由于存在长虫、霉变等原因一方面给烟叶造成严重的损失，据了解烟叶醇化后的损失达O. 8%，一个中型卷烟厂年造成的直接经济损失达2000多万元。另一方面还严重影响烟叶的内外在品质,影响烟叶深加工产品的质量。因此有必要进行对烟叶发酵技术进行革新，从目前烟叶发酵技术的使用情况来看，大多数烟叶发酵技术还处于实验室摸索阶段，尚未形成一套系统而行之有效适用工业化大生产的烟叶发酵技术。现有的烟叶醇化技术要么对反应条件要求苛刻，要么有其他副作用，限制了其在工业生产上的应用。
发明内容
发明目的
本发明的目的是提供一种人工烟叶发酵方法，可以应用工业大生产，同时缩短了发酵时间，节约了成本，并保证烟叶质量。
技术方案
一种烟叶人工醇化方法，其特征在于
A、将发酵一年，两年，三年的烟叶分别用营养肉汤培养基培养菌体，获得菌体；
B、将发酵一年，两年，三年的烟叶分别用PDB培养基培养菌体，获得菌体；
C、分别将用营养肉汤培养基培养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1-3 :1-3 :1-6合并菌体；
D、分别将用PDB培养基培养菌养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1-3 :1-3 :1-6合并菌体；
E、将上述获得菌体再次合并后加入没有发酵的烟叶上进行发酵。 作为一种优化方式步骤C中将用营养肉汤培养基培养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1: 3 :6合并。作为一种优化方式步骤D中将用PDB培养基培养菌获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1: 3 :6合并。所述步骤A所述的培养条件为37°C，Id。所述步骤B所述的培养条件PDB培养基，28°C，3d摇床培养。所述步骤E所述的发酵条件为置于培养架上室温发酵，共发酵30d。
本发明原理1、微生物加速烟叶纯化的机制微生物的生长周期较短，在生长过程中能产生多种酶类物质诱导或刺激烟叶内多种酶系统，进而促使烟叶中的底物充分降解转变为小分子香气物质；并且微生物自身代谢过程中也可以产生多种小分子致香物质,从而促进烟叶的醇化。本发明巧妙采用不同年份烟叶提取菌体，然后在未发酵烟叶上发酵，模拟自然发酵过程。不同年份的烟叶所含菌种类不同，其相互发生反应，诱导或刺激烟叶中酶类系统，从实验结果看来是有效的。有益效果1、本发明采用两种培养基分别培养细菌和真菌，并将不同年份的烟叶上的菌体进行收集，最主要的发明点在于，采用优化比例合并，经实验考察认为其可以模拟自然发酵的过程，但过程缩短，品质基本相似。结果表明经过30d处理后烟叶可以与发酵两年烟叶品质相当。2、本发明操作简单，适合工业生产，能缩短发酵时间，降低生产成本。
具体实施例方式实施例1
试验材料
未发酵的烟叶，分别发酵1、2、3年的本地烟叶(均产自云南)，无菌水，营养肉汤培养基，PDB培养基。方法1、将I年发酵烟叶进行表面消毒后捣碎，用无菌水稀释分别倒入以上营养肉汤培养基，37°C，ld ;PDB培养基，28°C，3d摇床培养。2年发酵烟叶和3年发酵烟叶处理同上； 2、分别将用营养肉汤培养基培养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1:1 I合并菌体；
3、分别将用PDB培养基培养菌养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1:1 1合并菌体；
4、将步骤(3)和(4)获得菌体再次合并后加入没有发酵的烟叶上进行发酵。具体方法为将将步骤(4)培养后的菌体菌种的混合将菌液直接离心后得到菌泥，以脱脂牛奶作为冻干保护剂进行冷冻干燥后得到粉末状的微生物制剂，喷洒到紫外灯照射灭菌后的未发酵烟叶上。置于培养架上室温发酵，每隔2天抽查并记录发酵情况(烟叶颜色、气味的变化及有无霉变)，共发酵30d。实施例2 试验材料
未发酵的烟叶，分别发酵1、2、3年的本地烟叶(产自云南)，无菌水，营养肉汤培养基，PDB培养基。方法
1、将I年发酵烟叶进行表面消毒后捣碎，用无菌水稀释分别倒入以上营养肉汤培养基，370C，Id ；PDB培养基，28°C，3d摇床培养。2年发酵烟叶和3年发酵烟叶处理同上；
2、分别将用营养肉汤培养基培养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1:2 5合并菌体；
3、分别将用PDB培养基培养菌养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1:2 5合并菌体；
4、将将步骤(3)和(4)获得菌体再次合并后加入没有发酵的烟叶上进行发酵。具体方法为将将步骤(4)培养后的菌体菌种的混合将菌液直接离心后得到菌泥，以脱脂牛奶作为冻干保护剂进行冷冻干燥后得到粉末状的微生物制剂，喷洒到紫外灯照射灭菌后的未发酵烟叶上。置于培养架上室温发酵，每隔2天抽查并记录发酵情况(烟叶颜色、气味的变化及有无霉变)，共发酵30d。实施例3 试验材料
未发酵的烟叶，分别发酵1、2、3年的本地烟叶(产自云南)，无菌水，营养肉汤培养基，PDB培养基。方法
1、将I年发酵烟叶进行表面消毒后捣碎，用无菌水稀释分别倒入以上营养肉汤培养基，37°C，ld ;PDB培养基，28°C，3d摇床培养。2年发酵烟叶和3年发酵烟叶处理同上；
2、分别将用营养肉汤培养基培养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1:3 :6合并菌体；
3、分别将用PDB培养基培养菌养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1:3 6合并菌体；
4、将将步骤(3)和(4)获得菌体再次合并后加入没有发酵的烟叶上进行发酵。具体方法为将将步骤(4)培养后的菌体菌种的混合将菌液直接离心后得到菌泥，以脱脂牛奶作为冻干保护剂进行冷冻干燥后得到粉末状的微生物制剂，喷洒到紫外灯照射灭菌后的未发酵烟叶上。置于培养架上室温发酵，每隔2天抽查并记录发酵情况(烟叶颜色、气味的变化及有无霉变)，共发酵30d。实施例4
以未发酵的烟叶作为原始样，发酵2年的烟叶为对照样，添加实施例1-3获得微生物制剂进行人工醇化30天后的烟叶为添加样进行化学成分检测及评吸结果的对比。化学成分检测结果
权利要求
1.一种烟叶人工醇化方法，其特征在于 A、将发酵一年，两年，三年的烟叶分别用营养肉汤培养基培养菌体，获得菌体； B、将发酵一年，两年，三年的烟叶分别用PDB培养基培养菌体，获得菌体； C、分别将用营养肉汤培养基培养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1-3 :1-3 :1-6合并菌体； D、分别将用PDB培养基培养菌养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1-3 :1-3 :1-6合并菌体； E、将步骤C和D获得菌体再次合并后加入没有发酵的烟叶上进行发酵。
2.根据权利要求1一种烟叶人工醇化方法，其特征在于所述步骤C中将用营养肉汤培养基培养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1: 3 :6合并菌体。
3.根据权利要求1一种烟叶人工醇化方法，其特征在于步骤D中将用PDB培养基培养菌获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1: 3 :6合并菌体。
4.根据权利要求1一种烟叶人工醇化方法，其特征在于所述步骤A所述的培养条件为37。。，Id。
5.根据权利要求1一种烟叶人工醇化方法，其特征在于所述步骤B所述的培养条件28。。，3d。
6.根据权利要求1一种烟叶人工醇化方法，其特征在于所述步骤E所述的发酵条件为置于培养架上室温发酵，共发酵30d。
全文摘要
本发明涉及烟叶发酵，特别涉及一种人工烟叶发酵方法。一种烟叶人工醇化方法，其特征在于将发酵一年，两年，三年的烟叶分别用营养肉汤培养基培养菌体，获得菌体；将发酵一年，两年，三年的烟叶分别用PDB培养基培养菌体，获得菌体；分别将用营养肉汤培养基培养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1-31-31-6合并菌体；分别将用PDB培养基培养菌养获得发酵一年，两年，三年的烟叶菌体按质量比1-31-31-6合并菌体；将上述获得菌体再次合并后加入没有发酵的烟叶上进行发酵。本发明经实验考察认为其可以模拟自然发酵的过程，但过程缩短，品质基本相似。
文档编号A24B15/20GK103005697SQ201310018759
公开日2013年4月3日 申请日期2013年1月18日 优先权日2013年1月18日
发明者路易斯伊格纳罗, 张娟, 叶亚东, 滕凌, 朱文华, 全利, 潘鹂, 胡娟, 肖慧, 叶汝章, 杨紫俊, 张俊, 李永忠, 霍世元 申请人:常州亚当生物技术有限公司