专利名称：过敏性鼻炎的治疗的制作方法
技术领域：
本发明涉及分离自扁虱且在治疗和预防过敏性鼻炎中非常有效的各种蛋白。这些蛋白非常适于治疗感染区域且对于该种疾病有非常好的疗效并能够减轻其症状。
过敏性鼻炎是医学名词，其意思是由过敏原例如花粉或尘埃所致的鼻粘膜的发炎。其一般有两种类型，季节性的和长期性的。季节性过敏性鼻炎通常指的是花粉热且一般由霉菌或花粉所致。长期性的过敏性鼻炎通常由内在的对一种或多种敏感原的敏感所致。其症状一般会长年持续，或者只要患者暴露于该敏感原，其症状会一直持续。一般认为有超过15％的西方人感染有该种疾病。
两种过敏性鼻炎涉及到可导致发炎的1型(IgE-介导的)超敏性。该炎症被认为由肥大细胞及反应于一定过敏原的血生嗜碱细胞的过量脱粒所致。其可以致使IgE水平提高且伴随着炎症调节剂例如组胺的释放，及趋药性因子例如细胞因子，前列腺素及白细胞三烯的释放，其结果致使局部炎症反应的发生。
在许多情况下，过敏性鼻炎的预防可以通过避免与过敏原接触来加强，因为即使现有的最佳医疗手段面对高量过敏原也是无效的。然而，其并不是经常可能的和实用的。
许多干涉途径被广泛使用，其包括使用鼻内血管收缩药物，鼻内及系统性的抗组胺剂，鼻内糖皮质激素，肥大细胞稳定剂例如cromolyn化合物，及口服解充血药。许多已建立的治疗方法中的一些具有的一个问题是其具有一种镇痛效果，由此导致患者行为表现、机敏性及感知功能下降。尽管一些非镇静剂的组胺H1拮抗剂现在也是可以获得的，但是也非常有必要鉴别出其他的对该种疾病有疗效的非镇静剂药物。
传统的H1受体拮抗剂被广泛用作治疗过敏性反应包括过敏性鼻炎(花粉热)，风疹，昆虫叮咬及药物的超过敏性等的抗组胺剂。H1受体拮抗剂靶定与这些疾病相关的红色及炎症。然而，使用H1受体拮抗剂会产生许多不希望的作用。当被纯粹用作抗组胺剂时，所有作用于中枢神经系统(CNS)的影响都是不期望的。当被用作镇痛剂或抗呕吐剂使用时，一些CNS效果例如头晕眼花，耳鸣及疲惫也是不期望的。过量的药剂可以产生兴奋且使小孩产生抽搐。外围抗蕈毒碱作用也是不期望的，其最常见的是嘴发干，然而也会经常发生视力模糊，便秘及尿液滞留。同样可以看到与药物药效无关的副作用，这样，在治疗过敏性皮炎时随着这些药物的局部给药胃肠紊乱会经常发生。
H2受体拮抗剂同样被用作抗组胺药剂。这些药剂靶定神经系统某区域被激活产生的与症状相关的痒觉。
因此可以看到用于控制组胺作用的药剂并不总是有效。其有如此局限的疗效的原因可能与这些药剂仅适于与某一亚类组胺受体相作用的特性有关，尤其是当某一类症状要求多种受体种类的干涉时。事实上，现在已知具有大量不同种类的化学引诱物及血管活性物质与过敏性鼻炎相关，其不仅被肥大细胞释放也为嗜曙红细胞及其它细胞所释放，其在具有过敏性炎症的患者体内产生不期望的症状。
因此非常需要这样的药剂，其对减缓该种疾病症状非常有效，但是却不会产生减损其作为治疗化合物的优势的副作用。
在食血寄生虫例如扁虱中，很早以前就已经鉴别出能够与组胺结合的分子。例如，一种triatome臭虫Rhodnius prolixus分泌的唾液氧化一氮运输血蛋白(nitrophorin)已经被发现可以与组胺相结合(Ribeiro & Walker，1994)。来自扁虱的血管活性胺结合蛋白族的分离已描述于共同未决的国际专利申请PCT/GB97/01372，其为本发明的申请人所拥有。该申请的发明内容全部纳入本申请。这些蛋白结合于组胺且相互间非常相关。其中一些分子也结合于5-羟色胺。这些分子明显不同于任何H1，H2或H3受体家族且以不同的方式结合于组胺上。
本发明是基于这样的发现这些扁虱蛋白及基于其结构的分子，对于治疗过敏性鼻炎是非常有效的。
发明简述按照本发明，提供了histacalin蛋白在生产用于治疗或预防过敏性鼻炎的药物中的用途。
本发明同样提供了一种治疗和预防过敏性鼻炎的方法，其包括给予接受治疗的个体以有效量的histacalin蛋白。
在本申请中词组″histacalin蛋白″表示以下含义
(a)任何血管活性胺结合蛋白，其特异性地结合至血管活性胺，其离解常数小于10-7M，且其与共同未决国际专利申请PCT/GB97/01372所揭示的MS-HBP1，FS-HBP1及FS-HBP-2属于同一蛋白家族，其中如果一种蛋白其最初的成熟单体序列具有不超过260个的氨基酸且在蛋白完整序列中至少有30个氨基酸是保守的，也就是说，优选地使用GCG堆积命令(Program Manual for the WisconsinPackage，1994；gap creating penalty＝3；gap extension penalty＝1，scoring matrix Blosum62.cmp，pileup carried out usingthe endweight option)该蛋白与MS-HBP1，FS-HBP1及FS-HBP-2进行序列比较有至少30个相同残基，该蛋白被认为属于所述蛋白家族；(b)来自于嗜血节肢动物的蛋白，其特异性地结合至组胺，其解常数小于10-7M，且其含有序列基序D/EAWK/R(优选DAWK，更优选QDAWK)及Y/CE/DL/I/FW(优选Y/C ELW)；(c)自然生物变种，例如如上(a)或(b)定义的蛋白的等位基因变种或者地理上变种；(d)如上(a)，(b)或(c)定义的具有相同功能的蛋白，其具有来自野生蛋白序列的单一或多种氨基酸的替换，增加，插入和/或删除，和/或化学修饰的氨基酸序列的替代，但是其并不影响结合至其相应的血管活性胺的生物学活性；(e)如上(a)，(b)，(c)或(d)定义的一种蛋白的活性片段，其中“活性片段”意指一被删节的蛋白，其保留有结合至其相应的血管活性胺的生物学功能；及(f)融合蛋白，其包含有如上(a)，(b)，(c)，(d)或(e)所定义的蛋白，其融合进肽或其他蛋白中，例如一个标记，其可以是，例如，生物活性的，放射性的，酶活性的或荧光性的或一种抗体。
蛋白MS-HBP1，FS-HBP1及FS-HBP-2的一个对比可以通过使用GCG’s堆积命令(Program Manual for the Wisconsin Package，1994；gap creating penalty＝3；gap extension penalty＝1，scoringmatrix Blosum62.cmp，pileup carried out using the endweightoption)获得，其如下表1所示。
表1FS-HBP1(最上面一行)，FS-HBP2(中间行)及MS-HBP1(最底下一行)的序列比较。同一残基被标记为″＝″，其位于三行序列的下面。
该序列比对结果如下
优选地，一种蛋白如上述蛋白一样位于同一蛋白家族，如果其如上述a)所述当与表1所列蛋白比对时含有超过40个，更优选地超过50个，更好地超过60个残基，最优选70个残基或更多残基具有同一性。
优选地，histacalin蛋白获自血生外寄生虫，例如水蛭，蚊子或者扁虱。更优选地，histacalin蛋白获自扁虱，尤其是其中一种硬扁虱例如R.appendiculatus，I.ricinus及D.reticulatus。
优选地，如上述(a)所定义的一种histacalin蛋白其具有至少50％，更优选地至少60％且最优选地70％或更多氨基酸残基在与蛋白MS-HBP1，FS-HBP1及FS-HBP2比较时具有同一性。
优选地，一种药物学上可以接受的载体同样被用于制造本发明所述的药剂。这种药物学上可以接受的载体同样适用于本发明所述的方法。
合适的药物学上可以接受的载体包括那些并不自身诱导产生对接受组合物的个体产生有害抗体的载体。一般来讲，合适的载体是大的、代谢较为缓慢的大分子例如蛋白质，多糖，聚乳酸，聚羟基乙酸，聚合体氨基酸，氨基酸共聚物，油脂聚合体(例如油滴或脂质体)及失活的病毒颗粒。该载体对于本领域技术人员来说已是公知技术。
在治疗组合物中所包含的药物学上可以接受的载体可以同样包括液体例如水，盐水，甘油及乙醇。此外，可以包括辅助物质例如润湿剂或乳化剂及pH缓冲物质。
作为一种选择，一种或多种其他传统的抗组胺剂或抗镇痛药剂也可用于制造本发明所述的药剂。此种传统的抗组胺剂或抗镇痛药剂同样可以使用于本发明所述的方法。含有这些药剂使得对于过敏性鼻炎的治疗具有协同效应。
有时传统的抗组胺药剂具有不期望的副作用，例如昏睡。对于这种可能性，进一步将一种或多种抗镇痛剂包括在本发明的药剂生产及方法中将会非常有益。合适的抗镇痛剂对于本领域技术人员来说已为公知技术。
上述的histacalin蛋白可被用对于各种症状的过敏性鼻炎治疗。该词语意指包括季节性的及常年性的过敏性鼻炎。
治疗可以是非经常性的，例如在季节性过敏性鼻炎的情况下。上述情况中的患者使用histacalin蛋白仅在过敏性鼻炎的症状出现或将要出现时，例如，在含有大量花粉的空气条件下。
任何一种哺乳类动物都适于使用本发明所述的方法进行治疗。更为适宜的是人类患者。
遭受到四季不间断的过敏性鼻炎的患者需要持续使用histacalin蛋白以作为一种预防手段。为了保证给予患者有效剂量，患者需要每日使用histacalin蛋白一次，两次，三次甚至四次。
Histacalin蛋白可以通过鼻滴或者气溶胶喷雾局部给药到感染区域或者通过口服进行系统治疗，例如使用胶囊或药筒或通过注射。
更适宜的是，histacalin蛋白通过鼻内途径给药，这样使鼻粘膜暴露于其中。鼻内途径给药的最适宜的药剂形式是气溶胶喷雾，此种实例可见于已有技术中(参见，例如British National Formulary No.37，March 1999Drugs used in nasal allergy)。Histacalin蛋白应该在合适的药剂载体例如水或盐水中稀释。适宜的是使用pH 7.2的生理盐水。
对于具体治疗的有效剂量可以通过传统的实验进行确定，且处于专业技术人员判断力之内。例如，为了明确表达一定范围的剂量值，可以采用细胞培养物试验及动物实验。该组合物的剂量优选位于人群中的50％均有疗效的剂量范围内，且其在这个水平表现很少甚至不具有毒副作用。对于本发明的目的，词组″治疗的有效性″意指其产生临床上鼻气流阻力明显减小和/或鼻粘液量明显减少和/或鼻瘙痒症减少。
对于本发明的目的，有效的剂量被认为是对于所给药的个体为在0.01μg/kg及50μg/kg之间，或者更为典型地是在0.05μg/kg及10μg/kg之间。
优选地，对于鼻内给药的途径，histacalin蛋白以溶液形式出现，其在0.1μg/ml及100μg/ml之间，优选是在0.1μg/ml及10μg/ml之间，更优选是在1μg/ml及8μg/ml之间。
本发明的不同方面及技术方案将参照相应的附图以实施例的形式进行详尽描述，其中有下列附图
图1显示了一组获自三个志愿接受治疗的患者鼻分泌物的数据；图2显示了一组获自三个志愿接受治疗的患者鼻通气阻力的数据；图3a，3b及3c显示的是以图形形式表示的每一个体鼻分泌物的数据；且图4a，4b及4c显示的是以图形形式表示的每一个体鼻通气阻力的数据。
值得注意的是对于本发明所作出的一些细节修饰并未超出本发明的保护范围。实施例在本发明中，三个个体通过鼻内给予组胺对其进行刺激。所使用的组胺浓度为0.5mg/ml，1.0mg/ml，2.0mg/ml，4.0mg/ml，并且如果在预处理刺激中有必要获得鼻通气阻力的100％或者更大的提高，组胺使用浓度为8mg/ml。100微升的各药剂在每一次刺激中给药到鼻孔内。
最初，对个体的前鼻分泌物进行基线测量。通过让个体鼻孔喘气至预先称重好的纸手绢上，然后重新称重以计算所产生的鼻粘液的重量。
然后对每一个体再给予鼻组胺反应剂量进行刺激。每一次刺激完成后45分钟，重复进行基线测定。然后一种histacalin蛋白，EV504，以在磷酸缓冲的盐水中预称部分histacalin新鲜溶液的形式进行给药。该溶液通过吸液管滴入每一鼻孔内。
EV504是国内命名的组胺结合蛋白MS-HBP1，其描述于PCT/GB97/01372。在附图中其指的是VAC life或组胺结合蛋白。
再经过15分钟后，再一次进行重复的鼻组胺剂量反应刺激。测量的结果记录为总鼻通气阻力，其通过鼻压测量法(activeposterior rhinomanometry)(在后鼻孔附近放置一膨胀气球且检测压力及体积的变化)进行，和通过测量前鼻分泌物，如通过排出的分泌物的重量来进行测量。前鼻分泌物被表示为组胺刺激的累积总量。这些测量方法如图1，3a，3b及3c所示。
对于图2，4a，4b及4c，所测量的鼻通气阻力由盐水刺激反应的百分数来表示(其取为第一次组胺剂量反应刺激)。
权利要求
1.一种histacalin蛋白(如上定义)在制造用于治疗和预防过敏性鼻炎的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述histacalin蛋白获自食血皮外寄生虫。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述histacalin蛋白获自扁虱。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述histacalin蛋白是MS-HBP1，FS-HBP1，FS-HBP2或D.RET6蛋白，及其功能等同物及活性片段。
5.如权利要求1-4任一项所述的用途，其特征在于一种药物学上可接受的赋形剂同样用于生产该种药剂。
6.如权利要求1-5任一项所述的用途，其特征在于一种或多种抗组胺药剂或抗镇痛药剂同样用于生产该种药剂。
7.一种治疗或预防过敏性鼻炎的方法，其包括以一有效剂量给予受治疗个体一种如权利要求1-4任一项所述的histacalin蛋白，或权利要求5及6任一项的药物组合物。
8.如权利要求1-6任一所述的用途或者权利要求7所述的方法，其特征在于所述过敏性鼻炎是季节性的或终年的过敏性鼻炎。
全文摘要
本发明涉及分离自扁虱且在治疗和预防过敏性鼻炎中非常有效的各种蛋白。这些蛋白非常适于治疗感染区域且对于该种疾病有非常好的疗效并能够减轻其症状。
文档编号A61K45/00GK1372471SQ0081237
公开日2002年10月2日 申请日期2000年8月24日 优先权日1999年9月1日
发明者P·A·努塔尔, G·C·佩森 申请人:发展技术有限公司