专利名称：利用活性提取物改善皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲的外观的制作方法
技术领域：
本发明涉及局部用组合物，该局部用组合物含有来源于植物或植物材料的天然或合成活性成分。具体地说，本发明涉及特别是通过使皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲亮泽，来改善皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲的外观的局部用组合物。更具体地说，本发明涉及特别是通过使皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲亮泽，来增强上述部位的美观的生物活性提取物。
背景技术：
消费者一直在寻找改善他们的毛发、皮肤、嘴唇和指甲的外观的方法。他们对有效亮泽及减少毛发、皮肤、嘴唇和指甲中色素沉着的产品有需求。这类产品的一般申请包括，例如漂白色素沉着过度的毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲；减少老年斑；使皮肤变色均匀或优化；改善眼下黑眼圈的外观；治疗黑斑病、黄褐斑、雀斑、烧伤疤痕、和损伤后色素的过度沉着；漂白头皮、腿、脸及其余想漂白和退色部位的毛发；及漂白指甲的着色斑。
皮肤、毛发、嘴唇和指甲的色素沉着取决于表皮、毛发纤维和甲床中存在的黑色素水平。表皮中存在三种不同类型的黑色素DHI-黑色素、DHICA-黑色素和褐黑素。不同类型的黑色素在颜色和形状上不同。DHI-黑色素的颜色最深，是黑色的。DHICA-黑色素的颜色是褐色的。褐黑素的颜色最浅，是微红色的。
在被称为黑色素体的特化细胞器中，在色素生成细胞(黑色素细胞)内合成黑色素。黑色素细胞对刺激发生反应而调节黑色素的合成。
已将很多物质施用于皮肤以使皮肤亮泽。这些物质包括氢醌、曲酸、甘草和/或其衍生物、抗坏血酸和/或其衍生物、熊果苷、熊果、洋甘草(Glycyrrhiza glabra)及其衍生物、普通小球藻(Chlorella vulgaris)提取物、紫苏提取物和椰子提取物。所述紫苏提取物在以下专利及专利申请中作为增白剂公开美国专利5,980,904及日本公开号07025742、07187989、10265322、2001163759和2001181173。所述椰子提取物在日本专利2896815B2中作为增白剂公开。一种从椰子组织的海绵体中得到的提取物在美国专利5,756,099中被用于防止晒黑的遮光剂组合物中。
来源于植物和植物种子的活性成分已被用于多种以医学、治疗和化妆为目的的局部用组合物中。这些活性成分可从植物的多个部位获得，所述部位例如种子、针叶、叶子、根、树皮、球果、茎、根茎、愈伤组织细胞、原生质体、器官和器官系统及分裂组织。这些活性成分可以多种形式加入所述的组合物中。这些形式包括纯化或半纯化的成分、固态或液态的提取物或衍生物、或固态的植物物质。植物物质可以采用多种诸如完整的、切碎的、磨碎的或压碎的等从属形式加入。
印楝(Azadirachta indica)，即印度楝树，以及楝科其他植物的提取物，已知具有杀虫活性。印楝素是许多这些提取物的主要活性成分，其为四降三萜类化合物类型的liminoid，用于商业杀虫剂中。已显示四降三萜类化合物是有效的昆虫生长调节剂和摄食抑制物。由印楝种子材料生产浓缩印楝素的方法是本领域公知的。授予Holowach-Keller等人的美国专利5,698,423就涉及一种通过对印楝进行细胞培养来生产印楝素的方法。
洋甘草(Glycyrrhiza glabra linn.)的提取物来源于亚热带和温带的多年生草本植物。洋甘草，一般称为甘草，已被用作食物甜味剂。根提取物含有甘草酸和甘草次酸。甘草酸已知具有抗炎作用。甘草根的提取物和甘草次酸已知具有去氧皮质酮和类似ACTH(促肾上腺皮质激素)的作用。已被用于镇痛剂和温和的祛痰药。体外研究已表明甘草次酸和甘草皂甙均具有抗病毒的特性(参见Badam“In Vitro Studies on the Effect ofGlycyrrhizin from Glycyrrhiza glabra linn.(洋甘草中甘草皂甙对于某些RNA和DNA病毒作用的体外研究)”，Ind.J.Pharma.，26，194～199(1994))。洋甘草的提取物可用Iyer等人的美国专利6,248,309中所描述的方法提取。
海巴戟(Morinda citrifolia)的提取物来源于茜草科植物。授予Yegorova的美国专利6,387,370中已将海巴戟用于降低哺乳动物血液中氧化固醇的累积和使胆固醇及血压正常化的组合物中。Wadsworth等人的美国专利6,417,157描述了提取和纯化海巴戟的精油产品的方法。
番茄糖脂提取物来源于番茄的果实。提取及合成番茄糖脂的方法在Mudd等人的美国专利4,745,186中公开。
紫铆(Butea frondosa)，也被称为胶虫树(Butea monosperma)的提取物来源于东印度落叶树。紫铆已被用作收敛剂以及用于治疗腹泻、痢疾和胃灼热中。最近还检测到紫铆在眼用抗炎活性方面的应用(参见Mengi，“Evaluation of Ocular Anti-Inflammatory Activity(对于紫铆的眼用抗炎活性的评价)”Ind.J.Pharma.27，116～119(1995))。
Naringi crenulata，也被称为补血草(Limonia crenulata)的提取物来源于东印度本土的一种小树。
乌蕨(Stenoloma chusana)是一种在东南亚发现的多年生草本植物。已知这种植物的提取物可用于治疗伤风、流行性感冒、支气管炎、烧伤、刀伤和皮肤疼痛(参见A Barefoot Doctor′s Manual，Running Press，Philadelphia，PA，第638页)。
迄今，这些提取物还未用作亮泽皮肤、嘴唇、毛发或指甲用途的组合物中的活性成分。
人们希望获得使用新的生物提取物的组合物，这些组合物增强皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲的美观，尤其是提供有效程度的亮泽、漂白、淡化色素、增白和/或去除色素(在下文中单独或共同称为“亮泽”或“使亮泽”)。更进一步希望获得有效亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲并且需要最小生物浓度的组合物。
发明内容
本发明的一个目的是提供增强皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲的美观包括矫正老化作用的化妆品组合物。
本发明的另外一个目的是提供亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的组合物，该组合物含有活性植物提取物，优选含有具有生物学活性的植物提取物。
本发明的另外一个目的是提供特别是通过使皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲亮泽来改善外观的组合物，其中该组合物含有有效量的活性植物提取物。
本发明的另外一个目的是提供特别是通过使毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲亮泽来改善外观的组合物，其中该组合物适合局部施用于毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲。
本发明的另外一个目的是提供通过改善皮肤和/或嘴唇的炎症来改善皮肤和嘴唇的外观的组合物，所述炎症包括由外部因素引起或可能引起的炎症。
本发明更进一步的目的是提供适合口服的亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的组合物。
本发明更进一步的目的是提供使毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲亮泽的方法，该方法包括将所述组合物局部施用于毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲。
本发明的上述及其他目的和优势是由改善外观的组合物所提供的，该组合物尤其是通过亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲或通过减轻、预防或治疗皮肤或嘴唇的炎症来改善外观，所述炎症包括由皮肤或嘴唇的小病、痛苦或疾病引起的炎症，或由外部因素引起或可能引起的炎症，其中所述组合物含有有效量的至少一种下列活性提取物紫铆、补血草、乌蕨或它们的任意组合。
此外，本发明也提供特别是通过亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲或通过减轻、预防或治疗皮肤或嘴唇的炎症来改善外观的组合物，所述炎症包括由皮肤或嘴唇的小病、痛苦或疾病引起的炎症，或由外部因素引起或可能引起的炎症，其中所述组合物含有有效量的至少一种活性提取物，和有效量的至少一种下列额外提取物印楝、洋甘草、海巴戟、番茄糖脂或它们的任意组合。
本发明还提供特别是通过亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲或通过减轻、预防或治疗皮肤或嘴唇的炎症来改善外观的方法，所述炎症包括由皮肤或嘴唇的小病、痛苦或疾病引起的炎症，或由外部因素引起或可能引起的炎症，该方法包括局部施用本发明的任一组合物。本发明还提供通过口服本发明的任一组合物来亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的方法。
具体实施例方式
本发明提供特别是通过亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲来改善毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的外观的组合物。该组合物优选为施用于毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的局部用组合物。但该组合物可口服。在所有的应用中，该组合物导致毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的亮泽。本发明的组合物当施用于皮肤或嘴唇时同时还提供抗炎益处，由此改善皮肤的外观。
所述组合物含有一种或多种下述提取物紫铆、补血草、乌蕨或它们的任意组合，所述提取物作为具有生物学活性的植物提取物或成分，或者是活性量。发明人意外地发现这些活性提取物增强了毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的美观，并且特别是，减少了色素沉着以及亮泽了毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲。更特别的是，这些活性提取物意外地显示减少黑色素的生成并减少色素过度沉着的状态。
现在还发现将至少一种这些活性提取物(即紫铆、补血草、乌蕨或它们的任意组合)与至少一种下述其他或额外提取物(即印楝、洋甘草、海巴戟、番茄糖脂或它们的任意组合)合用可减少毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的黑色素沉着。
本发明所述的使毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲亮泽是指达到下述一种或多种优点。这些优点包括漂白色素沉着过度的毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲；减少老年斑；使皮肤变色均匀或优化；改善眼下黑眼圈的外观；治疗黑斑病、黄褐斑、雀斑、烧伤疤痕、和损伤后的过度色素沉着；漂白头皮、腿、脸及其余想漂白和退色部位的毛发；及漂白指甲的着色斑。
概括地讲，本发明还提供用于皮肤以增强皮肤美观的局部用组合物，该组合物含有有效量的一种或多种本发明所述的活性成分。优点在下述任一方面中显示出来减小毛孔的大小；改善皮肤色泽、亮泽、透明度和/或紧度；提高抗氧化剂活性；改善皮肤的结实度、饱满度、柔软度和/或柔和度；改善原胶原和/或胶原的生成；改善皮肤肌理和/或促进肌理重建；改善皮肤屏障的修复和/或功能；改善皮肤轮廓的外观；恢复皮肤的光泽和/或亮度；补充皮肤中由于老化和/或更年期而减少的必需营养物质和/或成分；改善皮肤细胞间的通讯；增加细胞的分裂和/或增殖；提高由于老化和/或更年期而降低的皮肤细胞的新陈代谢；改善皮肤的含水性；促进和/或加速细胞的更新；增加皮肤厚度；降低皮肤的敏感性；增加皮肤的弹力和/或弹性；并且在同时使用或不用α或β羟酸、酮酸或其他表皮剥脱素时增加脱落。
其次，本发明还提供用于皮肤以提供抗老化益处的局部用组合物。该组合物含有有效量的一种或多种本发明所述的活性成分，当将该组合物用于人皮肤时，其预防、治疗和/或改善被施用部分皮肤区域的多种老化症状。本发明特别提供治疗皮肤的组合物和方法以防止、抑制、减少和/或改善由于例如岁月所致老化、激素所致老化和/或光老化所产生的皮肤病学老化症状。这些老化症状包括，但不限于，皮肤脆弱；胶原和/或弹性蛋白的丧失；皮肤中的雌激素不均衡；皮肤萎缩；纹路和/或皱纹的外观和/或深度，包括细微的纹路；皮肤的变色，包括黑眼圈；皮肤松垂；皮肤疲劳和/或紧张，例如由于环境压力如污染和/或温度改变所致的皮肤发疹；皮肤干燥；皮肤剥落；细胞老化；失去皮肤色泽、弹性和/或光泽；失去皮肤结实度；皮肤肌理差；失去皮肤弹力和/或弹性；以及皮肤变薄。
从最概括的方面来说，本发明不受活性提取物或试剂的生理和/或化学效果的任何特定性质描述的限制。但是，据信用于本发明所述组合物及方法中的活性提取物通过以下方式减少色素过度沉着区域中的黑色素，所述方式为降低黑色素细胞中的暗色色素的形成；以及通过降低黑色素细胞的pH，和/或与黑色素合成或着色有关的诸如铜等金属的直接螯合作用，将黑色素的合成途径转向生成浅色黑色素。
在本发明的另一方面，本发明所述的局部施用组合物抑制、减轻、改善和预防皮肤和嘴唇由小病、疾病状态或疾病引起的刺激或炎症，或由外部因素例如环境因素、化学试剂、医学试剂和化妆剂引起的刺激或炎症。这样的皮肤刺激可由于受风、热或冷、空气污染物和香烟的烟的影响而产生。化妆品和药用品也可能含有一些成分或成分的组合，这些成分作为副作用产生可见的皮肤刺激。对皮肤刺激的敏感性在个体与个体之间可有差异，并且经常限制某些产品的使用或活性成分的某些浓度的使用，所述活性成分在更大量可以产生更有利的效果但作为副作用却产生皮肤刺激。皮肤刺激的症状和状况包括，但不限于，红斑、牛皮癣、浮肿、色素沉着过度、色素沉着不足、粉刺、疣、轮形体、斑点、肤色不均匀、起鳞屑、剥落、痒或瘙痒、紧绷、灼热、刺痛、螫刺、麻刺、麻木、风刺激、温度刺激、烟刺激、化学刺激、或它们的任意组合。因此，本发明的所述方法提供了占组合物重量大约0.001重量％至大约20重量％的有效量，在治疗一种或多种下述情况中是有效的减少或防止胶原的丧失；改善皮肤结实度/饱满度；改善皮肤肌理；减少或防止纹路和皱纹；改善皮肤的色泽；增加皮肤厚度；减小毛孔大小；减少皮肤变色；减少粉刺；减少牛皮癣；降低皮肤的敏感性；和减少疣。
化妆品、皮肤病学产品和药用品通常含有一种或多种产生皮肤刺激的活性剂。作为副作用产生皮肤刺激的活性剂的例子包括，但不限于，羟基化的酸及其衍生物、α-羟酸(例如，乳酸、乙醇酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸、杏仁酸、葡糖酸、甲基乳酸、苯基乳酸、阿卓乳酸、甘油酸、二苯乙醇酸、z-羟基庚酸、z-羟基辛酸及它们的任意组合物)、β-羟酸(例如，水杨酸、5-正辛酰基水杨酸及水杨酸的其他衍生物)、类视黄醇(视黄酸及其衍生物；视黄醇及其酯)；蒽林(例如，二氧蒽酚)、类蒽酚(anthranoids)、过氧化物(例如，过氧化二苯)、米诺地尔、锂盐、抗代谢物、维生素D及其衍生物、毛发染料或着色剂(例如，对苯二胺及其衍生物；氨基苯酚)、带有香味的醇溶液(例如，香水；花露水；须后用水；除臭剂)、止汗剂(例如，一些铝盐)、脱毛剂或毛发持久活性剂(例如，硫醇)、脱色剂(例如，氢醌)及一些杀虫活性剂。如果局部用产品具有抗刺激保护作用，则可提高产品中正常刺激活性剂(例如，AHA(α-羟酸)或BHA(叔丁基对羟基苯甲醚))的量而不会产生不舒适的皮肤刺激或刺激副作用。与化妆品、皮肤病学活性剂或药学活性剂的常规使用浓度或用量相比，施用本发明所述组合物可通过提高所述活性剂的浓度或用量来改善化妆品、皮肤病学产品或药用品的功效。
在本发明的一个优选实施例中，改善毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的外观，并且尤其是亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的组合物含有有效量的至少一种下列活性提取物紫铆、补血草、乌蕨或它们的任意组合。有效量是指一种或多种活性提取物的含量占组合物总重量的大约0.001重量％至大约20重量％(wt％)。一种或多种活性提取物的含量优选占组合物总重量的大约0.05重量％至大约10重量％，更优选大约0.5重量％至大约5重量％。最优选一种或多种活性提取物的含量占组合物总重量的大约1重量％或小于大约1重量％。
如上所述，在本发明另一个优选的实施例中，亮泽毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的组合物含有有效量的至少一种活性提取物以及一种或多种下述其他或额外提取物印楝、洋甘草、海巴戟、番茄糖脂或它们的任意组合，以协同促进组合物的增白活性。
一种或多种额外提取物的含量占组合物总重量的大约0.05重量％至大约10重量％。优选地，一种或多种额外提取物的含量占组合物总重量的大约0.5重量％至大约5重量％。最优选一种或多种额外提取物的含量占组合物总重量的l重量％或小于大约1重量％。
当与一种或多种额外提取物合用时，活性提取物在本发明组合物中的含量占组合物总重量的大约0.001重量％至大约10重量％，并且一种或多种额外提取物的含量占组合物总重量的大约0.05重量％至大约10重量％。优选地，活性提取物的含量占组合物总重量的大约0.05重量％至大约10重量％，并且一种或多种额外提取物的含量占组合物总重量的大约0.5重量％至大约5重量％。最优选一种或多种活性提取物的含量占组合物总重量的大约1重量％或小于大约1重量％，并且一种或多种额外提取物的含量占组合物总重量的1重量％或小于大约1重量％。
本发明所述组合物可与载体或赋形剂共同使用。载体可进行改变，以在不改变由使用上述的一种或多种活性提取物所获得的有益的亮泽效果的同时适合于组合物的特殊用途。可用于本发明所述组合物的载体包括，但不限于，水；植物油；酯例如棕榈酸辛酯、豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯；醚例如二辛醚(dicapryl ether)或二甲基异山梨醇；醇例如乙醇和异丙醇；脂肪醇例如十六烷醇、十八烷醇和二十二烷醇；异链烷烃例如异辛烷、异十二烷和异十六烷；硅油例如二甲聚硅氧烷和聚硅氧烷；烃油例如矿物油、凡士林、异二十烷和聚异丁烯；多元醇例如丙二醇、甘油、丁二醇、戊二醇和己二醇；或它们的任意组合。
优选地，载体的含量占组合物总重量的大约50重量％至大约99.8重量％。更优选，载体的含量占组合物总重量的大约80重量％至大约99.5重量％。
本发明所述的组合物还可以包括一种或多种下述成分麻醉剂、抗过敏剂、抗真菌剂、抗菌剂、抗炎剂、抗氧化剂、杀菌剂、螯合剂、着色剂、脱色剂、润肤剂、乳化剂、脱落剂(exfollient)、成膜剂、香味剂、保湿剂、驱虫剂、润滑剂、补水剂、药剂、耐光剂、防腐剂、皮肤保护剂、皮肤渗透增强剂、遮光剂、稳定剂、表面活性剂、增稠剂、粘度调节剂、维生素、或它们的任意组合。优选地，这些成分的含量占组合物总重量的大约0.001重量％至大约10重量％。
本发明所述的组合物还可以包括皮肤增白剂。一些合适的皮肤增白剂的例子包括，但不限于，一种或多种下述物质抗坏血酸葡糖苷、维生素C、视黄醇和/或其衍生物、熊果苷、熊果提取物、皱叶酸模提取物(rumex crispus extract)、乳蛋白包括水解乳蛋白、N，N，S-三(羧甲基)半胱胺、齐墩果醇酸、紫苏油、胎盘提取物、虎耳草(saxifragia sarmentosa)、紫苏提取物、圆柏酸、TDPA、川芎(ligusticum chiangxiong hort.)、紫萁(asmunda japonica thunb)、繁缕(stellaria medica(L.)cyr.)、垂盆草(sedum sarmentosum bunge)、藁本(ligusticum lucidum Ait.)、冬青(ilexpurpurea hassk)、油甘子(emblica)、芹黄素、抗坏血酸基棕榈醇、carruba多酚、橙皮素、氢醌、inabata多酚、异甘草素、堪非醇-7-新橙皮糖、L-含羞草碱、毛地黄黄酮、油溶性甘草提取物P-T(40)、oxa acid、异硫氰酸苯酯、可可素(cococin)、水飞蓟素、T4CA、四氢姜黄素、unitrienol、熊果酸-齐墩果醇酸、UVA/URSI、或它们的任意组合。
本发明所述组合物可制为任何适合的产品形式。这些产品形式包括，但不限于，气雾喷雾剂、霜剂、分散体、乳剂、泡沫、凝胶、液体、洗剂、摩丝、软膏、敷料、香膏剂、粉剂、手按泵型喷雾剂、固体、溶液、条状物和小毛巾。
本发明的组合物用于特别是改善皮肤、指甲、嘴唇和/或毛发亮泽的化妆品。同样，可制造本发明所述的组合物以传递稳定量的活性成分或成分的混合物来达到预期的化妆效果。
以下是本发明的实施例。
实施例1黑素体摄取试验(乌蕨和补血草)以下述方式进行。铺满培养的B16黑色素细胞产生适量的黑素体。但是，为在该细胞系中诱导提高黑素体的生成，用含有10mM氯化铵(终浓度)的正常生长培养基处理半铺满(60％)培养的B16细胞大约36小时。然后将培养基吸出并以蒸馏水洗涤黑色素过度的细胞(2×2ml)以给细胞提供一个低渗压力。向每板加入等分量(2ml)的低渗裂解液(溶于水的0.02％NP-40)并于室温下温育大约5分钟。然后用光学显微镜检查细胞裂解液，将来自3个培养板的细胞物质合并入一个15ml的锥形管中并离心(200×g)5分钟以除去细胞碎片。将所得的含有黑素体的上清液转入洁净的15ml的锥形管中并离心(850×g)20分钟。将所得的含有分离的黑素体的沉淀重悬于1ml磷酸盐缓冲液(PBS)中并储存于4℃直至使用。
用黑素体对角质化细胞的处理以下述方式进行测定。正常的人表皮角质化细胞(NHEKs)(可由Clonetics，Inc.获得)以200,000细胞/孔的密度铺于24孔板的孔中。约24小时后，以1ml含有黑素体制剂(经过或未经过额外处理条件处理)的适当生长培养基(即DMEM/KGM-2)代替原来的生长培养基。以不同浓度的紫苏叶提取物(粉末形式或水溶液形式)处理细胞。然后将细胞送回恒温箱温育约1小时和1.5小时。在这些研究中，每个孔的角质化细胞都以一定量的从单个B16细胞培养板上分离的黑素体进行处理。
在一些试验中，将已处理的角质化细胞的24孔板在1000rpm离心15分钟以促进黑素体沉淀到角质化细胞的细胞膜表面。然后将培养板送回恒温箱温育1.25小时。
在黑素体摄取分析中，角质化细胞的每个孔内的细胞都以PBS进行冲洗(3×1ml)，用胰蛋白酶/EDTA将细胞从培养板上处理下来，并用PBS进行洗涤。为分析角质化细胞对黑素体的摄取，采用Bessou-Touya，S.等人(Chimeric human epidermal reconstructs to study the role ofmelanocytes and keratinocytes in pigmentation and photoprotection(以嵌合的人表皮重建体对黑色素细胞和角质化细胞在色素沉着和光保护中的作用进行研究)J.Invest.Dermatol.，1111103～1108，1998)的一种改良方法从细胞中提取内化的黑色素并通过测定在405nm处黑色素特异性的吸光度来进行分光光度的测量。
黑色素细胞合成黑色素并将其储存于黑素体。显示可见的皮肤颜色是由于在角质化细胞中存在黑色素/黑素体。黑素体被角质化细胞吸收，吸收速度、黑素体在角质化细胞中的滞留和处理是皮肤颜色的重要的决定因素。内化黑色素值反映了角质化细胞对黑色素/黑素体的吸收和滞留量。因此，较低的内化黑色素值，尤其是内化黑色素值低于黑色素对照，表明角质化细胞对黑色素的吸收已被抑制。
结果如下。在0.5体积％，乌蕨显示与阳性对照相比黑素体的吸收降低了44％。在0.5体积％，补血草显示与阳性对照相比黑素体的吸收降低了39％。
实施例2在B16试验(补血草)中，在单层细胞培养的B16鼠黑色素瘤细胞中检验活性成分。这些细胞组成性地产生黑色素，是检测黑色素合成抑制的模式系统。将细胞以5×103细胞/孔接入96孔板并贴壁培养24小时。然后以含有植物提取物的新鲜培养基代替原培养基。将每种活性成分加入96孔板上的6个B16细胞孔以进行统计学分析。将仅用培养基作为阴性对照的细胞，或待测物质处理7天。在540nM处读取培养板以检测黑色素的形成。540nM处吸光度的增加反映了孔中更高的黑色素含量。
在0.05％(重量/体积)，补血草显示与阳性对照相比色素沉着下降了61％。
实施例3在14C-多巴掺入实验中(紫铆)，通过当14C-多巴在B16F10黑色素瘤细胞中被转化成酸不溶的黑色素生物高聚物时测量所形成的放射性黑色素来测定黑色素生成活性。细胞以2×104细胞/孔的密度接入24孔板并贴壁培养48小时。然后以含有植物提取物和0.2μCi的14C-多巴的新鲜培养基代替原培养基。将细胞进一步温育24小时。温育后，弃去培养基并以PBS冲洗细胞，通过加入0.125ml 1N的NaOH并在37℃下温育30分钟进行裂解，然后以0.025ml 5N的HCl进行中和。将所得细胞裂解物转入液闪瓶并与闪烁混合剂混合，通过闪烁计数器对放射性进行测量。保存一部分细胞裂解物并用Lowry的方法测量蛋白质含量。将结果标准化为每次试验所测定的蛋白质的量。
在0.005％(重量/体积)，紫铆显示与阳性对照相比14C-多巴的转化下降了22％。
实施例4在下述体外研究中，评价本发明所述的多种天然植物提取物对TNF-α(肿瘤坏死因子-α)蛋白的抑制。
TNF-α抑制方案使用可由R & D Systems商购的酶联免疫试验(ELISA)试剂检测乌蕨、补血草、紫铆对TNF-α的抑制效力。
该试验使用定量的夹心酶免疫测定技术，其中将特异性针对TNF-α的单克隆抗体预先包被微量滴定板上。将以活性物质处理的细胞的培养上清液吸入单个孔中。上清液中的TNF-α通过所固定的抗体结合于板上。进行多次洗涤以除去未反应的抗体，然后在各孔中加入与酶偶联的特异性针对TNF-α的多克隆抗体。接着进行洗涤以除去未结合的抗体-酶试剂，并在孔中加入底物溶液。显示的颜色与起始步骤中TNF-α的结合量成比例。检测结果在表I中给出。
表I 体外试验的结果
图注+、++、+++、++++显著的抑制(抑制的程度以加号的数量进行量化表示)(0)没有变化这些体外研究表明含有乌蕨、补血草、紫铆的提取物的本发明所述组合物通过抑制TNF-α蛋白的产生给皮肤带来益处，藉此将减少由化妆品、药用品或皮肤病学产品引起的主观不适和/或刺激的症状，因此增强皮肤的美观。
实施例5在多种活组织检查研究中评价乌蕨和紫铆，在该活组织检查研究中将下述天然植物提取物与合适的化妆品载体组合并以2mg/cm2的剂量施用于受试者的掌侧前臂。然后将施用提取物制剂的前臂区域以半闭合的罩覆盖。这一方案重复3周，每周5天。处理结束后，以利多卡因麻痹处理部位并由处理部位和一个未处理的对照部位钻取2mm深的活组织检查样品。将活组织检查样品在福尔马林中固定、石蜡中包埋、切片，并在相关的端点染色。
对于乌蕨，9个受试者中的6个显示其角质化细胞的增殖提高(通过KI67的抗体呈现)，9个受试者中的5个显示活表皮厚度的增加。
对于所提供的紫铆，8个受试者中的5个显示其角质化细胞的增殖提高(通过KI67的抗体呈现)，8个受试者中的5个显示活表皮厚度的增加。
前述说明书应理解为只是对本发明的例证。本领域技术人员可在不背离本发明的条件下作出各种替换和修改。因此，本发明旨在包括所有这些落入所附权利要求书的保护范围中的替换、修改和变化。
权利要求
1.一种增强毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的美观的组合物，该组合物含有有效量的选自以下的至少一种活性提取物紫铆(Butea frondosa)、补血草(Naringi crenulata)、乌蕨(Stenoloma chusana)或它们的任意组合。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种活性提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.001重量％至大约20重量％。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种活性提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.05重量％至大约10重量％。
4.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种活性提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.5重量％至大约5重量％。
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种活性提取物的含量占所述组合物总重量的大约1重量％或小于大约1重量％。
6.如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是适合施用于毛发、皮肤、嘴唇和/或指甲的局部用组合物。
7.如权利要求6所述的组合物，该组合物还含有化妆品用载体。
8.如权利要求1所述的组合物，其中当该组合物被施用于皮肤或嘴唇时，减轻和/或防止皮肤或嘴唇的刺激。
9.如权利要求1所述的组合物，其中该组合物是口服组合物。
10.如权利要求1所述的组合物，该组合物还含有有效量的选自以下的至少一种额外提取物印楝(Azadirachta indica)、洋甘草(Glycyrrhizaglabra linn.)、海巴戟(Morinda citrifolia)、番茄糖脂或它们的任意组合。
11.如权利要求10所述的组合物，其中所述至少一种额外提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.05重量％至大约10重量％。
12.如权利要求11所述的组合物，其中所述至少一种额外提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.5重量％至大约5重量％。
13.如权利要求10所述的组合物，其中所述至少一种活性提取物被局部施用于皮肤或嘴唇以达到减轻或预防刺激或炎症的目的。
14.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种活性提取物被局部施用于皮肤或嘴唇以达到减轻或预防刺激或炎症的目的。
15.一种使毛发、皮肤、嘴唇、和/或指甲亮泽的方法，该方法包括将有效量的权利要求1所述的组合物局部施用于皮肤、毛发、嘴唇、和/或指甲。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述至少一种活性提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.001重量％至大约20重量％。
17.如权利要求15所述的方法，其中所述至少一种活性提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.05重量％至大约10重量％。
18.权利要求15所述的方法，其中所述至少一种活性提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.5重量％至大约5重量％。
19.一种使毛发、皮肤、嘴唇、和/或指甲亮泽的方法，该方法包括口服有效量的权利要求1所述的组合物。
20.一种使毛发、皮肤、嘴唇、和/或指甲亮泽的方法，该方法包括将有效量的权利要求10所述的组合物局部施用于皮肤、毛发和/或指甲。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述至少一种额外提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.05重量％至大约10重量％。
22.如权利要求20所述的方法，其中所述至少一种额外提取物的含量占所述组合物总重量的大约0.5重量％至大约5重量％。
23.一种使毛发、皮肤、嘴唇、和/或指甲亮泽的方法，该方法包括口服有效量的权利要求10所述的组合物。
24.一种增强皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲的美观的方法，该方法包括将有效量的选自紫铆、补血草、乌蕨或它们的任意组合的至少一种活性提取物局部施用于皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述有效量是为皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲有效提供抗衰老益处的量。
26.如权利要求24所述的方法，其中所述有效量为组合物总重量的大约0.001重量％至大约20重量％，并且对处理下列一种或多种情况是有效的a)减少或防止纹路和皱纹；b)增加皮肤厚度；和c)减少皮肤变色。
27.如权利要求24所述的方法，其中所述有效量为组合物总重量的大约0.001重量％至大约20重量％，并且对处理下列一种或多种情况是有效的a)减少或防止胶原的丧失；b)改善皮肤的结实度/饱满度；c)改善皮肤肌理；d)减少或防止纹路和皱纹；e)改善皮肤色泽；f)增加皮肤厚度；g)减小毛孔大小；h)减少皮肤变色；i)减少粉刺；j)减少牛皮癣；k)降低皮肤的敏感性；和l)减少疣。
全文摘要
本发明提供了一种组合物，其含有至少一种下述活性提取物紫铆(Butea frondosa)、补血草(Naringi crenulata)、乌蕨(Stenoloma chusana)、或它们的任意组合。本发明还提供了一种组合物，其含有至少一种下述额外提取物以及一种或多种活性提取物的组合，所述额外提取物为印楝(Azadirachta indica)、洋甘草(Glycyrrhiza glabra linn.)、海巴戟(Morinda citrifolia)、番茄糖脂或它们的任意组合。本发明所述的组合物和方法特别通过亮泽皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲来有效增强皮肤、嘴唇、毛发和/或指甲的美观。
文档编号A61K36/11GK1694716SQ200380100751
公开日2005年11月9日 申请日期2003年12月16日 优先权日2002年12月17日
发明者哈里斯·马哈林格姆, 布莱恩·琼斯, 妮科尔·麦克凯恩 申请人:雅芳产品公司