专利名称：一种何首乌提取物、含有该提取物的中药组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物，具体而言是一种何首乌提取物、含有该提取物的中药组合物以及它在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
背景技术：
目前，在全球范围内，中草药都有一定的市场，随着人们对健康要求认识水平的增高以及人口的老龄化，亚健康状态化，人们更加渴望回归自然，利用纯天然程度高的药物治疗、预防一些化学合成药物所不能解决的问题，因此天然植物药的应用超出它原来民族传统文化的背景。从天然药物中寻求副作用小、且物美价廉的药物成为世界各国医药企业所追逐的目标。
高血脂是形成动脉粥样硬化(AS)的重要原因。高血脂能引起凝血和纤溶功能的改变，促发AS，高胆固醉能整合于细膜脂中，使膜通透性减低，易于LPL渗入到内膜下，造成内膜损害，奠定AS的基础。目前，调节血脂的药物种类很多，就其化学结构与主要调脂功能分为以下几类胆酸整合树脂类；烟酸及其衍生物；贝特类；应用最为广泛的是他汀类药物。但是长期口服他汀类药物存在着一过性转氨酶升高、横纹肌溶解症等多种副反应，因此，开发中药降血脂药物成为研究方向。
现代药理学研究表明，何首乌Polygonum multiflorum Thunb.具有良好的调节血脂作用。宋士军等[参见河北中医药学报，2003，18(4)27-28]通过对实验性高脂血症的研究表明何首乌醇提液明显降低高脂大鼠血甘油三酯和胆固醇，对腹腔注射蛋黄液小鼠的血甘油酯和血胆固醇均无明显降低作用。李韬等[参见右江民族医学院学报，1997，19(3)363-365]用何首乌提取液为主要成分的元首口服液喂养家兔1个月，可明显提高家兔血清中的磷酯酰胆碱、胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性，提高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)的含量，促进HDL转运胆固醇。贾久珍等[参见吉林医学信息，1998，146]则将何首乌明确列入抗动脉粥样硬化的中药中，认为其醇提取物能抑制实验性大鼠高脂血症，对鹌鹑实验性动脉粥样硬化有一定的预防和治疗作用。
何首乌中主要化学成分为二苯乙烯苷类、聚合原花青素类和蒽醌成分，其中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷是其最主要的活性成分。现有技术对2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的制备报道比较少，药理活性实验公布的更少。中国专利(CN 1539844A 2003.10.24)公开了一种制备2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其将何首乌水提醇沉，然后加氯仿萃取，水层用正丁醇萃取或用大孔吸附树脂分离后再以氯仿-甲醇为洗脱剂，反复常压硅胶柱层析，得2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷。此工艺步骤繁琐，不易产业化，且所用氯仿毒性大，对环境污染严重。
发明内容
本发明的目的在于提供一种成本低廉、工艺简单，适宜工业化生产的以2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为主要活性成分的何首乌提取物。
本发明的另一目的在于提供以上述何首乌提取物为主要活性成分的降血脂的中药组合物。
本发明可以通过以下方案予以实施本发明的何首乌提取物，经常规提取、浓缩方法提取、浓缩，其特征在于，提取液分离步骤中包括过聚酰胺柱。
所述的常规提取方法包括但不限于水浸提、水煎煮、醇浸提、醇回流提取、醇渗漉。
所述的常规浓缩方法包括但不限于常压浓缩、减压浓缩、反渗透浓缩。
所述的过聚酰胺柱步骤具体为首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液。
由此，本发明的何首乌提取物的制备方法为提取液上聚酰胺柱，以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液，洗脱液减压浓缩，干燥，得何首乌提取物。
优选的，当流动相均采用含水低级醇时，作为第一次流动相的低级醇的浓度低于作为第二次流动相的低级醇的浓度。
优选的，作为第二次流动相的低级醇为乙醇；更优选的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次流动相的低级醇为30～99％乙醇。
此方法制备的何首乌提取物中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量为不低于50％。
进一步地，所述的提取液分离步骤包括过两次聚酰胺柱，具体工艺为
提取液上聚酰胺柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得有醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩；浓缩液再上聚酰胺柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液。
由此，本发明的何首乌提取物的制备方法为提取液上聚酰胺柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液，将洗脱液减压浓缩；浓缩液再上聚酰胺柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液；洗脱液减压浓缩，干燥，得何首乌提取物。
优选的，对于上一次聚酰胺柱而言，当流动相均采用含水低级醇时，作为第一次流动相的低级醇的浓度低于作为第二次流动相的低级醇的浓度。
优选的，对于上一次聚酰胺柱而言，作为第二次流动相的低级醇为乙醇；更优选的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次流动相的低级醇为30～99％乙醇。
进一步地，提取液分离步骤中还包括过大孔吸附树脂柱，具体的工艺为提取液上大孔吸附树脂柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗大孔吸附树脂柱，再以含水或无水低级醇作为流动相，得醇洗脱液，洗脱液减压浓缩；浓缩液再上聚酰胺柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液。
或者提取液上聚酰胺柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液，洗脱液减压浓缩；浓缩液再上大孔吸附树脂柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗大孔吸附树脂柱，再以含水或无水低级醇作为流动相，得醇洗脱液。
由此，本发明的何首乌提取物的制备方法为提取液上大孔吸附树脂柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗大孔吸附树脂柱，再以含水或无水低级醇作为流动相，得醇洗脱液，洗脱液减压浓缩；浓缩液再上聚酰胺柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液，洗脱液减压浓缩，干燥，得何首乌提取物。
或者提取液上聚酰胺柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液，洗脱液减压浓缩；浓缩液再上大孔吸附树脂柱，首先以水或含水低级醇为流动相冲洗大孔吸附树脂柱，再以含水或无水低级醇作为流动相，得醇洗脱液；洗脱液减压浓缩，干燥，得何首乌提取物。
优选的，大孔吸附树脂柱为苯乙烯型。
优选的，对于上大孔吸附树脂柱而言，当流动相均采用含水低级醇时，作为第一次流动相的低级醇的浓度低于作为第二次流动相的低级醇的浓度。
优选的，对于上大孔吸附树脂柱而言，作为第二次流动相的低级醇为乙醇；更优选的，低级醇为乙醇；最佳的，低级醇为乙醇且作为第二次流动相的低级醇为20～99％乙醇。
优选的，对于上聚酰胺柱而言，当流动相均采用含水低级醇时，作为第一次流动相的低级醇的浓度低于作为第二次流动相的低级醇的浓度。
优选的，对于上聚酰胺柱而言，作为第二次流动相的低级醇为乙醇；更优选的，低级醇为乙醇；最佳的，所述的低级醇为乙醇且作为第二次流动相的低级醇为30～99％乙醇。
按照以上方法制备的何首乌提取物中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量为不低于60％。
以本发明方法获得的何首乌提取物可以制成药剂学上任何一种制剂，也可配合其他药物或组分一起制成制剂使用。这些剂型可以是注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩片、微丸等。
另外，本发明药物可在制备预防和治疗动脉粥样硬化的药物中应用。
本发明与现有技术相比有如下优势1.易于产业化。本发明克服了现有技术中需要用氯仿或正丁醇萃取，且需反复硅胶柱层析的工艺步骤和条件，工艺步骤简单、易操作，非常适合工业化生产。
2.成本低。本发明以水、乙醇等溶剂作为流动相，价格低廉且环保。
下面通过动物试验进一步说明本发明药物的有益效果。
不同工艺何首乌二苯乙烯总苷片抗高脂性动脉粥样硬化的药效学比较研究材料与方法动物新西兰种兔，体重1.8-2.2kg，全部雄性，北京维通利华动物公司提供。
鹌鹑，体重150g，全部雄性，北京维通利华动物公司提供。
动物饲料家兔高脂饲料，在家兔普通饲料的基础上添加胆固醇0.5％(分析纯，上海新兴化学试剂公司)、蛋黄粉2.5％、猪油4％，现配加工制成。
鹌鹑高脂饲料，在鹌鹑普通饲料的基础上，添加胆固醇1％(分析纯，上海新兴化学试剂公司)、花生油6％、猪油14％，现配加工制成。
药品和仪器四种不同工艺的何首乌二苯乙烯总苷片均由天津天士力中药所提供。
实验中的工艺1采用实施例1方法提取分离。
实验中的工艺2采用实施例2方法提取分离。
实验中的工艺3采用实施例3方法提取分离。
实验中的工艺4采用实施例4方法提取分离。
阳性对照药辛伐他汀，上海博之达化学有限公司提供，批号021003。
TC、TG酶标法试剂盒为上海明典试剂公司出品；HDL-C、LDL-C酶标法试剂盒为日本第一化学株式会社出品；Lp(a)免疫浓度络点法测试试剂盒为德国Diasys公司出品。
测试仪器奥林巴斯AU1000型全自动生化分析仪。
实验方法1.兔高脂性动脉粥样硬化模型的预防作用将兔单笼、给予普通饲料饲养10天后，耳部血管取血2ml，分离出血清。分别测定各项血脂指标正常值。根据血脂水平，进行分层随机分7组，每组10只，即高脂对照组，工艺1组，工艺2组，工艺3组，工艺4组，阳性药辛伐他汀组和空白对照组。高脂对照组采用高脂饲料100g/kg定量喂食；四个工艺组及辛伐他汀组在高脂定量喂食的基础上，按照给药剂量每天一次，于每日上午9:30灌胃给药；空白对照组给予正常饲料。给药4、8、12周后，分别禁食12h后测试血清TC、TG、HDL-C、LDL-C等指标；给药8周后，还测定Lp(a)指标。给药12周后，将各组兔颈动脉放血处死，进行病理检查，观察指标为经油红O染色后主动脉斑块面积占主动脉总面积的百分比。
2.鹌鹑高脂性动脉粥样硬化模型的治疗作用将鹌鹑每组8只放于铁丝笼内、给予普通饲料饲养10天后，采用高脂饲料喂食2月；颈静脉取血2ml，分离出血清。分别测定各项血脂指标值。根据血脂水平，进行分层随机分6组，每组8只，即高脂对照组，工艺1组，工艺2组，工艺3组，工艺4组和阳性药辛伐他汀组。各组均给予正常饲料，各工艺组及辛伐他汀组在正常饲料喂食的基础上，按照给药剂量每天一次，于每日上午9:30饲料中添加给药。给药2、4、6、8周后，分别禁食12h后测试血清TC、TG、HDL-C、LDL-C等指标。给药8周后将各组鹌鹑颈动脉放血处死，分离其主动脉，进行病理检查。
实验数据以x±SD表示，经方差齐性检验后，采用SPSS统计软件中ANOVA方差分析检验差异的显著性。
结果一、四种工艺对兔高脂性动脉粥样硬化模型的预防作用比较结果1.对兔脂质代谢紊乱的预防作用1.1对血清总胆固醇(TC)的影响经高脂喂食后，高脂对照组血清TC显著升高，由1.77±0.87mmol/L升至30.93±1.25mmol/L。四种工艺二苯乙烯总苷对TC的影响与高脂对照组相比，均可显著降低TC的升高，阳性对照药辛伐他汀在给药4、8、12周均显著降低TC的含量。而四种工艺相互之间无显著性差异。(表1)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药能显著降低高脂饮食引起的兔血清TC的升高程度，且四种工艺的降低作用无差别。
表1四种不同工艺二苯乙烯总苷对兔血清总胆固醇(TC)的影响(mmol/L，x±SD)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较1.2对血清甘油三酯(TG)的影响经高脂喂食后，高脂对照组血清TG显著升高。四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀在给药4、8、12周均可显著降低TG的升高程度。而四种工艺的作用相互之间无显著性差异。(表2)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药能显著降低高脂饮食引起的兔血清TG的升高程度，且四种工艺的降低作用无差别。
表2四种不同工艺二苯乙烯总苷对兔血清甘油三酯(TG)的影响(mmol/L，x±SD)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较1.3对血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的影响经高脂喂食后，试验各组血清HDL-C有所升高(4、8周后显著，12周后不显著)。与高脂组相比四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀在给药4、8、12周对HDL-C含量均无显著影响。(表3)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药对血清HDL-C的含量没有影响。
表3四种工艺二苯乙烯总苷对兔血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的影响(mmol/L)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较1.4对血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响经高脂喂食后，高脂对照组血清LDL-C显著升高。四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀在给药4、8、12周均可显著降低LDL-C的升高程度。而四种工艺的作用相互之间无显著性差异。(表4)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药能显著降低高脂饮食引起的兔血清LDL-C的升高程度，且四种工艺的降低作用无差别。
表4四种工艺二苯乙烯总苷对兔血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响(mmol/L)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较1.5对血清极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)的影响经高脂喂食后，高脂对照组血清VLDL-C显著升高。四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀在给药4、8、12周均可显著降低VLDL-C的升高程度。(表5)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药能显著降低高脂饮食引起的兔血清VLDL-C的升高程度，且四种工艺的降低作用无显著性差别。
1.6对血清TC/HDL-C比值的影响经高脂喂食后，高脂对照组血清TC/HDL-C比值显著升高。四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀在给药4、8、12周均可显著降低TC/HDL-C比值的升高程度。(表6)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药能显著降低高脂饮食引起的血清TC/HDL-C的升高程度，且四种工艺的降低作用无显著性差别。
表5四种工艺二苯乙烯总苷对兔血清极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)的影响(mmol/L)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较表6四种不同工艺二苯乙烯总苷对兔血清TC/HDL-C比值的影响(mmol/L，x±SD)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较1.7对血清载脂蛋白(a)(Lp(a))的影响经高脂喂食8周后，与高脂对照组相比，四种工艺给药组在给药8周后可显著降低Lp(a)，且升高的程度无明显差异。阳性对照药辛伐他汀则对Lp(a)无显著影响。(表7)表7四种不同工艺二苯乙烯总苷对兔血清Lp(a)的影响(mmol/L，x±SD)
△p＜0.05，与高脂组比较2.对兔主动脉病变斑块程度的影响根据《现代药理实验方法》，采用剪纸法计算斑块面积，经油红O染色后，将主动脉斑块图形印在纸板上，再将斑块部分剪下，将斑块和动脉壁部分的图形分别称重，以斑块重量所占动脉壁总重量的比值作为斑块所占动脉壁的面积比。结果显示，四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀经灌胃给药后，与高脂对照组相比，斑块面积百分率明显降低。(表8)结果表明四种工艺的二苯乙烯总苷均能显著降低兔主动脉粥样硬化斑块，且作用基本一致没有显著性差异。
表8四种不同工艺二苯乙烯总苷对兔主动脉斑块面积百分率的影响(％，x±SD)
△p＜0.05，与高脂组比较二、四种工艺对鹌鹑高脂性动脉粥样硬化模型的治疗作用比较结果1.对鹌鹑脂质代谢紊乱的治疗作用1.1对血清总胆固醇(TC)的影响给予普通饲料后，各组血清TC均显著降低。与高脂对照组血清TC相比，四种工艺的二苯乙烯总苷和阳性对照药辛伐他汀在给药2周可明显降低TC；4、6、8周后对血清TC影响不显著。(表9)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药2周能显著降低鹌鹑血清TC的含量，且四种工艺的降低作用无差别。
1.2对血清甘油三酯(TG)的影响给予正常饲料后，各组血清TG在8周后显著降低。四种不同工艺的二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀给药2、4、6、8周与高脂组相比较，对血清TG均无显著影响。(表10)1.3对血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的影响给予普通饲料后，试验各组血清HDL-C在8周后显著降低。与高脂组相比四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀在给药2、4、6、8周对HDL-C含量均无显著影响。(表11)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药对血清HDL-C的含量没有影响。
1.4对血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响给予普通饲料后，各组血清LDL-C均显著降低。与高脂对照组血清LDL-C相比，四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀2周后可显著降低LDL-C的升高程度。给药、6、8周对血清LDL-C的影响不明显。(表12)1.5对血清极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)的影响给予普通饲料后，各组血清VLDL-C均显著降低。与高脂对照组血清VLDL-C相比，四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀在2周后均可显著降低VLDL-C，给药4、6、8周对血清VLDL-C影响不显著。(表13)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药2周能显著降低鹌鹑血清VLDL-C的含量，且四种工艺的降低作用无显著性差别。
1.6对血清TC/HDL-C比值的影响给予普通饲料后，各组血清TC/HDL-C比值显著降低。与高脂对照组相比，四种工艺二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀给药2周均可显著降低TC/HDL-C比值，给药4、6、8周影响不显著。(表14)结果表明，四种工艺二苯乙烯总苷灌胃给药2周能显著降低鹌鹑血清TC/HDL-C比值，且四种工艺的降低作用无显著性差别。
2.对鹌鹑主动脉病变斑块程度的影响给药8周后，将动物处死，进行病理检查。观察指标为经油红O染色主动脉斑块进行分级打分，分级标准参照《现代药理实验方法》0分-无斑块；0.5分-轻度红染，无凸出斑块；1分-有凸出红染斑块，面积＜3mm2；2分-斑块面积＞3mm2；3分-斑块大小不等，融合成片；4分-动脉内膜几乎全为融合斑块所覆盖。
结果显示，四种不同工艺的二苯乙烯总苷及阳性对照药辛伐他汀给药8周后，与高脂对照组相比，斑块病变程度明显降低。(表15)且四种工艺的降低程度没有明显差异。
表15四种不同工艺二苯乙烯总苷对鹌鹑主动脉斑块面积百分率的影响(％，x±SD)
△p＜0.05，与高脂组比较表9四种不同工艺二苯乙烯总苷对鹌鹑血清总胆固醇(TC)的影响(mmol/L，x±SD)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较表10四种不同工艺二苯乙烯总苷对鹌鹑血清甘油三酯(TG)的影响(mmol/L，x±SD)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较表11四种工艺二苯乙烯总苷对鹌鹑血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的影响(mmol/L)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较表12四种工艺二苯乙烯总苷对鹌鹑血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响(mmol/L)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较表13四种工艺二苯乙烯总苷对鹌鹑血清极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)的影响(mmol/L)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较表14四种工艺二苯乙烯总苷对鹌鹑血清TC/HDL-C比值的影响(mmol/L，x±SD)
注*p＜0.05，与给药前比较；△p＜0.05，与高脂组比较以上的药理试验结果表明，工艺一、工艺二、工艺三、工艺四的二苯乙烯总苷片都具有抗高脂性动脉粥样硬化的药理作用，对脂质代谢紊乱和高脂性动脉粥样硬化具有良好的预防和治疗作用。
对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进，例如所选用的溶液可以是丙酮、乙酸乙酯或者是其他有机溶剂，但只要使用本发明所述的提取分离方法，均在本发明保护范围之内。
具体实施例方式
实施例1(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过14目筛，用8倍药材量的80％乙醇渗漉，渗漉液在60℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用10倍柱体积的水作为流动相冲洗聚酰胺柱；然后改换5倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液于60℃减压浓缩，干燥，得何首乌提取物243g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为60％。
实施例2(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过14目筛，用10倍药材量的80％醇渗漉，渗漉液在60℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过AB-8树脂柱，首先用5倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的30％醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在60℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用10倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换5倍柱体积的95％醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在60℃下减压浓缩，干燥，得何首乌提取物218g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为70.3％。
实施例3(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过14目筛，用8倍药材量的80％醇渗漉，渗漉液在60℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺
将上清液过聚酰胺柱，首先用5倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换5倍柱体积的95％醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液60℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过AB-8树脂柱，用5倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的30％醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在60℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物215g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为69.4％。
实施例4(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，打碎成粗颗粒，6倍量50％乙醇70℃回流提取三次，每次1小时，减压回收乙醇，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用5倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的70％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在60℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用5倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换5倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在6℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物228g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为75.3％。
实施例5(1)提取工艺称取何首乌药材15kg，粉碎后过筛，用6倍量水煎煮三次，每次30min，提取液过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用15倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的99％乙醇作为流动相，得洗脱液，将洗脱液90℃减压浓缩，干燥，得何首乌提取物355g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为60.8％。
实施例6(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过筛，用12倍药材量的60％醇渗漉，渗漉液在70℃下减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用4倍柱体积的30％乙醇作为流动相，得醇洗脱液；然后改换4倍柱体积的90％甲醇作为流动相，得洗脱液，将洗脱液于50℃减压浓缩，干燥，得何首乌提取物250g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为62.0％。
实施例7(1)提取工艺称取何首乌药材20kg，粉碎后过筛，用6倍药材量的75％乙醇浸提12h，提取液过滤，得上清液；
(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用8倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换6倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，70℃减压浓缩，干燥，得何首乌提取物490g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为65.0％。
实施例8(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过筛，用10倍药材量的85％乙醇渗漉，渗漉液在70℃下减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用4倍柱体积的35％乙醇作为流动相，得醇洗脱液；然后改换4倍柱体积的无水乙醇作为流动相，得醇洗脱液，50℃减压浓缩，干燥，得何首乌提取物256g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为62.4％。
实施例9(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，打碎成粗颗粒，8倍量60％乙醇70℃回流提取三次，每次1小时，减压回收乙醇，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过AB-8树脂柱，首先用10倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换15倍柱体积的40％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，90℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用15倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的30％甲醇作为流动相，得洗脱液，洗脱液在90℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物223g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为71.2％。
实施例10(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过筛，用4倍药材量的60％乙醇渗漉，渗漉液在30℃下减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过D101树脂柱，首先用3倍柱体积的20％乙醇作为流动相，得水洗脱液；然后改换5倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，30℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用5倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换5倍柱体积的99％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在30℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物228g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为70.2％。
实施例11(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过筛，用6倍药材量的75％乙醇渗漉，渗漉液在70℃下减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过D101树脂柱，首先用4倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换8倍柱体积的60％乙醇作为流动相，得洗脱液，50℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用8倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换4倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得洗脱液，洗脱液在50℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物223g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为71.4％。
实施例12(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过筛，用6倍量水煎煮三次，每次30min提取液过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过AB-8树脂柱，首先用6倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换4倍柱体积的20％乙醇作为流动相，得洗脱液，再以4倍柱体积的80％乙醇作为流动相，得洗脱液70℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用8倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换4倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在50℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物216g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为71.2％。
实施例13(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，打碎成粗颗粒，10倍量50％乙醇70℃回流提取三次，每次1小时，减压回收乙醇，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用10倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的75％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，90℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过AB-8树脂柱，用10倍柱体积的20％乙醇作为流动相，得水洗脱液；然后改换15倍柱体积的60％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在90℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物228g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为71.3％。
实施例14(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过筛，用6倍药材量的75％乙醇渗漉，渗漉液在50℃下减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用4倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换6倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，70℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过D101树脂柱，用6倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换12倍柱体积的99％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在70℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物71.4％。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为71.5％。
实施例15(1)提取工艺称取何首乌药材，粉碎后过筛，用12倍药材量的60％乙醇渗漉，渗漉液在90℃下减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用10倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的40％甲醇作为流动相，得洗脱液，30℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用10倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的90％甲醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在90℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物235g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为76.2％。
实施例16(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，打碎成粗颗粒，10倍量60％乙醇80℃回流提取三次，每次1小时，减压回收乙醇，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用2倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的50％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，70℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用10倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换10倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在90℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物234g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为75.1％。
实施例17(1)提取工艺称取何首乌药材10kg，粉碎后过筛，用8倍药材量的85％乙醇渗漉，渗漉液在70℃下减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用6倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换6倍柱体积的95％甲醇作为流动相，得醇洗脱液，70℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用3倍柱体积的30％乙醇作为流动相，得醇洗脱液；然后改换6倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在70℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物237g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为76.1％。
实施例18(1)提取工艺称取何首乌药材，粉碎后过筛，用6倍药材量的75％乙醇渗漉，渗漉液在50℃下减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)，离心、过滤，得上清液；(2)分离工艺将上清液过聚酰胺柱，首先用4倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换15倍柱体积的40％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，70℃减压浓缩至1∶1(1ml相当于药材1g)；浓缩液过聚酰胺柱，用6倍柱体积的水作为流动相，得水洗脱液；然后改换6倍柱体积的95％乙醇作为流动相，得醇洗脱液，醇洗脱液在50℃下浓缩，干燥，得何首乌提取物245g。经HPLC检测，该提取物中二苯乙烯苷含量为76.3％。
实施例19何首乌提取物胶囊剂处方何首乌提取物210g微晶纤维素 250g滑石粉 1.4％3％聚维酮乙醇溶液 适量共制成 1000粒取何首乌与微晶纤维素混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，60℃干燥30-45分钟，整粒，加入滑石粉，混匀，充于1号胶囊中，即得。
实施例20何首乌提取物粉针剂处方何首乌提取物100g甘露醇 30g依地酸钙钠 5g蒸馏水 1000ml将何首乌提取物溶于适量水中，加入甘露醇依地酸钙钠，搅拌至完全溶解，补加水至1000ml，分装500支，冷冻干燥，即得。
权利要求
1.一种何首乌提取物，经常规提取、浓缩方法提取、浓缩，其特征在于，提取液分离步骤中包括过聚酰胺柱，所述的过聚酰胺柱的步骤为首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱；再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液。
2.权利要求1所述的何首乌提取物，其特征在于，分离步骤还包括在提取液过聚酰胺柱之前过大孔吸附树脂柱。
3.权利要求1所述的何首乌提取物，其特征在于，分离步骤还包括提取液过聚酰胺柱之后再过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱。
4.权利要求2或3所述的何首乌提取物，其特征在于，过大孔吸附树脂的步骤为首先以水或含水低级醇为流动相冲洗大孔吸附树脂柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，得醇洗脱液。
5.权利要求1所述的何首乌提取物，其特征在于，当流动相均采用含水低级醇时，作为第一次流动相的低级醇的浓度低于作为第二次流动相的低级醇的浓度。
6.权利要求1所述的何首乌提取物，其特征在于，作为第二次流动相的低级醇为乙醇。
7.权利要求6所述的何首乌提取物，其特征在于，所述的乙醇浓度为30～99％。
8.权利要求4所述的何首乌提取物，其特征在于，所述的大孔吸附树脂为苯乙烯型。
9.权利要求4所述的何首乌提取物，其特征在于，当流动相均采用含水低级醇时，作为第一次流动相的低级醇的浓度低于作为第二次流动相的低级醇的浓度。
10.权利要求4所述的何首乌提取物，其特征在于，作为第二次流动相的低级醇为乙醇。
11.权利要求10所述的何首乌提取物，其特征在于，所述的乙醇浓度为20～99％。
12.以权利要求1、2或3所述的何首乌提取物为活性成分制成的任一药学上可接受剂型的中药组合物。
13.权利要求1、2或3所述的何首乌提取物在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种何首乌提取物，经常规提取方法提取后，提取液首先以水或含水低级醇为流动相冲洗聚酰胺柱，再以无水或含水低级醇作为流动相，洗脱液减压浓缩，干燥，即得。本发明的何首乌提取物中2，3，5，4’－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷含量不低于50％。本发明还公开了以该提取物为活性成分的中药组合物和该提取物在制备预防和治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
文档编号A61P9/10GK1957991SQ20051001589
公开日2007年5月9日 申请日期2005年11月4日 优先权日2005年11月4日
发明者魏峰, 岳洪水, 黄芝娟, 陈庆闯, 罗崇念, 胡晨旭 申请人:天津天士力制药股份有限公司