参与调控精子发生的人睾丸特异表达蛋白spag8的制作方法

专利名称：参与调控精子发生的人睾丸特异表达蛋白spag8的制作方法
技术领域：
本发明为一个在人睾丸组织中特异高效表达的并与物质在生精细胞中的分布和运输有关的SPAG8蛋白，涉及蛋白质的新功能的研究与临床应用领域。
背景技术：
本实验室缪时英等人于1995年通过采用可以引起精子凝集的不孕妇女患者血清作为探针筛选人睾丸λgt11表达型cDNA文库，获得一个新cDNA序列的片段。通过5′，3′-RACE的方法获得了该基因的全长，命名为HSD-1基因，(2003年被人类基因命名数据库命名为SPAG8基因)，所获得的GenBank接收号为U12978。SPAG8基因全长2482个碱基，由7个外显子和6个内含子组成，在mRNA水平上存在多种剪接方式，从而形成多个转录本(1，2，3)。其中全长的SPAG8基因编码一个由523个氨基酸组成的蛋白质。原位杂交的结果显示SPAG8基因定位在人类第九号染色体的短臂1区2带至1区3带，多组织Northern blot的结果显示SPAG8基因在睾丸组织中特异性高表达。对SPAG8蛋白进行亲疏水性分析的结果显示该蛋白质羧端具有一段亲水性较强的区域。以这一肽段进行动物抗生育功能实验发现其具有一定的抗生育功能。
发明目的对SPAG8基因所编码蛋白质的性质和功能研究，不仅对精子发生过程中的重要蛋白质的功能和调控机制具有重要意义，而且为男性生殖领域因精子发育不正常而引起的不孕不育以及与细胞分裂相关的男性睾丸组织肿瘤方面的相关疾病的基因诊断，治疗以及抗生育研究等方面具有实际的指导意义。
内容与要求应用RT-PCR、细胞转染技术、细胞免疫荧光以及免疫电镜和激光共聚焦显微技术等，观察了SPAG8蛋白在CHO细胞以及生精细胞中的表达阶段特性以及位置分布的特点。采用分子克隆、蛋白质表达与纯化技术、抗血清制备、Western blot检测、细胞培养技术、克隆鉴定了编码ACT的全长cDNA序列，表达并纯化了ACT蛋白，并用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备相应的抗血清。进而通过pull down方法和免疫共沉淀方法验证了SPAG8蛋白与ACT蛋白在体外和体内的相互作用。利用细胞培养、流式细胞分析、MTT法等手段初步确定了SPAG8蛋白的生物学功能。
该基因/蛋白质达到的技术指标为1.SPAG8基因在小鼠睾丸组织中阶段特异性表达，即从精母细胞期开始表达直至成熟精子期(图1)。
2.SPAG8蛋白在生精细胞和CHO细胞中的空间分布具有动态变化，其中从细胞核向细胞质的运输过程受到CRM1的介导，并可以被LMB所抑制(图2，3，4，5，6)。
3.ACT与GST组成的融合蛋白在大肠杆菌中获得可溶性表达，经亲和层析纯化后免疫新西兰大白兔，制备了高滴度的抗GST-ACT抗体。
4.SPAG8蛋白与ACT蛋白在体外和体内都具有相互作用(图7，8)。
5.SPAG8蛋白和ACT蛋白形成的复合物在细胞中的分布受到微管的调节(图9)。
6.SPAG8蛋白的过量表达使得小鼠精母细胞的生长速度减慢(图10)。


图1.RT-PCR方法检测SPAG8基因的表达阶段特异性左图为实验组，利用特异引物从各期生精细胞的cDNA模板中扩增SPAG8基因的特异片段，其中lane1是精原细胞，lane2是精母细胞，lane3是圆形精子细胞，lane4是变形期精子细胞右图为对照组，利用特异引物从各期生精细胞的cDNA模板中扩增β-actin基因特异片段图2.SPAG8蛋白在CHO细胞核中的激光共聚焦检测图绿色荧光显示SPAG8蛋白在细胞中的分布；红色荧光显示细胞核的位置，黄色荧光是红绿荧光的叠加结果图3.SPAG8蛋白在CHO细胞质和细胞核中的激光共聚焦检测图绿色荧光显示SPAG8蛋白在细胞中的分布；红色荧光显示细胞核的位置，黄色荧光是红绿荧光的叠加结果图4.SPAG8蛋白在CHO细胞质中的激光共聚焦检测图绿色荧光显示SPAG8蛋白在细胞中的分布；红色荧光显示细胞核的位置，黄色荧光是红绿荧光的叠加结果图5.LMB处理之后，GFP-SPAG8融合蛋白在CHO细胞核的激光共聚焦检测图绿色荧光显示SPAG8蛋白在细胞中的分布；红色荧光显示细胞核的位置，黄色荧光是红绿荧光的叠加结果图6.SPAG8蛋白在细胞中分布的免疫电镜检测图免疫电镜的方法观察了SPAG8蛋白在细胞中的分布，同时捕捉到一个正通过核孔复合体的SPAG8蛋白。在图中放大的图片中可以观察到在分隔细胞核与细胞质的核膜的一个区域出现一个不连续的孔状结构，称为核孔。核孔区较透明，并且在核孔面向细胞核的一侧有一串阳性的金颗粒信号图7.GST pull down实验结合Western-blot检测SPAG8蛋白与ACT蛋白的结合Lane 1睾丸组织抽提液并用SPAG8蛋白的抗体检测的阳性对照，Lane 2睾丸组织抽提液+GST-ACT，然后用SPAG8蛋白的抗体检测的实验组，Lane 3组织抽提液+GST，然后用SPAG8蛋白的抗体检测的阴性对照组。
此结果表明纯化的ACT蛋白可以与睾丸抽提液中的SPAG8蛋白相互结合。
图8.免疫共沉淀实验结合Western-blot检测SPAG8蛋白与ACT蛋白的结合Lane 1睾丸组织抽提掖并用SPAG8蛋白的抗体检测的阳性对照，Lane 2组织抽提掖+ACT抗体，然后用SPAG8蛋白的抗体检测的实验组，Lane 3组织抽提掖+免疫前血清，然后用SPAG8蛋白的抗体检测的阴性对照组此结果表明睾丸组织中的SPAG8蛋白和ACT蛋白可以相互作用。
图9.细胞的微管结构被破坏之后，SPAG8蛋白与ACT蛋白分布的激光共聚焦显微镜检测图采用破坏微管的Nocodazole处理同时转染有SPAG8蛋白和ACT蛋白的CHO细胞后，发现此两个蛋白在细胞中的分布发生明显改变，但是两个蛋白仍然相互作用。
图中红色荧光代表ACT蛋白，绿色荧光代表SPAG8蛋白，黄色荧光是红绿荧光的叠加图10.MTT法测稳定表达SPAG8和空载体的小鼠GC-2spd精母细胞生长速度的结果经过连续4天检测，发现过量表达SPAG8蛋白的小鼠精母细胞的生长速度明显低于对照组。
实施例1.重力沉降法分离小鼠各期生精细胞、总mRNA的提取、RT产物的制备和SPAG8基因的cDNA的扩增1)断颈处死适量的适龄雄性小鼠，75％乙醇浸泡，无菌操作取出睾丸，置于PBS溶液中，剥去白膜，尽量剔除血管；2)将曲细精管充分分离，移入离心管中，PBS洗涤数次；加入胶原酶至终浓度0.25％，33℃温育消化15min，其间不断震摇并用吸管吹吸数次，待组织和细胞沉降管底后，弃上清；3)加入含0.5mg/ml胰蛋白酶和1.0ug/ml DNase I的PBS 5ml，33℃温育消化15min，直至滴片镜检时视野中为散在的单细胞，1,000rpm离心10min；4)弃上清，用PBS洗两次，过100目细胞筛，细胞悬液于1,000rpm离心5min；弃上清，用PBS洗两次，细胞沉淀最后重悬于含0.5％BSA的10mlPBS中，过200目细胞筛，制成单细胞悬液并进行细胞计数；5)连接并固定好沉降池，池底部加入十数粒硅化玻璃珠，加入10mlPBS，从池底部出口缓慢加入单细胞悬液；6)用1640培养基分别配制4％和2％BSA溶液各250ml，同时倒入梯度发生器的两个不同容器内，梯度发生器出口直接连接沉降池的出口。打开活塞，调整流速，使BSA溶液以15ml/min的速度从底部进入沉降池，最终沉降池内的液体从上而下形成2％～4％的BSA连续梯度；4℃沉降3h，使细胞按不同大小在BSA梯度介质中通过自然重力沉降而分层。收集细胞溶液，流速为5ml/min，每离心管收集10ml；7)1,000rpm离心15min，弃上清，将细胞重悬于0.5ml含0.5％BSA的1640培养基中。8)取少量细胞悬液涂片，苏木素染色，光镜下观察每管细胞的组成及纯度；将纯度＞＝85％的同类细胞合并，取一滴细胞悬液，加10ul 0.4％台盼蓝，计细胞总数及死细胞百分比。10)调整细胞浓度为106个/ml，然后滴片、染色，光镜下任选5个视野，计算细胞纯度。
沉降分离得到的生精细胞往往混有少量支持细胞和间质细胞，将此细胞悬液接种到无菌培养瓶中，在37℃ 5％CO2及饱和湿度条件下培养6～8h，支持细胞和间质细胞贴壁，而生精细胞不贴壁，轻轻摇动培养瓶使精原细胞充分悬浮，吸出培养液，光镜下再次检测细胞纯度和数量，并计算均值。
在1×107个细胞中加入1ml Trizol试剂(Life Technologies)，按照Trizol试剂说明所述提取总RNA。进而按照逆转录试剂盒说明制备RT产物。采用引物AATGGAGACC ACCGAGTCTA和CTAGTCGCCCACACACACCG G扩增SPAG8基因的特异片段(图1)。
2.免疫荧光以及激光共聚焦的方法观察SPAG8蛋白在生精细胞以及CHO细胞中的分布采用免疫荧光的方法观察SPAG8蛋白在生精细胞中的位置分布；以及将SPAG8基因构建到含有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1载体中，转染CHO细胞，使用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在细胞中的分布，具体方法如下A.免疫荧光方法1)取出小鼠的睾丸组织，并将曲线精管分段分离后将各期的生精细胞涂到载玻片上；2)以4％多聚甲醛固定液室温固定细胞10～15min；3)PBS漂洗，3×5min；室温下，0.5％ Triton/PBS透化处理10min；4)PBS漂洗，3×5min；5)以3％ BSA/PBS封闭，37℃，30min；6)以抗SPAG8蛋白的抗体作为一抗在37℃孵育细胞30min；7)PBS漂洗，3×5min；8)以荧光素标记的二抗在37℃孵育30min；PBS漂洗，3×5min；9)PI室温染色3～5min后封片；立刻用荧光显微镜观察并照相。
B.激光共聚焦显微镜观察将盖玻片分次置于浓酸中浸泡2h，用去离子水洗净后室温干燥。将经酸处理的盖玻片置于10倍稀释的多聚赖氨酸溶液中，室温放置5min后取出，置于60℃干燥1h或室温过夜。用前将盖玻片浸泡于75％乙醇中至少30min。
实验前两天将处理过的盖玻片放置于6孔培养板板中，将处于对数生长期的CHO细胞接种于6孔板中，每孔3×105个细胞，37℃，5％ CO2培养至70％饱和度。用50μL无抗生素无血清DMEM分别稀释3μg质粒和3.5μL Lipofectamine 2000。室温放置2min后将稀释的质粒和Lipofectamine 2000混匀，室温放置20min。将上述混合物滴加到6孔培养板中，37℃，5％ CO2孵箱中继续培养24-48h。
细胞荧光直接观察1)细胞固定用PBS清洗细胞两次，取出盖玻片，用滤纸将残留液体吸干，以4％多聚甲醛固定液室温固定10min。2)PBS漂洗，3×5min。3)去离子水漂洗，2×5min。4)封片取10μL封片剂滴在载玻片上，将盖玻片有细胞的一面朝下封片，周围用指甲油封住。5)用激光共聚焦显微镜观察(图3ABC)。
3.金标免疫电镜观察SPAG8蛋白在生精细胞中的分布1)0.01M PBS溶液清洗分离的生精细胞；2)1000rpm，10min，室温收获至少2*106细胞；3)4％多聚甲醛和0.1％戊二醛的固定液在4℃固定2小时；4)0.01M PBS溶液清洗固定块三次；5)分别用30％，50％，75％，90％，100％的冰预冷乙醇对固定的样品在4℃进行梯度脱水，每次15min；6)100％的无水乙醇再对样品进行脱水，两次(可在室温进行)；7)对样品进行浸泡，以去除乙醇；8)将组织块轻轻放到胶囊中，然后加包埋剂将样品淹没；9)-20℃，360nm，15W紫外灯，距离样品10厘米进行照射引发聚合，聚合反应需要36小时；10)制备免疫电镜样品超薄切片；11)电镜金标免疫反应PBS溶液清洗标本网，血清室温封闭1小时，用PBS按一定比例稀释一抗，4℃，过夜进行一抗反应，PBS溶液清洗标本网(充分洗涤)，按1∶10的比例稀释10nm金标记的二抗，室温反应60分钟，BS溶液清洗标本网(充分洗涤)，标本晾干后，用0.5％的醋酸铀染液和0.4％铅染液染色4.GST-ACT融合蛋白的兔源抗血清制备将pGEX-4T-3-ACT转化E.coli strain BL21(DE3)进行原核表达，然后使用亲和层析的方法纯化GST-ACT蛋白。
取三只2kg重的新西兰大白兔(两只作为实验组，一只为对照组)。分别于免疫前从耳缘静脉取0.5mL正常血清做阴性对照。将纯化的GST-ACT蛋白与福氏完全佐剂混合，采用背部皮内多点注射，约20-30点。对照组取溶解GST-ACT蛋白用的缓冲液与佐剂混合。初始免疫后2、4、8周采用抗原和福氏不完全佐剂混合进行加强免疫。酶联免疫吸附测定(ELISA)抗体滴度，Western Blot检测抗体的反应性和特异性。
将免疫用样品行12％ SDS-PAGE电泳(反应性检测GST-ACT蛋白每泳道上样量为1μg；特异性检测转化pGEX-4T-3-ACT并诱导后的细菌裂解液，每泳道上样量为50μg)。SDS-PAGE结束后，将塑料支架平放，依次放置海绵垫、3层滤纸、凝胶、PVDF膜、3层滤纸、海绵垫，赶走各层间气泡，夹好支架，在冰浴中进行电转，230mA，1.5h(PVDF膜需经100％甲醇浸透5min，电转液平衡15min后方可使用)。电转结束后，将膜置于去离子水中漂洗5min。切下边侧的蛋白质分子量Marker条带，浸入0.2％氨基黑染液染色1-2min，然后10％乙酸脱色至可见蛋白质条带，蒸馏水漂洗观察转移效果，并密封保存留待以后作为分析结果时分子量的参照。转移的滤膜勿干，准备用于杂交。将做好标记的滤膜经TBS漂洗后，加入适量封闭液(含5％脱脂奶粉、1％正常羊血清的TBS-T溶液)中，室温轻摇2h。将滤膜放入杂交袋内，按照0.1mL/cm2加入一抗(反应性检测将抗血清1∶500、1∶1000、1∶2000；1∶5000稀释；特异性检测1∶1000稀释抗血清)。除尽气泡，封口。于4℃轻摇过夜。取出滤膜，用TBS-T洗三次，每次10min。将膜放入塑料袋内，按照0.1mL/cm2加入碱性磷酸酶标记的山羊抗兔IgG抗体。赶除气泡，封口。室温轻摇2h。取出滤膜，用TBS-T洗三次，每次10min。用显色缓冲液(100mM NaCl，5mM MgCl2，100mMTris-HCl pH 9.5)平衡膜5min。将滤膜浸入含100μL Reagent A与100μL Reagent B(Bio-Rad)的10mL显色缓冲液中，于室温下轻轻摇晃使蛋白质条带显现，蒸馏水中漂洗，4℃避光保存并扫描。
5.pull down实验证明SPAG8蛋白与ACT蛋白在体外的相互作用1)取GST-ACT融合蛋白溶液和GST蛋白溶液分别与50μl Glutathione Sepharose 4B resin混合，4℃孵育2h；2)分别加入纯化的MBP-SPAG8蛋白或组织抽提液，4℃孵育2h；3)用50倍柱体积的PBS溶液冲洗柱子，洗去杂蛋白；4)加入100μl GST洗脱缓冲液(50mmol/L Tris-HCl pH 8.0，10mmol/LGlutathione)，室温孵育10min后，收集流出液；或者将柱内amylose resin转移至1.5ml离心管中，加入1×SDS上样缓冲液100μl，悬浮凝胶珠，100℃煮沸10min；5)取20μl行SDS-PAGE，之后将塑料支架平放，依次放置海绵垫、3层滤纸、凝胶、PVDF膜、3层滤纸、海绵垫，赶走各层间气泡，夹好支架，在冰浴中进行电转，230mA，1.5h(PVDF膜需经100％甲醇浸透5min，电转液平衡15min后方可使用)。电转结束后，将膜置于去离子水中漂洗5min。切下边侧的蛋白质分子量Marker条带，浸入0.2％氨基黑染液染色1-2min，然后10％乙酸脱色至可见蛋白质条带，蒸馏水漂洗观察转移效果，并密封保存留待以后作为分析结果时分子量的参照。转移的PVDF膜勿干，准备用于杂交。将做好标记的PVDF膜经TBS漂洗后，加入适量封闭液(含5％脱脂奶粉、1％正常羊血清的TBS-T溶液)中，室温轻摇2h。将PVDF膜放入杂交袋内，按照0.1mL/cm2加入1∶1000的一抗(抗SPAG8蛋白多克隆抗体)。除尽气泡，封口。于4℃轻摇过夜。取出PVDF膜，用TBS-T洗三次，每次10min。将膜放入塑料袋内，按照0.1mL/cm2加入碱性磷酸酶标记的山羊抗兔IgG抗体。赶除气泡，封口。室温轻摇2h。取出滤膜，用TBS-T洗三次，每次10min。用显色缓冲液(100mM NaCl，5mM MgCl2，100mM Tris-HCl pH 9.5)平衡膜5min。将滤膜浸入含100μL Reagent A与100μL Reagent B(Bio-Rad)的10mL显色缓冲液中，于室温下轻轻摇晃使蛋白质条带显现，蒸馏水中漂洗，4℃避光保存并扫描。(图7)6.免疫共沉淀实验证明SPAG8蛋白与ACT蛋白在体内的相互作用取适量液氮冻存组织，打碎，加组织裂解液冰上研磨或匀浆2min；4℃离心，15000rpm离心20min，将上清移入另一管内，即为胞质成分。蛋白定量后分装，-70℃冻存备用；1)在相同的两份组织抽提液中分别加入50μl protein A agarose，4℃，2hr对抽提液进行预清洗；2)1000g离心1min，回收上清；3)分别在上清中加入40μl的目的蛋白的多克隆抗体和兔免疫前血清，4℃，2hr rotate；4)分别向两份抽提液中加入50μl protein A agarose，4℃，rotate overnight；5)1000g 1min收集protein A agarose；6)1ml裂解buffer清洗protein A agarose，4℃，rotate 5min重复三次；7)1000g 1min收集protein A agarose；8)分别向protein A agarose中加入30μl1×SDS loading buffer，100℃煮沸10min；9)取20μl行SDS-PAGE，之后将塑料支架平放，依次放置海绵垫、3层滤纸、凝胶、PVDF膜、3层滤纸、海绵垫，赶走各层间气泡，夹好支架，在冰浴中进行电转，230mA，1.5h(PVDF膜需经100％甲醇浸透5min，电转液平衡15min后方可使用)。电转结束后，将膜置于去离子水中漂洗5min。切下边侧的蛋白质分子量Marker条带，浸入0.2％氨基黑染液染色1-2min，然后10％乙酸脱色至可见蛋白质条带，蒸馏水漂洗观察转移效果，并密封保存留待以后作为分析结果时分子量的参照。转移的PVDF膜勿干，准备用于杂交。将做好标记的PVDF膜经TBS漂洗后，加入适量封闭液(含5％脱脂奶粉、1％正常羊血清的TBS-T溶液)中，室温轻摇2h。将PVDF膜放入杂交袋内，按照0.1mL/cm2加入1∶1000的一抗(抗SPAG8蛋白多克隆抗体)。除尽气泡，封口。于4℃轻摇过夜。取出PVDF膜，用TBS-T洗三次，每次10min。将膜放入塑料袋内，按照0.1mL/cm2加入碱性磷酸酶标记的山羊抗兔IgG抗体。赶除气泡，封口。室温轻摇2h。取出滤膜，用TBS-T洗三次，每次10min。用显色缓冲液(100mM NaCl，5mM MgCl2，100mMTris-HCl pH 9.5)平衡膜5min。将滤膜浸入含100μL Reagent A与100μL Reagent B(Bio-Rad)的10mL显色缓冲液中，于室温下轻轻摇晃使蛋白质条带显现，蒸馏水中漂洗，4℃避光保存并扫描(图8)。
7.MTT法检测SPAG8蛋白过量表达对小鼠精母细胞增殖的影响将稳定表达SPAG8蛋白和pcDNA6/V5-HisB-Flag空载体的小鼠GC-2spd精母细胞以5000/孔的密度种植于96孔培养板中，连续培养4天。之后每过24h，在200μL培养基中加入20μL 5mg/mL thiazolyl bluetetrazolium bromide(MTT)，于37℃反应4h。弃去培养基，加入100μL DMSO裂解细胞，使用酶标仪检测490nm的OD值。每个实验点设3个孔，实验重复3次。以第一天接种的细胞的光密度值为100％，之后每天的结果相比于第一天的结果的百分比为当天的结果(图10)。
权利要求
1.本发明涉及一个人睾丸特异表达蛋白SPAG8的性质和功能。
2.根据权利要求1所述发明，其特征在于SPAG8蛋白在细胞中的分布具有表达的时间阶段特异性和空间分布多样性。
3.根据权利要求1、2所述发明，其特征在于SPAG8蛋白在细胞中的表达具有时间特异性当生精细胞发育到精母细胞时期，SPAG8蛋白开始表达，一直持续到成熟精子细胞期，而在精原细胞中则不存在该蛋白的表达。
4.根据权利要求1、2、3、所述发明，其特征在于SPAG8蛋白在细胞中的分布具有空间分布特异性在精母细胞期大部分SPAG8蛋白定位在细胞质中，同时一部分蛋白存在于细胞核中；而在成熟精子细胞中则所有SPAG8蛋白全部定位在顶体和尾部。SPAG8蛋白在细胞中的分布是动态性的，存在细胞质和细胞核之间的穿梭过程。从细胞核向细胞质运输的过程受CRM1分子的介导。这个过程可以被出核特异性抑制剂LMB所抑制。
5.根据权利要求1、2、3、4、所述发明，其特征在于SPAG8蛋白在细胞中的分布受到微管的调节。
6.根据权利要求1、2、3、4、5所述发明，其特征在于SPAG8蛋白在酵母双杂交系统中能够与ACT蛋白发生相互作用。
7.根据权利要求1、2、3、4、5、6所述发明，其特征在于SPAG8蛋白与ACT蛋白在体内和体外都存在相互作用。
8.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7所述发明，其特征在于SPAG8蛋白与ACT蛋白在CHO细胞中存在良好的共定位现象，并且两个蛋白质在细胞中的分布都受到微管的调节。
9.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8所述发明，其特征在于SPAG8蛋白的过量表达使得小鼠精母细胞的生长速度降低。
10.根据权利要求1、2、3、4、5、6、7、8、9所述发明，其特征在于SPAG8蛋白与细胞骨架之一的微管之间存在密切的关系，对细胞的生长以及精子变形期的物质运输起一定的作用。在男性生殖领域因精子发育不正常而引起的不孕不育以及与细胞分裂相关的男性睾丸组织肿瘤方面的理论研究和临床应用具有潜在的价值和前景。
全文摘要
本发明涉及人睾丸特异表达蛋白SPAG8蛋白的性质和生物学功能。内容包括SPAG8蛋白在细胞的分布具有表达的时间阶段特异性和空间分布多样性。SPAG8蛋白在细胞中的分布受到微管的调节。利SPAG8蛋白C端序列作为“诱饵”进行酵母双杂交实验，获得一个编码ACT基因的克隆。体外和体内实验证实了SPAG8蛋白与ACT蛋白的相互作用。两个蛋白质在细胞内曾现良好的共定位，并且在细胞中的分布受到微管的影响。进一步实验发现过量表达的SPAG8蛋白使小鼠精母细胞的生长速度减慢。对SPAG8蛋白性质和功能的研究有利于对精子发生的规律和调控机理的进一步认识，有助于解决男性生殖领域因精子发育不正常而引起的不育以及与细胞分裂相关的睾丸组织肿瘤方面的理论问题和临床实践。
文档编号A61P35/00GK1869065SQ20051007106
公开日2006年11月29日 申请日期2005年5月24日 优先权日2005年5月24日
发明者陈迎春, 唐晓玲, 缪时英, 王琳芳 申请人:中国医学科学院基础医学研究所