施用并利用vegf抑制剂治疗人类癌症的方法

专利名称：施用并利用vegf抑制剂治疗人类癌症的方法
施用并利用VEGF抑制剂治疗人类癌症的方法 发明领域
本发明涉及通过抑制血管内皮生长因子(VEGF)活性来促进肿瘤 和转移灶退化的方法。
相关领域的描述
在人类癌症中血管内皮生长因子(VEGF)的表达几乎是普遍的， 这与它作为肿瘤新血管生成的关键媒介物的作用相一致。在多个不同 的异种移植物模型中，通过结合该分子或其VEGFR-2受体以阻断VEGF 的功能抑制了植入的胂瘤细胞的生长(参见，例如，Gerber等人(2000 ) Cancer Res. 60: 6253-6258 )。被称为"VEGFm2捕获"或"VEGF捕 获"拮抗剂的可溶性VEGF融合蛋白拮抗剂已被描述(Kim等人(2002 ) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 11 399-404; Holash等人(2002 ) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:11 393-8。
发明概述
在第一个方面，本发明以治疗患有癌症的人类患者的方法为特征， 包括对人类患者施用有效量的血管内皮生长因子(VEGF)融合蛋白捕 获拮抗剂(trap antagonist),该方法包4舌(a)对患者施用初始剂 量至少为大约0. 3mg/kg的VEGF捕获拮抗剂；以及(b)以大约等于或 少于初始剂量的量对患者施用多个后续剂量的V E G F捕获拮抗剂，其中 该后续剂量在时间上互相相隔至少一天。通过提供初始剂量的VEGF 捕获拮抗剂，并随后提供等量或较少量的后续剂量的捕获剂(trap) (前负荷较大)，本发明的给药方案允许及早达到有效靶谷血清浓度。 有效耙谷血清浓度在4周或更短时间内达到，优选3周或更短时间， 更优选2周或更短时间，并且最优选1周或更短时间，包括l天或更
短时间。此后对于治疗方案的余下部分或直至达到抑制疾病症状，通 过施用等量或较少量的维持剂量来维持靶血清浓度。
在具体实施方案中，VEGF融合蛋白拮抗剂的初始剂量范围为大约 每kg体重0. 3mg (mg/kg)至30 mg/kg。在一个更具体的实施方案中， 初始剂量范围为大约0.5 mg/kg-10 mg/kg。在一个再更具体的实施 方案中，初始剂量范围为大约1 mg/kg-6 mg/kg。优选地，累积周剂 量范围为0. 3 mg/kg - 30 mg/kg。
在具体实施方案中，VEGF融合蛋白拮抗剂的至少一个后续剂量范 围为大约0. 3 mg/kg体重-30 mg/kg 。在一个更具体的实施方案中， 至少一个后续剂量范围为大约G. 5 mg/kg-10 mg/kg。在一个再更具 体的实施方案中，至少一个后续剂量范围为大约1 mg/kg-6 mg/kg。
在一个实施方案中，后续剂量在时间上互相相隔至少1天、至少 1周、至少2周、至少3周、至少1月、至少2月或至少3月。根据 本发明，需要达到抑制疾病症状时，优选重复按剂量给药的周期。
本发明方法可以用于治疗出现在脑和脑膜、口咽、肺和支气管树、 胃肠道、男性和女性生殖道、肌肉、骨駱、皮肤及附属物、结締组织、 脾脏、免疫系统、造血细胞和骨髓、肝脏和泌尿道以及特殊的感觉器 官例如眼中的原发性和/或转移性肺瘤。更具体而言，通过本发明方法 治疗的人类患者是诊断有下列癌症之一的患者肾细胞癌、胰腺癌、 乳癌、前列腺癌、结肠直肠癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌 或黑素瘤。在一个具体实施方案中，被治疗的癌是肾细胞癌。在另一 实施方案中，被治疗的癌是胰腺癌。在另一实施方案中，被治疗的癌 是乳癌。在另一实施方案中，被治疗的癌是结肠直肠癌。在另一实施 方案中，被治疗的癌是恶性间皮癌。在另一实施方案中，被治疗的癌 是多发性骨髓瘤。在另一实施方案中，被治疗的癌是卵巢癌。在另一 实施方案中，被治疗的癌是黑素瘤。在另一实施方案中，被治疗的癌 是非小细胞肺癌。在另一实施方案中，被治疗的癌是前列腺癌。
VEGF融合蛋白捕获拮抗剂是包括两种融合蛋白的二聚体，每种融 合蛋白由来自两种不同VEGF受体的免疫球蛋白(Ig)样结构域融合多
聚化组分组成，其中每种融合蛋白通过不同融合蛋白上的多聚化组分
的相互作用能够形成高级复合体。在本发明方法中有用的VEGF捕获拮 抗剂是能够结合血管内皮生长因子A ( VEGFA)和胎盘生长因子(PLGF) 的二聚体，并选自乙酰化的Flt-l(l-3)-Fc、 Flt-l (1-3R-〉N)-Fc、 Flt-l(l-3 A b)-Fc 、 Flt-l(2-3 A B)-Fc 、 Flt-l (2-3)-Fc， Fit-1D2-VEGFR3D3-Fc △ Cl (a) 、 Flt-1D2-Flk-1D3-Fc △ Cl (a)和 VEGFR1R2-FcACl (a)。在一个具体且优选的实施方案中，VEGF捕获拮 抗剂是具有SEQ ID NO: 1中所述核苷酸序列和SEQ ID NO: 2中所述 氨基酸序列的VEGFR1R2-FcACl (a)(也称为VEGF捕获剂R1R2)。本发 明包括VEGF捕获剂的用途，所述VEGF捕获剂与SEQ IDNO: l中所述 核苷酸序列和/或SEQ ID NO: 2中所述氨基酸序列有至少90 % 、 95%、 98。/。或至少99%的同源性。
可以通过本领域已知的任何方法施用该试剂，包括皮下、肌内、 皮内、腹膜内、静脉内、鼻内或口服给药。在一个优选实施方案中， 初始剂量通过皮下注射或静脉内注射施用。在进一步的实施方案中， 后续剂量通过皮下注射施用。在一个优选实施方案中，初始剂量和至 少一个后续剂量通过皮下注射施用。
在第二个方面，本发明以治疗易感或诊断有病症的人类患者的方 法为特征，所述病症被能够阻断或抑制血管内皮生长因子A (VEGF A) 的试剂抑制，其中能够阻断或抑制VEGFA的试剂是VEGF捕获拮抗剂， 该方法包括(a)对患者施用初始剂量至少为大约0. 3 mg/kg的VEGF 捕获剂；以及(b)以大约等于或少于初始剂量的量对患者施用多个后续 剂量的VE GF捕获剂，其中所述后续剂量在时间上互相相隔至少 一 天。 在一个具体且优选的实施方案中，VEGF捕获拮抗剂是具有SEQ IDNO: 1中所述核苷酸序列和SEQ ID NO: 2中所述氨基酸序列的VEGFRlR2-Fc A Cl (a)(也称为VEGF捕获剂R1R2)。
在第三个实施方案中，本发明以任选组合第二种化学治疗剂的本 发明治疗方法为特征。可与VEGF捕获剂组合施用的化学治疗剂包括， 例如，抗VEGF抗体，蒽环霉素衍生物例如阿霉素或表柔比星，紫杉酚(taxol )，和紫杉类(taxoid)衍生物例如紫杉醇(Taxol )及相关 4汙生物。
其他目的和优点经参阅随后的详细描述将是显而易见的。
发明详述
在描述本方法之前，应当理解本发明不限于所描述的具体方法和 实验条件，因为此类方法和条件可以改变。还应当理解本文所使用的 术语仅用于描述具体实施方案，并不希望用于限制，因为本发明的范 围将仅由所附的权利要求来限定。
如本说明书和所附权利要求中所使用的，除非上下文明确说明否 则单数形式的"a" 、 "an"和"the"包括复数。因此例如提及"一
人员将是显而易、见的类型的一^或多种方法和/或步k、。 二 '
除非另外定义，本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明 所属领域普通技术人员通常理解相同的含义。尽管与本文所述那些类
是描述优选的方法和材料。
一般描述
血管内皮生长因子/血管通透因子(VEGF )最初被鉴别为能够增加 血管通透性的肿瘤来源因子。后来发现它是内皮细胞的增殖因子。在 胚胎中，VEGF绝对是脉管系统发育所必需的。在成人中，VEGF在与血 管通透性增加和血管发生相关的各种正常和病理过程中是上调的。
VEGF相关的血管发生生长因子家族包括VEGF本身(VEGF-A)及相 关蛋白VEGF-B、 -C、 -D和E，以及胎盘生长因子(PLGF )。此外，至 少存在4种不同的VEGF-A同种型。然而，由于某些家族成员仅在最近 才被鉴别，它们的生物学重要性还知之甚少。VEGF及其相关因子的作 用由一组3个受体酪氨酸激酶即VEGFR1、 VEGFR2和VEGFR3介导。
VEGF在肿瘤血管发生中的重要性已在许多动物模型中得到证实，
其中通过各种策略阻断VEGF信号传导已被证实在减少血管发生和抑 制肺瘤生长方面有效(Gourley和Williamson ( 2000 ) Curr. Pharm. Des. 6: 417-39) 。 VEGF的通透性诱导特性还有病理学重要性，例如 在与癌相关的水肿形成、腹水和胸膜腔积液中。血管化作用和VEGF 产生的程度已被提议作为许多类型的实体和血液恶性肿瘤的预示因子 (由Poon等人，(2001 ) J. Clin. Oncol. 19: 1207-1225综述)。 与来自动物研究的预测一致，基于来自早期临床试验的初步报告， 利用人源化单克隆抗体阻断VEGF已在癌症患者中显现出有希望的结 果报告(Bergsland等人(2000 ) ASCO Abstract #939 )。由于其对 于VEGF较大的亲和力及其结合VEGF家族其他成员例如PIGFs的能力， VEGF融合蛋白捕获拮抗剂是有效且有用的抗癌治疗剂。
定义
术语"治疗上有效的剂量"是指产生施用预期效应的剂量。确切 的剂量将取决于治疗目的，并且将由本领域技术人员利用已知技术来 确定(参见，例如Uoyd ( 1999 ) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)。 取决于被治疗的病状，有效性 可以用常规方法来测量。对于癌症治疗，有效性例如可以通过评估疾 病进展时间(TTP)或测定应答率(RR)来测量。治疗上有效量也指当 维持一定时间时显示对抑制疾病症状有效的靶血清浓度，例如谷血清 浓度。
术语"癌症"和"癌性的"是指或描述哺乳动物中一般以无调节 的细胞生长为特征的生理状况。癌症的实例包括，但不限于，癌、淋 巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。更具体而言，这样的癌症的实例包 括鳞状上皮细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、胰腺癌、 成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳癌、前 列腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌、前列 腺癌、外阴癌、曱状腺癌、肝部癌症以及各种类型的头和颈癌。更具 体地，本发明方法对于治疗由VEGF抑制剂改善或抑制的任何病状或疾
病有用。相应地，当该疾病或病状为癌症时，由本发明方法治疗的癌
症是通过施用VEGF抑制剂而得到改善或抑制的癌症。
术语"阻滞剂"、"抑制剂"或"拮抗剂"是指延緩或阻止化学 或生理反应或应答的物质。通常的阻滞剂或抑制剂包括但不限于反义 分子、抗体、拮抗剂及其衍生物。更具体地，VEGF阻滞剂或抑制剂的 实例是基于VEGF受体的拮抗剂，包括，例如，抗VEGF抗体或VEGF 捕获拮抗剂例如VEGFR1R2-FcACl (a) ( SEQ ID NO: 1-2)。关于基 于VEGF受体的拮抗剂(包括VEGFR1R2-FcACl(a))的完整描述参见 PCT/^开WO/00/75319。
术语"药品说明书(package insert)，，用于指通常包括在治疗 产品商品包装中的用法说明书，它包含关于此类治疗产品使用的适应 症、用途、用量、用法、禁忌症和/或警告的信息。
术语"血清浓度，，、"血清药物浓度，，或"血清VEGF捕获剂浓度，， 指药物例如VEGF融合蛋白捕获拮抗剂在用该药物治疗的动物或人类 患者血清或血浆中的浓度。优选通过免疫测定法测定血清浓度。优选
地，根据本文所公开步骤该免疫测定法是酶联免疫吸附测定法 (ELISA)。
术语"峰血清浓度，，指药物输送到动物或人类患者后不久，在药 物已被分布遍及血液系统后，但在药物经身体发生显著的组织分布、 代谢或排泄之前的最高血清药物浓度。
术语"谷血清浓度"指在一系列剂量中在前一剂量药物输送后并 紧在下一后续剂量药物输送前之时的血清药物浓度。 一般地，谷血清 浓度是在一系列药物施用中最低的持续有效的药物浓度。同样地，谷 血清浓度经常作为最低有效血清浓度而成为目标，因为它代表另一剂 量药物将被作为治疗方案的一部分进行施用时的血清浓度。如果通过 静脉内给药输送药物，最优选在前负荷初始药物输送的l天内达到谷 血清浓度。如果通过皮下给药输送药物，优选在3天或更短时间内达 到峰血清浓度。根据本发明，利用本文所公开的任何一种药物输送方 法优选在4周或更短时间内，优选在3周或更短时间内，更优选在2
周或更短时间内，最优选在l周或更短时间内，包括在l天或更短时 间内达到谷血清浓度。
术语"静脉内输注"指经过一段时间将药物导入动物或人类患者
静脉内，所述时间大于约5分钟，优选大约30 - 90分钟，尽管根据本 发明，可替代地实施静脉内输注10小时或更短时间。
术语"皮下给药"指从药物容器中通过相对緩慢、持续的输送将 药物导入动物或人类患者的皮肤下，优选在皮肤和下层组织之间的袋 (pocket)内。该袋可以通过将皮肤向上挤或拉离下层组织产生。
术语"前负荷(front loading)",当指药物施用时，意欲描述 初始较高的剂量，随后为间隔的相等或较少的剂量。初始较高的剂量 意指动物或人类患者的血清药物浓度更迅速增长至有效靶血清浓度。 根据本发明，通过在3周或更短时间内输送初始剂量以使动物或患者 血清浓度达到靶谷血清浓度来达到前负荷。优选地，初始前负荷剂量 或系列剂量在2周或更短时间内施用，更优选在1周或更短时间内， 包括l天或更短时间。最优选地，初始剂量为单次剂量并且随后至少 l周没有后续维持剂量时，该初始剂量在1天或更短时间内施用。初 始剂量为系列剂量时，每个剂量相隔至少3小时，但不超过3周或更 短时间，优选2周或更短时间，更优选l周或更短时间，最优选1天 或更短时间。
VEGF融合蛋白捕获拮抗剂
在一个优选实施方案中，VEGF捕获剂是受体-Fc融合蛋白，它由 人VEGFR1和VEGFR2受体胞外域的主要配体结合部分融合人IgGl的 Fc部分而组成。具体地，该VEGF捕获拮抗剂基本上由来自VEGFR1的 Ig结构域2组成，所述VEGFR1的Ig结构域2与来自VEGFR2的Ig结 构域3融合，所述VEGFR2的Ig结构域3又与IgGl的Fc结构域融合 (SEQ ID
在一个优选实施方案中，将编码VEGF捕获剂的表达质粒转染到 CH0细胞内，所述CH0细胞将VEGF捕获剂分泌到培养基中。所产生的
VEGF捕获剂是蛋白质分子量为97 kDa的二聚糖蛋白，并包含~15% 的糖基化从而产生115 kDa的总分子量。
因为VEGF捕获剂利用高亲和力受体的结合结构域来结合其配体， 所以其对于VEGF的亲和力大于单克隆抗体。VEGF捕获剂结合VEGF-A (KD= 0.5 pM) 、 PLGF1 (KD = 1.3 nM)以及PLGF2 (KD = 50 pM); 与VEGF家族其他成员的结合还未被完全表征。
治疗群体
本发明方法可以用于治疗出现在脑和脑膜、口咽、肺和支气管树、 胃肠道、男性和女性生殖道、肌肉、骨骼、皮肤、结締组织、免疫系 统、造血细胞和骨髓、肝脏和泌尿道以及特殊的感觉器官例如眼中的 肿瘤。更具体地，患有肾细胞癌、胰腺癌、乳癌、前列腺癌、结肠直 肠癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌或黑素瘤的人类患者可以 如下所述用VEGF捕获剂进行治疗。
组合治疗
在众多实施方案中，VEGF融合蛋白捕获拮抗剂可以与一种或多种 另外的化合物或疗法组合施用，包括第二种VEGF捕获分子。组合治疗 包括施用包含VEGF捕获剂和一种或多种另外的试剂的单一药物剂量 制剂；以及施用其自身分开的药物剂量制剂形式的VEGF捕获剂和一种 或多种另外的试剂。例如，VEGF捕获剂与细胞毒性试剂、化学治疗剂 或生长抑制剂可以以单 一 剂量组合物例如组合制剂的形式 一起给患者 施用，或每种试剂可以以分开的剂量制剂形式施用。使用分开的剂量 制剂时，本发明的VEGF特异性融合蛋白以及一种或多种另外的试剂可 以同时施用，或在分别错开的时间即顺次地施用。
如本文所使用的，术语"细胞毒性试剂"指抑制或阻止细胞功能 和/或导致细胞破坏的物质。该术语希望包括放射性同位素(例如，I131、 I125、 Y9°和Re186)，化学治疗剂，和毒素，例如细菌、真菌、植物或 动物来源的酶活性毒素或其片段。
"化学治疗剂"是在癌症治疗中有用的化学化合物。化学治疗剂
的实例包括烷化剂例如三胺硫磷和环磷酰胺(Cytoxan );烷基磺酸 盐类例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类例如苯佐替哌
(benzodopa )、卡波酉昆、美妥替旅(meturedopa )和乌瑞替旅(uredopa ) ， 乙撑亚胺类和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六曱蜜胺、三 乙撑蜜胺、，三乙撑磷酰胺、三乙撑硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺
(trimethylolomelamine ); 氛芥类例i口笨丁酸氛芥、茶氣芥、 cholophosphamide、磷雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、苯 丙氨酸氮芥、新氮芥、苯芥胆甾醇、松龙苯芥、氯乙环磷酰胺、尿嘧 啶氮芥；硝基脲类(nitrosureas)例如双氯乙基亚硝脲、氯脲菌素、 福莫司汀、环己亚硝脲、嘧啶亚硝脲、雷莫司汀；抗生素例如阿克拉 霉素(aclacinomysins )、放射菌素、authramycin、重氮丝氨酸、博 来霉素、放线菌素C、刺孢霉素、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、 色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正 亮氨酸、阿霉素、表柔比星、依索比星、去曱氧基柔红霉素、麻西罗 霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、派来霉素、 potfiromycin、噤呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链唑 霉素、杀结核菌素、乌苯美司、新制癌菌素、佐柔比星；抗代谢物例 如曱氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物例如二甲叶酸、曱氨 蝶呤、蝶酰三谷氨酸、三甲曲沙；嘌呤类似物例如氟达拉滨、6-巯基 嘌呤、；克唑鸟嘌呤、石危鸟嘌呤；嘧啶类似物例如环胞苷、氮杂力包苷、 6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他 宾、氟尿嘧啶脱氧核苷；雄激素类例如卡鲁睾酮、屈他雄酮丙酸酯、 环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺药(anti-adrenals)例如氨苯 哌酮、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂例如frolinic acid;醋葡醛 内酉旨；醛磷酰胺糖苦(aldophosphamide glycoside );氨基乙酰丙酸； 安吖咬；bestrabucil;比山群；依达曲沙；磷胺氮芥(def of amine ); 秋水仙胺；地吖醌；elfornithine;依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓； 羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二
胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基肼；甲 基节肼；PSK ;丙亚胺；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺 醌；2， 2'，2"-三氯三乙胺；乌拉坦；长春酰胺；氮烯咪胺；甘露醇氮 芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine;阿糖胞嘧啶
("Ara-C");环磷酰胺；三胺硫磷；紫杉烷类，例如紫杉醇(Taxol , Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N. J.)和多西他赛
(Taxotere ; Aventis Antony, France);苯丁酸氮芥；吉西他滨； 6-硫鸟噪呤；巯基噤呤；曱氨蝶呤；铂类似物例如顺铂和卡铂；长春 碱；柏；依托泊苷(VP-16);异环磷酰胺；丝裂霉素C;米托蒽醌； 长春新碱；长春瑞滨；诺维本；诺消灵；替尼泊苦；道诺霉素；氨喋 呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT-11;拓朴异构酶抑制剂RFS 2000; 二 氟曱基鸟氨酸(DMF0);视黄酸；esperamicins;卡培他滨；以及上 述任何一种的药物学上可接受的盐、酸或衍生物。这个定义中还包括 抗激素剂，所述抗激素剂产生调节或抑制激素对肿瘤的作用的效果， 例如抗雌激素剂包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制芳香酶
(aromatase)的4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、那洛昔芬
(keoxifene) 、 LY 117018、奥那司酮和托瑞米芬(Fareston);以 及抗雄激素剂例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、醋酸亮丙瑞林和戈 舍瑞林；以及上述任何一种的药物学上可接受的盐、酸或衍生物。
"生长抑制剂"用于本文时指在体外或体内抑制细胞特别是癌细 胞生长的化合物或组合物。生长抑制剂的实例包括阻断细胞周期进程
(在除S期以外的阶段)的试剂，例如诱导Gl停止和M期停止的试剂。 典型的M期阻滞剂包括长春花(长春新碱和长春碱)，Taxol ,以及 拓朴异构酶II抑制剂例如阿霉素、表柔比星、柔红霉素、依托泊苷和 博来霉素。那些阻止Gl的试剂也可以造成S期停止，例如，DNA烷化 剂例如他莫昔芬、泼尼松、氮烯咪胺、氮芥、顺铂、曱氨蝶呤、5-氟 尿嘧咬和ara-C。
药物组合物
在本发明方法实践中有用的药物组合物包括治疗上有效量的活性 剂以及药物学上可接受的栽体。术语"药物学上可接受的，，指经联邦 或州政府管理机构批准的或在美国药典或其他普遍公认的药典中列出
的用于动物并且更具体而言用于人的。术语"载体(carrier)"指稀 释剂、佐剂、赋形剂或用于施用治疗剂的媒介物。此类药物栽体可以 是无菌的液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那 些，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。适当的药物赋形剂包 括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、 硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙稀、 甘醇、水、乙醇等。需要时，该组合物还可包含少量湿润剂或乳化剂 或pH緩沖剂。这些组合物可采取的形式有溶液、悬浮液、乳状液、片 剂、丸剂、胶嚢、粉剂、持续释放制剂等。该组合物可以^L配制为含 常规粘合剂和栽体例如甘油三酯的栓剂。口服制剂可以包括标准栽体 例如药物级别的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、 碳酸镇等。E. W. Martin在"Remington's Pharmaceutical Sciences" 中描述了适当的药物载体的实例。
在一个优选实施方案中，该组合物依照常规操作配制为适合于人 类静脉内、皮下或肌内给药的药物组合物。必要时，该组合物还可包 括增溶剂和局部麻醉剂例如利多卡因以减轻注射位置处的疼痛。该组 合物通过输注施用时，它可以在包含药物级别的无菌水或盐水的输注 瓶中分散。该组合物通过注射施用时，可以提供1安瓿的无菌注射用 水或盐水，从而使得成分可以在施用前被混合。
本发明的活性剂可以被配制为中性或盐形式。药物学上可接受的 盐包括由游离的氨基基团形成的盐，例如从盐酸、磷酸、乙酸、草酸、 酒石酸等衍生的盐，以及由游离的羧基基团形成的盐，例如从钠、钾、 铵、钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁 卡因等衍生的盐。
制品
在本发明的另一实施方案中，提供了包含对于治疗上述病症有用 的材料的制品。该制品包括容器、标签和药品说明书。适当的容器包 括，例如瓶、管形瓶、注射器等。该容器可以由各种材料例如玻璃或 塑料制成。该容器包含对治疗该病状有效的组合物并可具有无菌入口 (例如，该容器可以是具有塞子的静脉注射溶液袋或管形瓶，所述塞
子可被皮下注射针头刺穿)。在组合物中至少一种活性剂是VEGF融合 蛋白捕获拮抗剂。在容器上或与容器相联的标签标明该组合物对于治 疗所选择的病状有用。该制品可进一步包括第二个容器，所述第二个 容器包含药物学上可接受的緩冲液，例如磷酸盐緩冲盐水、林格 (Ringer's)溶液以及葡萄糖溶液。它可进一步包括从商业和用户立 场来说需要的其他材料，包括其他緩冲液、稀释剂、过滤器、针和注 射器。此外，该制品可以包括含使用说明书的药品说明书，包括，例 如该组合物不能与蒽环霉素类型的化学治疗剂例如阿霉素或表柔比星 组合使用的警告。
见的，所述实施例是为了举例说明本发明而给出的，并不是希望限制 本发明。
实施例
用本发明方法和组合物的完整公开内容和描述，而不是希望限制本发 明人视为其发明的范围。已付出努力确保关于所使用的数字(例如量、 温度等)的精确性，但某些试验误差和偏差应当被说明。除非另有说 明，份是重量份，分子量是平均分子量，温度是摄氏度数，和压力为 大气压或接近大气压。
实施例1: VEGF融合蛋白捕获拮抗剂在灵长类中的药代动力学和 安全性。
和500 mL (级分C)的等分试样。从级分A、 B和C中除去溶剂后分 别得到产量为0.6g、 1.35 g和0.15 g。
正相和反相薄层层析证实本发明化合物已浓缩在级分A (粗纯品 2)中。粗纯品2进一步用HPLC分离，用氯仿/己烷混合物(85:15)的 COSMOSIL C18 (Nacalai Tesque, Inc.)得到1.3 mg化合物3 (4誦曱基-胆 甾_7_歸_3_醇)、1.2mg化合物4 (4-甲基-麦角甾-7-烯-3-醇)和1 mg化 合物5 (4-甲基-豆甾-7-烯-3-醇)。这些化合物的结构通过MS和NMR 得到证实。
在本测试中，用db/db小鼠评估具有洛芬醇骨架的化合物的内分 泌腺细胞功能(胰岛素产生能力)保护作用，所述小鼠已知是胰脏功能 减退或胰脏组织功能障碍的动物模型。
(1) 制备样品
用上述制备实施例制备的4-曱基-胆甾-7-烯-3-醇作为测试样品 1,用4-甲基-麦角甾-7-烯-3-醇作为测试样品2，用4-曱基-豆甾-7-烯-3-醇作为测试样品3。
(2) 测试方法
在本测试中，用6周大的雄性db/db小鼠(购自Clea Japan, Inc.)。 将这些小鼠分组，每组由7只动物组成。使各测试样品溶于DMSO 中，用生理盐水将浓度调节至O.l或1吗/mL。将DMSO终浓度调节 至0.2%。用探头将1 mL测试样品口服给予胰脏功能障碍模型小鼠， 每天1次持续42天。在连续给予第43天用Lbis胰岛素小鼠ELISA 试剂盒(Shibayagi Co., Ltd)测定血清胰岛素水平。
(3) 测试结果
在连续给予样品第43天的血清胰岛素水平如表1显示。当测试 样品l、 2或3以1昭/动物的浓度给予时，血清胰岛素水平分别为阴 性测试组观察到的184%、 210%和211%,从而清楚观察到通过预防
权利要求
1.包括两种融合多肽的二聚体的血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂在制备用于通过下述方法治疗患有癌症的人类患者的药物中的用途，所述每种融合多肽包括(a)Flt-1的免疫球蛋白(Ig)样结构域2和Flk-1或Flt-4的Ig结构域3，以及(b)多聚化组分，所述方法包括(a)对所述患者施用初始剂量至少为大约0.3mg/kg的所述VEGF拮抗剂；以及(b)对所述患者施用多个后续剂量的所述VEGF拮抗剂，其中所述后续剂量大约等于或少于初始剂量并在时间上互相相隔至少1天。
2. 根据权利要求1的用途，其中所述初始剂量为大约0.3 mg/kg -大约30 mg/kg;优选大约0. 5 mg/kg -大约10 mg/kg。
3. 根据权利要求2的用途，其中所述初始剂量为大约1 mg/kg-大 约6 mg/kg。
4. 根据前述权利要求中任何一项的用途，其中所述初始剂量为大 约1 mg/kg、 2 mg/kg、 3 mg/kg、 4 mg/kg、 5 mg/kg和6 mg/kg。
5. 根据前述权利要求中任何一项的用途，其中所述后续剂量是相 同的或不同的，并且为大约0. 3 mg/kg-大约30 mg/kg;优选大约0. 5 mg/kg _大约10 mg/kg。
6. 根据权利要求5的用途，其中所述后续剂量为大约1 mg/kg、大 约2 mg/kg、大约3 mg/kg、大约4 mg/kg、大约5 mg/kg和大约6 mg/kg。
7. 根据前述权利要求中任何一项的用途，其中所述后续剂量在时 间上互相相隔至少1周。
8. 根据权利要求7的用途，其中所述后续剂量在时间上互相相隔至少1月。
9. 根据前述权利要求中任何一项的用途，其中所述癌症选自肾细 胞癌、胰腺癌、乳癌、前列腺癌、结肠直肠癌、恶性间皮瘤、多发性骨 髓瘤、卵巢癌和黑素瘤。
10. 根据前述权利要求中任何一项的用途，其中所述癌是被血管内 皮生长因子(VEGF)拮抗剂和胎盘生长因子(PLGF)拮抗剂抑制的癌。
11. 根据前述权利要求中任何一项的用途，其中所述VEGF拮抗剂 选自乙酰化的Flt-l (l-3)-Fc、 Fit-1 (1U-Fc、 Fit-1 (1-3AB)-Fc、 Fit-1 (2-3AB)-Fc、 Flt-l (2-3)-Fc， Fit-1D2-VEGFR3D3-Fc △ CI (a)、 Flt-1D2-Flk-1D3-FcAC1 (a)和VEGFR1R2-Fc △ CI (a)。
12. 根据权利要求ll的用途，其中所述VEGF拮抗剂是包括SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的VEGFR1R2-FcACl。
13. 根据前述权利要求中任何一项的用途，其中配制所述药物以用 于通过皮下注射或静脉内注射施用所述初始剂量和后续剂量。
14. 一种治疗诊断有癌症的人类患者的方法，包括对所述人类患者 施用有效量的如权利要求1、 11或12中所定义的VEGF拮抗剂，所述方 法包括(a) 对所述患者施用初始剂量至少为大约0. 3mg/kg的所述VEGF拮 抗剂；以及(b) 对所述患者施用多个后续剂量的所述VEGF拮抗剂，其中所述后 续剂量大约等于或少于初始剂量并在时间上互相相隔至少1周。
15. 根据权利要求14的方法，其中所述初始剂量和/或所述后续剂 量如权利要求2 - 6中任何一项所定义。
16. 根据权利要求14或15的方法，其中所述癌症如权利要求9或 10中所定义。
17. 根据权利要求14-16中任何一项的方法，其中所述后续剂量 在时间上互相相隔至少3周。
18. 根据权利要求14-H中任何一项的方法，其中所述初始剂量 和/或所述后续剂量通过皮下注射或静脉内注射施用。
全文摘要
一种治疗患有癌症的人类患者的方法，包括对该人类患者施用有效量的血管内皮生长因子(VEGF)捕获拮抗剂，该方法包括(a)对该患者施用初始剂量至少为大约0.3mg/kg的VEGF拮抗剂；以及(b)以大约等于或少于初始剂量的量对该患者施用多个后续剂量的VEGF拮抗剂，其中所述后续剂量在时间上互相相隔至少1天。本发明方法对于治疗人类癌症有用，所述癌症选自肾细胞癌、胰腺癌、乳癌、前列腺癌、结肠直肠癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌和黑素瘤。本发明进一步对于治疗从VEGFA和胎盘生长因子(PLGF)减少中受益的病状有用。
文档编号A61K39/395GK101102786SQ200580018958
公开日2008年1月9日 申请日期2005年6月10日 优先权日2004年6月10日
发明者J·M·塞德鲍姆 申请人:瑞泽恩制药公司